Masarykova univerzita Ústav biochemie Přírodovědecká fakulta Kamenice 753/5, 625 00 Brno Skupina Environmentální Biotechnologie doc. Ing. Martin Mandl, CSc. doc. RNDr. Oldřich Janiczek, CSc. Mgr. Jiří Kučera, Ph.D. Hedvika Řičánková Masarykova univerzita Ústav biochemie Přírodovědecká fakulta Kamenice 753/5, 625 00 Brno Studium mikrobiálních anaerobních procesů v extrémně kyselém prostředí sulfidických minerálů Masarykova univerzita Ústav biochemie Přírodovědecká fakulta Kamenice 753/5, 625 00 Brno Téma bakalářské práce Neznámé cytochromy typu c bakterie Acidithiobacillus ferrooxidans ANOTACE Bakterie Acidithiobacillus ferrooxidans obsahuje hned několik cytochromů typu c, jejichž syntéza je regulována zejména v  závislosti na energetickém substrátu. Mezi nejvíce probádané cytochromy tohoto bakteriálního druhu patří Cyc1 a Cyc2, jež jsou kódovány rus operonem a účastní se aerobní respirační dráhy oxidace železa. Genomová sekvence A. ferrooxidans nicméně obsahuje i jejich dva paralogní geny kódující zatím nepopsané cytochromy c ve  značné vzdálenosti od rus operonu. Nedávná studie naznačila, že tyto cytochromy jsou syntetizovány pouze během anaerobního růstu a mohly by tak být součástí anaerobní respirační dráhy redukce železa. Cílem práce je bioinformatická analýza těchto cytochromů a první kroky v přípravě jejich rekombinantních proteinů v bakterii E. coli. Literatura Yarzabal et al. (2002) FEMS Microbiol Lett, 209.2, 189–95. Vedoucí: doc. RNDr. Oldřich Janiczek, CSc. Konzultant: Mgr. Jiří Kučera, Ph.D. Masarykova univerzita Ústav biochemie Přírodovědecká fakulta Kamenice 753/5, 625 00 Brno Respirační komplex oxidace železa AFE_3153 Cytochrom c (Cyc2) AFE_3152 Cytochrom c552 (Cyc1) FUNKCE - OXIDACE ŽELEZA AFE_1428 Cytochrom c (Cyc4) AFE_1429 Cytochrom c552 (Cyc3) Exprese Cyc4 a Cyc3 pouze během anaerobní oxidace síry spojené s redukcí železa FUNKCE - REDUKCE ŽELEZA? Masarykova univerzita Ústav biochemie Přírodovědecká fakulta Kamenice 753/5, 625 00 Brno Metodika Neznámé cytochromy typu c bakterie Acidithiobacillus ferrooxidans Bioinformatická analýza genu cyc3 a cyc4 Kultivace A. ferrooxidans CCM4253 Izolace chromosomální DNA PCR aplifikace genu cyc3 a cyc4 Klonování do vektoru pET-32 (E. coli BL21)