B6492 Velké praktikum z molekulární biologie 2

Přírodovědecká fakulta
jaro 2001
Rozsah
0/6/0. 7 kr. Ukončení: kz.
Vyučující
prof. RNDr. Roman Pantůček, Ph.D. (cvičící)
doc. RNDr. Vladislava Růžičková, CSc. (cvičící)
prof. RNDr. Jan Šmarda, CSc. (cvičící)
Garance
prof. RNDr. Roman Pantůček, Ph.D.
Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta
Kontaktní osoba: prof. RNDr. Roman Pantůček, Ph.D.
Předpoklady
NOW ( B6400 Metody molekulární biologie )
Omezení zápisu do předmětu
Předmět je určen pouze studentům mateřských oborů.

Předmět si smí zapsat nejvýše 20 stud.
Momentální stav registrace a zápisu: zapsáno: 0/20, pouze zareg.: 0/20
Mateřské obory/plány
Cíle předmětu
Izolace a příprava cizorodé genomové DNA pro klonování (izolace fragmentu DNA z agarózového gelu; stanovení koncentrace a čistoty DNA spektrofotometricky; štěpení cizorodé DNA a vektoru vhodnými restrikčními endonukleázami). Klonování ve vektorech řady pUC (defosforylace konců vektoru alkalickou fosfatázou; ligace vektorové a cizorodé DNA T4 DNA ligázou; příprava kompetentních buněk E. coli DH5a pro transformaci; transformace kompetentních buněk; identifikace rekombinantů na ampicilinových plotnách; analýza klonů). Ultracentrifugace v hustotním gradientu (příprava preformovaného sacharózového gradientu; purifikace fágových části ultracentrifugací v gradientu CsCl). Analýza bakteriálního genomu - identifikace specifických genů pomocí hybridizace a PCR, RFLP-fingerprinting. Izolace bakteriální DNA z různých kmenů Staphylococcus aureus. DNA hybridizace (neradioaktivní značení DNA digoxigeninem, příprava genově specifické sondy; příprava roztoků pro hybridizaci; Southernův přenos DNA na hybridizační membránu; hybridizace DNA se značenou sondou; imunologická detekce). PCR (polymerázová řetězová reakce) (optimalizace primerů; identifikace genů pro koagulázu, TSST-1 toxin a rezistence k meticilinu; RAPD-PCR). Pulzní gelová elektroforéza (příprava vzorků; štěpení vzorků restrikční endonukleázou SmaI; pulzní elektroforéza). Sekvencování DNA (teoretický výklad - různé metody, zpracování sekvencí DNA a proteinů na PC; příprava denaturačního polyakrylamidového gelu pro sekvencování).
Další komentáře
Předmět je vyučován každoročně.
Výuka probíhá každý týden.
Nachází se v prerekvizitách jiných předmětů
Předmět je zařazen také v obdobích jaro 2000, jaro 2002.