1
Metabolismus proteinů
(Jaroslav Masopust)
Proteiny spolu s nukleovými kyselinami jsou základními biomolekulami tvořícími podstatu
živé hmoty na této planetě. Po chemické stránce to jsou lineární, nevětvené polymery
sestávající z kombinace 20 různých α-aminokyselin, jejichž uspořádání je zakódováno v
deoxyribonukleové kyselině buněčného genomu. Velikost jejich molekul se pohybuje od
10 000 až do několika milionů. Jejich funkce v živých organismech je velmi rozmanitá a
nezastupitelná. Jsou strukturními složkami všech buněk, mají účinky katalytické (většina
enzymů jsou proteiny), jako protilátky jsou součástí imunitního obranného mechanismu,
přenášejí a skladují malé molekuly a ionty, jsou účastny v regulačních systémech organismu
jako hormony, cytokiny a jejich receptory, kontrolují genetickou expresi v podobě různých
signálních molekul, zprostředkovávají interakci mezi buňkami apod.
Bílkoviny jsou proto základní složkou potravy. Dospělý člověk potřebuje denně v průměru
80–90 g hodnotných proteinů tj. takových, které obsahují všechny potřebné esenciální
aminokyseliny. Denní metabolický obrat bílkovin je podstatně větší než jejich příjem
potravou, činí v průměru 275 g, z toho 75 g proteinů vzniká ve sliznici střevní, 120 g se tvoří
z cirkulujících aminokyselin a 80–90 g se resyntetizuje ze vstřebaných aminokyselin z
proteinů v potravě.
Trávení bílkovin začíná v žaludku a je dokončeno ve střevě za účasti společného působení
řady proteolytických enzymů, při čemž vznikají stalé menší fragmenty proteinové molekuly.
Na konec vzniklé tri- a dipetidy jsou štěpeny příslušnými peptidasami v kartáčovém lemu
buněk sliznice tenkého střeva až na jednotlivé aminokyseliny. Aminokyseliny se vstřebávají
z lumen střeva do slizniční buňky tenkého střeva především v kotransportu s Na+
na
apikálním konci střevního epitelu. Bylo prokázáno nejméně 6 různých Na+
-dependentních
přenašečů aminokyselin v apikální membráně kartáčového lemu. Tyto přenašeči mají
překrývající specifitu pro různé aminokyseliny. Z nitra buněk se dostávají aminokyseliny ven
prostřednictvím přenašečů usnadněné difuze.
Další metabolismus proteinů je metabolismem aminokyselin. Jako základní složka potravy
aminokyseliny netvoří v organismu energetickou zásobu. Nadbytečný přívod nemůže
organismus skladovat jako je tomu u sacharidů ( kupř. jaterní a svalový glykogen) nebo tuků
( triacylglyceroly v tukové tkáni ) a proto jsou metabolizovány až na konečné produkty,
kterými je urea a oxid uhličitý. Buňky však musí mít malou , ale nezbytnou pohotovostní
zásobu volných aminokyselin, které potřebuje především pro výstavbu buněčných proteinů.
Tato pohotovost představuje asi 120 g aminokyselin (u zdravého dospělého člověka); což činí
1 % celkového obsahu aminokyselin vázaných v proteinech. Hladina aminokyselin v plasmě
je poměrně nízká (v průměru 3, 2 mmol/l), což znamená, že metabolický obrat volné
aminokyseliny je řádově obdobný jako obrat glukosy nebo mastných kyselin. Hladina
aminokyselin v krevní cirkulaci zůstává pozoruhodně stabilní, ačkoliv po jídle obsahujícím
proteiny stoupne o 30 – 100%. Za lačnění (i protrahovaném) nikdy neklesne pod určitou
normální hodnotu, protože se stále doplňuje. Plasmatické proteiny, především albumin, jsou
hydrolyzovány intracelulárními proteinasami a jejich aminoskupiny jsou reutilizovány. Tkáně
s rychlým metabolickým obratem jako jsou játra, pankreas nebo střevní sliznice mohou
uvolnit své proteiny rychle. Kosterní svalstvo uvolňuje proteiny pomaleji, ale vzhledem k
tomu, že tvoří 20 % celkového proteinového rezervoáru má na uvolňování v době potřeby
největší podíl. Existuje určitý tkáňový “pool” aminokyselin; jeho množství v různých tkáních
je různé a tato variabilita se týká i jednotlivých aminokyselin. Je možno s určitou mírou
2
zjednodušení rozdělit aminokyseliny z tohoto hlediska do 3 skupin: V první je aspartát,
glutamát, glutamin a taurin, jejichž koncentrace v cytoplasmě buněk je 10 -15krát vyšší než v
plasmě; v druhé skupině (početně největší) jsou aminokyseliny, jejichž koncentrace
intracelulární se blíží koncentraci v krevní cirkulaci; třetí skupinu tvoří aminokyseliny s
větveným řetězcem (leucin, isoleucin, valin), jejichž koncentrace v buňkách je nižší než v
plasmě a dále methionin a tryptofan, jejichž nitrobuněčný cytoplasmatický obsah je velmi
nízký
Tab. 1: Počet enzymů potřebných pro syntézu aminokyselin
(v závorce písmenový symbol dané aminokyseliny)
Nutričně esenciální (ev semiesenciální) Nutričně neesenciální
Thr (T) 6 Ala (A) 1
Met (M) 5 Asp (D) 1
Lys (K) 8 Asn (N) 1
Ile ( I ) 8 Glu (E) 1
Val (V) 1 Gln (Q) 1
Leu (L) 3 Hyl 1 (z Lys)
Phe (F) 10 Hyp 1 (z Pro)
Trp (W) 5 Pro (P) 3
Ser (S) 3
Gly (G) 1
Arg (R) 7 Cys (C) 2
His (H) 6 Tyr (Y) 1
Z biologického hlediska je potřebných všech 20 základních aminokyselin, které tvoří
primární strukturu proteinů v organismu. Z tohoto počtu 8 si nedokážeme syntetizovat a musí
být přijaty potravou; byly nazvány esenciální (nezbytné). Druhá skupina, neesenciální, může
být syntetizována zdravým dospělým jedincem. Za určitých okolností jako je zvýšená potřeba
v období růstu nebo v rekonvalescenci ev. u některých onemocnění (renální selhání, ale také
maligní nádorová onemocnění) se stávají některé neesenciální aminokyseliny deficitní; jedná
se především o arginin (prekurzor radikálu oxidu dusnatého), histidin, dále je to cystein,
glycin, tyrosin a glutamin; navíc ještě taurin. Tyto aminokyseliny dostaly název
semiesenciální nebo podmíněně esenciální. Toto rozdělení vzniklo v průběhu fylogeneze;
trvalý přísun některých aminokyselin v potravě umožnil je nevytvářet z jednoduchých látek
náročnou biosyntézou vyžadující metabolickou energii a přítomnost řady enzymů. Tato
neschopnost se zafixovala geneticky.
2. Výměna cirkulujících aminokyselin mezi jednotlivými orgány.
Za normálních okolností (u zdravého jedince) neustálý tok aminokyselin mezi játry a dalšími
orgány zajišťuje trvalou dostupnost utilizovatelného dusíku (Obr. 1). Do jater je většina
dusíku transportována z jiných tkání ve formě glutaminu nebo alaninu.
Vstřebané aminokyseliny po jídle se dostávájí nejprve portálním oběhem do jater, kde jsou
metabolizovány následovně: (a) neesenciální aminokyseliny jsou kompletně hepatocyty
extrahovány; esenciální mají dvojí osud: Fenylalanin, lysin, methionin, threonin, tryptofan a
histidin jsou v hepatocytech katabolizovány nebo podle potřeby organismu uvolňovány do
krevní cirkulace. Aminokyseliny s rozvětveným řetězcem (valin, leucin, isoleucin) jsou
extrahovány jen malým dílem a většina se dostává do systémového oběhu (asi 70% všech
aminokyselin opouštějících játra). Kosterní svalstvo je hlavním orgánem, který větvené
aminokyseliny metabolizuje (Využívá je v myofibrilárních proteinech).
3
LEDVINA
MOZEK
SVALY
střevo
játra
TUMOR
výživa
odpad močí
alanin
glutamin
větvené
AK
valin
krevní
cirkulace
V době lačnění dochází k uvolňování aminokyselin ze svalů a plic. Více než 50%
aminokyselin uvolňovaných ze svalů tvoří alanin a glutamin; vznikají z pyruvátu respektive z
glutamátu. Aminoskupina přenášená na prekurzory těchto aminokyselin pochází z větvených
aminokyselin. Do jater se vrací z kosterního svalstva především alanin, který po oxidativní
deaminaci dává pyruvát a je tak hlavním zdrojem novotvořené glukosy při glukoneogeneze
(alanin-glukosový cyklus) (Obr. 2). Vylučování urey močí je mírou glukoneogeze z alaninu v
játrech. Ten sem přichází z kosterního svalstva. Infúze 100-120 g glukosy denně u pacientů v
těžkém stavu ušetří 2/3 svalových proteinů, jejichž aminokyseliny (alanin) slouží při
nedostatku glukosy jako substrát pro glukoneogenezu. Kromě toho podaná glukosa podněcuje
sekreci insulinu, který snižuje katabolismus proteinů. Do střevní sliznice se dostává ze svalů
glutamin, kde slouží částečně jako zdroj energie (po přeměně na glutamát a 2-oxoglutarát,
který je součástí citrátového cyklu). Glutamin, který přichází do ledvin, je zdrojem amonných
iontů vylučovaných do moči. Glutamin však je též důležitým substrátem pro rostoucí nádor.
(viz dále).
Přenos aminokyselin přes buněčnou membránu je zprostředkován několika transportními
systémy, zčásti sdruženými s transportem sodíkových iontů. Jeden z těchto systémů navržený
Alton Meisterem vysvětluje přenos prostřednictvím dipeptidu glutamové kyseliny. V tomto
mechanismu slouží glutathion (=γ-glutamylcysteinylglycin) jako donor γ-glutamylové
skupiny :
aminokyselina + glutathion → γ-glutamyl-aminokyselina + cysteinylglycin
. Z γ-glutamylového komplexu je aminokyselina ihned hydrolyzována a glutathion je
resyntetizován z cysteinylglycinu. Enzymem, který katalyzuje tuto reakcí je γ-glutamyltransferasa
lokalizovaná v membráně. Substrátem mohou být všechny základní aminokyseliny
vyjma prolinu. Podobným způsobem mohou být přenášeny i některé dipeptidy. Tento
transportní mechanismus se nazývá γ-glutamylový neboli Meisterův cyklus. V cytoplasmě se
jeho katalýzy účastní další enzymy: dipeptidasa (2), 5-oxoprolinasa (3),
γ-glutamylcysteinsynthasa (4) a γ-glutamylcysteinylglycinsynthasa (5). Transport potřebuje
energii (2 molekuly ATP) (Obr. 3).
4
AMINOKYSELINA (vně membrány)
GSH
Pi+ADP
Cys-Gly
Gly
Cys
ATP
γ-glutamylcystein
glutamát
Pi+ADP
ATP 5-oxoprolin
AMINOKYSELINA
(uvnitř buñky)
γ-glutamyl-aminokyselina
(dipeptid)
γ-glutamyltransferasa
5
4
3
2
3. Katabolismus aminokyselin.
Odbourávání aminokyselin, a to jak přijatých potravou, tak vytvořených v organismu,
(Obr. 4) začíná odstraňováním amino-skupin (oxidační deaminace) a pokračuje metabolizací
uhlíkového skeletu
Tělové proteiny
R.CH2.NH3
+ R.CH R.CO.COO-
NH3
+
COO-
Neproteinové
dusíkaté sloučeniny
+ CO2 (aminokyselina) + NH3
+
dekarboxylace deaminace (oxokyselina)
(amin)
K odstranění α-NH2-skupiny dochází prostřednictvím transaminace, při níž se aminoskupina
přenáší na α-ketokyselinu za vzniku α-oxokyseliny a nové aminokyseliny. Tyto reakce jsou
katalyzovány specifickými aminotransferasami; jako kofaktor zde působí pyridoxal-5-fosfát.
Většina aminokyselin ve druhém stupni využívá jako substrát pouze 2-oxoglutarát (někdy též
oxalacetát), takže konečných produktem je glutamát (nebo aspartát), které mohou být
vzájemně přeměňovány účinkem glutamát-aspartátaminotransferasy. Glutamát je za pomoci
glutamátdehydrogenasy (GMT) oxidačně deaminován v mitochondriích. Jako redoxní
koenzym je používán jak NAD+ tak NADP+. Reakce je inhibována GTP a aktivována ADP;
je téměř v rovnováze (AG ≅ 0). Rychlost a směr reakce jsou regulovány koncentrací substrátů
a produktů. V rovnováze je zvýhodněna tvorba glutamátu před uvolněním amoniaku :
5
+H2O
glutamát + NAD(P)+
↔ α-iminoglutarát + H+
+ NAD(P)H ↔ 2-oxoglutarát + NH4
+
Tento rovnovážný stav je fyziologicky velmi důležitý, protože napomáhá udržet velmi nízkou
koncentraci NH4
+
, resp. NH3, který je pro organismus toxický. Detoxikace NH4
+
u člověka se
děje dvěma způsoby:
První s menší kapacitou, ale s vysokou účinností je realizován amidací glutamátu na
glutamin v mitochondriích za přísunu energie, reakci katalyzuje glutaminsynthasa. Reakce je
velice favorizována ve prospěch syntézy glutaminu:
L-glutamát + NH4
+
+ Mg-ATP → glutamin + H2O + Mg-ADP + Pi
Vzniklý glutamin je převažující aminokyselinou v plasmě i v tkáních. Krevní cirkulací
probíhá přesun mezi orgány, především kosterním svalstvem, ledvinou, játry, střevem
a orgány v splanchnické oblasti. V ledvině je glutamin též hydrolyzován glutaminasou za
vzniku NH4
+
a glutamátu. Tato reakce nevyžaduje přítomnost nukleotidů (ATP, ADP).
Amonný ion je vylučován z tubulárních buněk do moči a podílí se tak na regulaci
acidobazického metabolismu. Druhý způsob detoxikace NH4
+
probíhá v játrech v cyklu tvorby
močoviny (ureageneze). Je kapacitně velmi výkonný a odstraňuje přebytečné NH4
+
ionty
přicházející z krevní cirkulace, ale též ze splanchniku cestou vena portae. Do cyklu
nevstupuje NH4
+
přímo, ale prostřednictvím karbamoylfosfátu, který vzniká v mitochondriích
z NH4
+
, HCO3
a
dvou molekul Mg-ATP za katalýzy karbamoylfosfátsynthetasy I. Existuje
ještě cytosolová karbamoylfosfátsynthetasa II, která využívá jako donor dusíku glutamin a
podílí se na syntéze pyrimidinů (důležité pro rostoucí tkáně). V cyklu tvorby močoviny
reaguje karbamoylfosfát s ornithinem (ornithin-karbamoyl-transferasa) ze vzniku citrulinu,
který s aspartátem za přísunu energie z ATP poskytuje argininosukcinát
(argininosukcinátsynthasa); ta je rozložena na fumarát a arginin (argininosukcinátlyasa);
arginin je pak hydrolyzován (arginasa) na močovinu a ornithin. Močovinový cyklus je spojen
s citrátovým cyklem jednak přes fumarát (z argininosubstrátu) a jednak přes 2-oxoglutarát, z
kterého vzniká transaminací aspartát potřebný pro tvorbu argininosukcinátu.
Regulace močovinového cyklu se děje hned v prvním kroku při vzniku karbamoylfosfátu za
katalýzy mitochondriální karbamoylfosfátsynthasy I, která je allostericky aktivována
N-acetylglutamátem.
Poruchy ureageneze
Dědičné metabolické poruchy vznikají defektem ureagenetických enzymů. Onemocnění se
projevuje většinou záhy po narození nebo v kojeneckém věku. Hlavním laboratorním
příznakem je hyperamonemie. V klinickém obraze je zvracení, odmítání potravy s proteiny,
intermitentní ataxie, zvýšená dráždivost, letargie, mentální retardace.
Patří sem:
- Hyperamonemie typ I (deficit karbamoylfosfátsynthetasy)
- Hyperamonemie typ II (deficit ornithintranskarbamoylasy) (zvýšení glutaminu v krvi,
moči, moku)
- Citrulinemie (deficit argininosukcinátsynthetasy) (velké množství citrulinu v moči - 1 až
2g/den)
- Argininosukcinátová acidurie (defekt argininosukcinasy)
- Hyperargininemie (defekt arginasy)
6
4. Katabolismus uhlíkového skeletu aminokyselin
Tento metabolismus vyúsťuje především v tvorbu intermediárních produktů citrátového
cyklu, čímž je umožněna interkonverze uhlíkového skeletu aminokyselin na skelet glukosy
(glukoneogeneze) nebo ketolátek (ketogeneze) ev. cholesterolu a lipidů (lipogeneze). Podle
výsledných produktů můžeme aminokyseliny dělit na glukogenní (14 aminokyselin) , jedna je
pouze ketogenní (Leu) a 3 jsou glukogenní i ketogenní (Ile, Phe, Tyr). Ne zcela vyjasněn
zůstává v tomto ohledu osud tryptofanu a lysinu. Význam glukogenních aminokyselin spočívá
v tom, že mohou být v době nedostatku glukosy v buňce jejím zdrojem (glukoneogeneze) pro
správnou funkci citrátového cyklu.
Do jisté míry specifický metabolismus prodělává lysin. Intaktní molekula, tj. s oběma
aminoskupinami ( α, ε ) reaguje s 2-oxoglutarátem za vzniku sacharopinu, který po hydrolýze
a dehydrogenaci dává glutamát a α -aminoadipát. Aminoskupina v poloze ε se tak přenese též
do polohy α. L-α-aminoadipát dává transaminací 2-oxoadipát a dále pak glutaryl-CoA.
Specifické postavení v metabolismu mají také aminokyseliny s rozvětveným řetězem (valin,
leucin a isoleucin). První dva počáteční kroky jsou společné : transaminací vznikají příslušné
2-oxokyseliny, které po oxidační dekarboxylaci poskytují příslušné α,β-thioestery
nenasycených acyl-CoA. Tyto jsou pak metabolizovány samostatně, valin dává sukcinylCoA,
isoleucin propionyl CoA a acetyl-CoA, leucin pak β-hydroxy-β-methyl-glutaryl-CoA,
který je prekurzorem jednak ketolátek (acetoacetát), jednak mevalonátu , tedy prekurzoru
cholesterolu a polyisoprenoidů. Rozvětvené aminokyseliny mohou sloužit jako energetický
substrát i u stavů, kde již vázne utilizace glukosy a mastných kyselin. (Obr.).
Svým způsobem má zvláštní postavení alanin, který je bezprostředním prekurzorem pyruvátu
a je členem důležité cyklické výměny alaninu a glukosy mezi kosterním svalstvem a játry
napojeným i na výměnu laktátu a glukosy mezi těmito orgány (alanin-glukosový a glukosalaktátový
cyklus). Oba cykly slouží k obnově dodávky glukosy pro tkáně, které ji potřebují
jako hlavní zdroj energie v určitých situacích.
7
Podobně i glutamin slouží k dodávce energie pro rychle proliferující tkáně jako je sliznice
střevní a buňky imunitního systému. Z jater se dostává glutamin krevní cirkulací do sliznice
tenkého střeva, kde uhlíkový skelet slouží jako hlavní energetický substrát. Oxidují se však
pouze 2 uhlíky a z pětiuhlíkového glutaminu vzniká tříuhlíkový alanin, který se vrací
portálním oběhem do jater (glutaminový cyklus) (Obr. 6)
Moč
NH4
+ NH4
+
GLU GLN
2-oxoglutarát
CO2
Ledvina
Krev
Portální cirkulace
GLU
NH4
+ ATP
ADP+Pi
GLN
Játra
Lumen střeva
Sliznice oxoglutarát
GLN GLU
GLN GLU
ALA
GLN
proteiny
4.1. Metabolismus aminokyselin obsahujících síru (metabolismus homocysteinu)
Přeměna aminokyselin obsahujících síru je propojena s řadou důležitých biochemických
reakcí jako je methylace (prostřednictvím S-adenosylmethioninu) a remethylace
(prostřednictvím tetrahydrofolátu), dále antioxidační reakce (glutathion) a “pufrování” redox
potenciálu intracelulárních sulfhydrylových skupin. Esenciální aminokyselinou je methionin,
který s ATP dává velmi reaktivní S-adenosylmethionin, předávající CH3-skupinu řadě
akceptorů (kupř. fosfatidylethanolamin → fosfatidylcholin, noradrenalin → adrenalin,
glykocyamin → kreatin, RNA a DNA → methylované RNA a DNA); vzniká tak
homocystein, centrální metabolit, který může být jednak remethylován na methionin
(donorem CH3- je opět tetrahydrofolát), jednak reakcí se serinem může přejít na
cystathionin; ten se pak rozkládá na homoserin a cystein; oxidací cysteinu (přes
cysteinsulfinát) vzniká taurin (aminokyselina tvořící vysoký podíl intracelulárních volných
aminokyselin zvláště v játrech kosterním svalstvu a myokardu).
Za normálních okolností se udržuje vyvážená nízká koncentrace homocysteinu intracelulárně,
tímže je buď remethylován zpět na methionin nebo metabolizován transsulfurační cestou. Při
poruše tohoto vyváženého metabolismu dědičně podmíněnou alterací participujících enzymů
(vitamin B6-dependentní cystatathionin-β-synthasy (transsulfurační cesta) nebo
methylentetrahydrofolát-reduktasy či vitamin B12-dependentní methionin-synthasy
(remethylační cesta). Genetický defekt (s autosomálně recesivní dědičností) se klinicky
projevuje jako hereditární homocystinurie s výraznou hyperhomocystinemii a dalšími
charakterickými příznaky. Existuje však mírná hyperhomocystinemie jako nezávislý rizikový
faktor pro předčasný výskyt ischemické choroby srdeční, cerebrovaskulárních příhod nebo
onemocnění periferních cév. Zatímco u dědičné homocystinurie se hladina homocysteinu v
plasmě pohybuje kolem 50–500 µmol/l, u mírné hyperhomocysteinemie to je 15–25 µmol/l
(normální hodnoty: 5–15 µmol/l).
8
4.2. Metabolismus argininu a vznik NO•
Obr.: Vznik volného radikálu oxidu dusnatého (NO) z argininu a jeho účinek na vazodilataci
arginin + NADPH + O2 NADP+ + citrulin + NO
NO-synthasa
guanylátcyklasa
GTP cGTP
relaxace hladkého
svalstva cév
VAZODILATACE
Protein (v potravě)
methionin
HOMOCYSTEIN
cystathionin
cystein
sulfát
S-adenosylmethionin
S-adenosylhomocystein
tetrahydrofolát
5-methyltetra-
hydrofolát
5,10-methylentetra-
hydrofolát
serin
glycin
1
2
3
4
5
6
serin
2-oxoglutarát
1 = methionin-adenosyltransferasa
2 = S-adenosylhomocysteinhydrolasa
3 = cystathionin-β-synthasa (B6)
4 = γ-cystathionasa (B6)
5 = methioninsynthasa (B12)
6 = methylentetrahydrofolátreduktasa
Folátový
cyklus
Methioninový
cyklus
Transsulfurace
Demethylace
9
4.3. Metabolismus větvených aminokyselin
Leucin, isoleucin, valin
Tyto větvené aminokyseliny mají významný vztah k mozkové tkáni. Vychytávání valinu
mozkem převyšuje všechny ostatní aminokyseliny. Oxidace leucinu, isoleucinu a valinu je v
mozku 4 krát větší než v játrech. Mozek je primárním místem jejich utilizace v
postabortivním stadiu. Degradace probíhá v prvním stupni transaminací za katalýzy
společného enzymu.
5. Přeměna aminokyselin na specializované biologicky důležité
produkty.
Kromě toho, že jednotlivé hlavní aminokyseliny tvoří primární strukturu proteinů, při níž
záměna jedné aminokyseliny za jinou může vést k výrazným biologickým změnám alterované
bílkoviny, jsou aminokyseliny nutné k biosyntéze jiných fyziologicky důležitých produktů
jako jsou puriny, pyrimidiny, sloučeniny hemu, hormony, neurotransmitery a další biologicky
aktivní peptidy .
Hem
sukcinyl-CoA + glycin → δ-aminolevulát → porfobilinogen → porfyriny
Nukleotidy
glycin, glutamin, aspartát, amino N → purinové a pyrimidinové nukleotidy
Biogenní aminy
fenylalanin, tyrosin → katecholaminy
histidin → histamin; tryptofan → serotonin; glutamát → 4-aminomáselná kyselina (GABA)
Polyaminy
arginin → ornithin → polyaminy
Kreatinfosfát
arginin → glykocyamin (guanidoacetát) → kreatinfosfát
LEUCIN, VALIN, ISOLEUCIN
(1)
odpovídající β-ketokyselina
(2)
CO2 + odpovídající acyl CoA-thioester
odpovídající β-nenasycený acylCoA-thioester
Val Leu Ileu
Sukcinyl-CoA -hydroxy- propionyl-CoA
-methylglutaryl- + acetyl-CoA
-CoA
(2) Blok způsobuje chorobu "javorového sirupu"
(3) Blok způsobuje isovalerovou acidemii
10
Glutathion
glutamát + cystein + glycin → γ-glutamylcysteinylglycin
Radikál oxidu dusnatého (NO•)
arginin → NO
Foláty
pteroová kyselina + glutamát → tetrahydrofolát, donory jednouhlíkových zbytků
Peptidové hormony, enzymy
(všechny aminokyseliny)
Signální peptidy, receptory
(všechny aminokyseliny)
6. Dědičné poruchy metabolismu aminokyselin
Geneticky podmíněné defekty v enzymových systémech katalyzujících odbourávání
aminokyselin způsobují řadu chorobných stavů. Jejich odhalení má význam pro nasazení
správné terapie (především vysazení té sloučeniny nebo jejich prekurzorů v dietě, jejichž
metabolismus je narušen). Zabrání se tak často ireversibilnímu poškození některých orgánů.
Fenylalanin
* Hyperfenylalaninemie
V současné době se rozlišuje 8 typů, které se liší jak klinickým průběhem závažností) tak ev.
terapií.
Tab.: Typy dědičných hyperfenylalaninemií
Typ Syndrom Defekt Terapie
I Fenylketonurie chybění fenylalanin
hydroxylasy
dieta s nízkým
fenylalaninem
II Persistentní hyper-
fenylalaninemie
snížení žádná nebo jen občasná
dietoterapie
III Přechodná mírná
hyperfenylalaninemie
opoždění ve vyzrávání
fenylhydroxylasy
jako u typu II
IV Nedostatečnost
dihydropteridin-
reduktasy
Nedostatek nebo
chybění enzymu
DOPA,5-hydroxy-
tryptofan
V Abnormální funkce
dihydrobiopterinu
Defekt syntézy
dihydrobiopterinu
jako u typu IV
VI Persistentní hyper-
fenylalaninemie
? katabolismus tyrosinu snížení dodávky Phe v
dietě
VII Přechodná tyrosinemie u
novorozenců
inhibice 4-hydroxy-
fenylpyruvátoxidasy
vitamin C
VIII Hereditární tyrosinemie Nedostatečnost:
1. 4-hydroxyfenyl-
pyruvátdeoxyge-
nasy
2. tyrosinaminotransferasy
v
cytoplasmě
3. fumarylacetoacetát
hydrolasy
↓ Tyr v dietě
↓ Tyr aplikace
glutathionu
Tyrosin
* Tyrosinemie Typ I (tyrosinosa)
Pravděpodobný defekt ve fumarylacetoacetáthydroxylase. U akutní formy kojenci mají
průjem, zvracejí, neprospívají. Neléčená končí fatálně (selhání jater) do 6-8 měsíců.
* Tyrosinemie Typ II
11
Pravděpodobně defekt v jaterní tyrosinaminotransferase. Obraz: oční a kožní poškození;
mírná retardace mentální. V moči kromě Tyr též metabolity.
* Neonatální tyrosinemie
Asi relativní deficit 4-hydroxyfenylpyruváthydroxylasy. Léčení dietou s nízkým obsahem
proteinů, benigní.
* Alkaptonurie
Defekt homogentisátoxidasy. Charakteristická moč, která stáním tmavne. Později
pigmentace kolagenní tkáně (ochronosis) a dále projevy artritidy.
Cystin
* Cystinurie (lépe: cystin-lysinurie). V moči kromě cystinu (20-30 krát více než je normál)
je zvýšen též lysin, arginin a ornithin. Porucha renální zpětné resorpce, diaminokyselin.
Hrozí nebezpečí cystinových močových kamenů. Pomáhá alkalinizace moče.
* Cystinosis (choroba z ukládání cystinu)
Jde o dědičné onemocnění , při kterém se cystinové krystaly ukládají v některých tkáních a
orgánech (především v retikuloendotelu). Je provázena generalizovanou
hyperaminoacidurií. Nebezpečí akutního renálního selhání.
* Homocystinuria
Je několik forem. Jde o poruchu remethylačního cyklu s defektem různých enzymů
(cystathionin-β -synthasa, methylentetrahydrofolatreduktasa apod.).
Některé formy jsou vitamin B 6 responzivní. Výživa dietou s nízkým obsahem methioninu a
zvýšeným množstvím cystinu zabrání vzniku patologických změn, je-li s ní započato hned
od narození.
Prolin
* Hyperprolinemie Typ I.
Jde o defekt prolindehydrogenasy. Není porušen katabolismus hydroxyprolinu.
* Hyperprolinemie Typ II
Porušena dehydrogenasa glutamát-γ-semialdehydu (společné pro hydroxyprolin).
Glycin
* Glycinurie. Má normální plasmatický glycin, ale výrazně vyšší v moči
* Primární hyperoxalurie
Jde o poruchu metabolismu glyoxalátu, který se mění na oxalát. Zvýšené vylučování je
příčinou oxalátových močových konkrementů už v dětství.
Lysin
Uhlíkový řetězec lysinu se metabolizuje na đ-aminoadipát a đ-ketoadipát přes sacharopin.
Jsou známy 2 poruchy:
* Periodická hyperlysinemie s hyperamonemií. Zvýšení lysinu nastává po požití bílkovin.
Hyperamonemie je důsledek kompetitivní inhibice jaterní arginasy.
* Persistentní hyperlysinemie bez hyperamonemie
Někteří pacienti jsou mentálně retardovaní. Není však hyperamonemie. Ani katabolity lysinu
nemusí být zvýšeny.
Tryptofan
Metabolizuje se tzv. kynurenin-anthranilátovou drahou.
* Hartnupova choroba
Je charakterizovaná pelagroidní kožní vyrážkou, intermitentní mozečkovou ataxií a mentální
retardací. Je zvýšený tryptofan a derivát indolacetátu.
12
6. Vylučování dusíkatých sloučenin ledvinami (močí)
Ledviny jsou hlavním orgánem, který vylučuje konečné produkty metabolismu
- močovinu jako konečný metabolit dusíku bílkovin. Urea tvoří při snížené dietě asi 80% N
vylučovaného močí. Urea podléhá glomerulární filtraci a tubulární zpětné resorpci (v
proximálním tubulu se isotonicky vstřebává zpět a 50% glomerulem profiltrované urey spolu
s H2O), v sestupném raménku Henleovy kličky se část urey vylučuje do lumen; ve sběrném
kanálku pak nastává další zpětná resorpce.
Zvýšení urey v séru může proto nastat při omezeném průtoku krve ledvinou (kupř.
hypovolemie při dehydrataci), aniž by byla ledvina organicky poškozena (tzv. prerenální
uremie)
- kreatinin jako konečný metabolit energetického svalového metabolismu (z kreatinfosfátu).
Kreatinin podléhá pouze glomerulární filtraci; v tubulech nedochází ke zpětné resorpci
(rozdíl od urey); pouze malé množství se secernuje (asi 10%); toto secernované množství
však stoupá, když je kreatinin v plasmě patologicky zvýšen a to až na 80 %. Vzestup v
plasmě však nastává až se sníží glomerulární filtrace na 50%. Stanovení tzv. clearance
endogenního kreatininu je mírou glomerulární filtrace, pakliže glomerulární filtrace není
nižší než 50%
- aminokyseliny podléhají glomerulární filtraci a v proximálním tubulu se resorbují zpět
(mechanismus resorpce je uskutečňován specifickým mechanismem, který, je-li narušen,
vede k hyperaminoacidurii)
- kyselina močová je konečným metabolitem metabolismu nukleových kyselin (purinů).
Podléhá glomerulární filtraci i tubulární zpětné resorpci a sekreci
- amoniak se vylučuje ve formě NH4
+ do moče v distálním tubulu (odstraňování H+ jako
důležitý regulační faktor acidobazické rovnováhy).
. Proteinová a energetická malnutrice
Nedostatečný příjem proteinů a energie v potravě vede jak k úbytku celkové tělesné hmoty
tak tukové tkáně, i když ne rovnoměrně. Proteinová a energetická malnutrice primárně
vzniká, když kvalita i kvantita výživy je dlouhodobě insuficientní. V některých rozvojových
zemích se vyskytuje endemicky, s prevalencí až 25%. Je to především problém tam, kde
hlavní složkou potravy jsou rostlinné proteiny s nízkou biologickou hodnotou za současné
vysoké incidence infekčních chorob. Při nedostatečném energetickém přívodu jsou oxidovány
proteiny jako energetický zdroj a nejsou využívány pro syntézu tělesných bílkovin. Klinickým
projevem u dětí v rozvojových zemích jsou to především dva syndromy: kwashiorkor a
marasmus.
• Kwashiorkor
Předpokládá se, že je způsobena selektivním proteinovým deficitem. Projevuje se malým
vzrůstem, edémem, hypoalbuminemií, steatózou jater, prezervací (uchováním) subkutánního
tuku.
• Marasmus
Je způsoben jak nedostatečným (nekvalitním) příjmem proteinů tak nedostatečným přívodem
kalorií. Je charakterizován zaraženým růstem, ztrátou tukové tkáně, generalizovaným
úbytkem svalové hmoty; nejsou však edémy.
Smíšené formy se vyskytují jak u dětí tak u dospělých.
Sekundární forma proteino-energetické malnutrice se vyskytuje i v průmyslově rozvinutých
zemích jako důsledek patologických stavů vedoucích k nedostatečnému příjmu výživy
vzhledem k potřebám organismu.
13
Hlavní příčiny mohou být:
1. Snížený perorální příjem
- anorhexie
- nauzea
- dysfagie
- bolest
- GIT obstrukce
2. Zvýšené ztráty výživných látek
- malabsorpce
- průjem
- krvácení
- glykosurie
- výrazný třes rukou
- špatná dentice
3. Zvýšená potřeba
- horečka
- infekce
- nádorové onemocnění
- větší chirurgické zákroky
Malnutrice se může vyvíjet pomalu (chronické částečné hladovění) nebo rychle na základě
těžké akutní choroby. U nekomplikovaného hladovění nebo částečného hladovění se
organismus dokáže postupně adaptovat.
Proteiny
Minimální denní potřeba proteinů u dospělého jedince činí 1g proteinu/kg/den tj u 70 kg
jedince 11 gN/den
U hyperkatabolických stavů (dle situace) 1,3–2,0 g aminokyselin/kg/den
Tab.: Nutriční obohacení určitými aminokyselinami (přídavky do běžných řízených diet)
Přídavek Metabolický význam Účinek
Glutamin Je energetickým zdrojem pro
enterocyty a imunocyty.
Potřebný pro hepatální
glutathion
Parenterální podání snižuje
infekciozitu a délku
hospitalizace pacientů po
transplantaci dřeně
Arginin Podporuje cytotoxicitu
lymfocytů prostřednictví NOradikálu.
Je substrátem pro
syntézu polyaminů, podporuje
proteosyntézu stimulací
růstového hormonu
Zvyšuje počet T-lymfocytů u
pacientů léčených
chirurgicky, snižuje délku
hospitalizace, urychluje
hojení ran
Větvené aminokyseliny Regulují v kosterním svalstvu
metabolismus svalových
proteinů. Jsou sníženy u
pacientů v katabolické fázi,
zvýšeny u hepatopatií
Suplementace snižuje výskyt
hepatální encefalopatie,
zvyšuje dusíkovou bilanci u
septických stavů
Sirné aminokyseliny Glutathion je hlavním
"zametačem" volných
radikálů v krvi. Taurin tvoří
konjugáty se solemi
žlučových kyselin. Karnitin
umožňuje transport mastných
kyselin do mitochondrií pro
β-oxidaci.
S-adenosylmethionin je
donorem CH3–skupiny pro
cholin a kreatin
Transulfurační metabolity
bývají vyčerpány u pacientů
na dlouhodobé parenterální
výživě. S-adenosylmethionin
snižuje nebezpečí cholestázy
14
Dusíková bilance
Existuje dynamická rovnováha mezi tvorbou (anabolismus) a odbouráváním (katabolismus)
tkáňových proteinů. U zdravých jedinců při vyvážené stravě je příjem dusíku a jeho výdej v
rovnováze. Za patologických situací vedoucích k poškození organismu, po chirurgických
zákrocích nebo při dlouhotrvajícím stresu dochází k metabolické odpovědi, při níž je převaha
katabolismu nad anabolismem. Vzniká negetivní dusíková bilance. Nejjednodušší přibližný
výpočet získáme porovnáním přívodu N obsaženého v proteinech s obsahem N močoviny
vyloučené za 24 hodin močí:
N–rovnováha (v g) = (přívod bílkovin /6,25) – (dU-urea v g) + 2,5
Proteinová rovnováha = příjem proteinů – ztráty proteinů (= /dU-urea v g + 4/ x 6,25)
Poznámka: Organismus není schopen skladovat proteiny do zásoby jako tomu je v případě glykogenu u
sacharidů nebo triacylglycerolů u tuků. Existuje pouze tzv. pohotovostní zásoba aminokyselin (pool), činící u
dospělého jedince asi 70–80 g, která je při hladovění vyčerpána v několika málo hodinách.
Doporučený minimální příjem proteinů za den u 70 kg jedince je 1g/kg hmotnosti, což odpovídá 11 g N/ za
24 h.
Tab. Ztráty dusíku a proteinů u různých pooperačních stavů dle Freye, 1975)
Chirurgický zákrok Ztráty N za 24 h (v g) Ztráty tělesných proteinů
(g/24 h)
Břišní operace 10–18 62,5–112,5
Resekce žaludku 15–20 93,75–125,0
Cholecystektomie do 15 do 93,75
Resekce plic do 22 do 137,5
Abdominální hysterektomie 6–15 37,5–93,75
Totální exenterace až 32 až 200
N–rovnováha (v g) = (přívod bílkovin /6,25) – (dU-urea v g) + 2,5
Proteinová rovnováha = příjem proteinů – ztráty proteinů (= /dU-urea v g + 4/ x 6,25)
Klinická biochemie některých plasmatických proteinů
Krevní plasma obsahuje několik stovek bílkovinných komponent, z nichž většina byla
identifikována, ale jen částečně určena jejich funkce. Z tohoto hlediska je můžeme rozdělit do
několika kategorií:
- Transportní proteiny (kupř. Albumin, transthyretin, transferin, globulin vázající thyroxin,
globulin vázající pohlavní hormony apod.)
- Proteiny akutní fáze (kupř. C-reaktivní protein, serum amyloid A, α1-antitrypsin , α1 kyselý
glykoprotein apod.)
- Proteiny účastnící se srážení krve (fibrinogen, koagulační faktory)
- Proteiny imunitního systému (imunoglobuliny)
- Proteiny s regulační funkcí (proteinové hormony, cytokiny apod)
- Proteiny a jejich fragmenty vyplavované z buněk a tkání při jejich degradaci nebo
poškození (nitrobuněčné enzymy, tumorové markery, membránové proteiny apod.)
Nejčastěji vyšetřované pro diagnostické účely jsou:
Proteiny akutní fáze se tvoří ve zvýšené míře v buňkách jaterního parenchymu až po
navození syntézy zánětlivou škodlivinou (syntéza de novo); tedy nejde o pouhé vyplavení ze
zásoby v jaterní tkáni. Indukce syntézy v hepatocytu má tento sled: nejprve se aktivuje RNAnukleotidyl-transferasa,
která uskutečňuje syntézu bílkoviny, přitom hypertrofuje
endoplasmatické retikulum a Golgiho komplex a nastává glykosylace polypeptid. řetězce.
Signál, kterým je jaterní buňka o zánětu informována, je vyplavení cytokinů
(především interleukinu 6, dále interleukinu 1 a tumorového nekrotického faktoru α). Každý z
nich indukuje syntézu různých proteinů.
15
Proteiny akutní fáze mají specifické funkce: Působí jako regulátory zánětlivého
procesu, který je vlastně výrazem tvorby granulační tkáně jako průvodní jev celulární
reparace a hojení. Zánětlivé proteiny se koncentrují v okolí zánětlivého ložiska. Toto
nahromadění podporuje lokální venózní vasodilataci. Působí jako mediátory různých
biologických reakcí (kupř. CRP nebo proteiny komplementu) nebo jako inhibitory (kupř. α1antitrypsin
nebo α1-antichymotrypsin) vázající proteolytické fermenty uvolněné z fagocytů, a
brání tak poškození tkání; mají též úlohu „zametačů“. CRP opsonizuje fragmenty nukleových
kyselin, sérumamyloid A protein podporuje vyčistění cholesterolových zbytků z rozpadlých
membrán a haptoglobin váže hemoglobin v plasmě při intravazální hemolýze;
imunomodulační účinek je přisuzován α1-kyselému glykoproteinu, jenž má určitou homologní
sekvenci s Ig, který je exprimován na membráně imunokompetentních buněk; některé
reaktanty akutní fáze kontrolují bílkoviny pojiva. α1-antitrypsin a α1-antichymotrypsin tvoří
depozity na nově vytvořených vláknech elastinu.
V průběhu zánětlivého procesu obvykle převažuje vylučování bílkovin z jater nad
jejich katabolismem, což vede ke vzestupu bílkovin akutní fáze. Netýká se to však všech
druhů bílkovin.
Z tohoto hlediska možno reaktanty akutní fáze rozdělit do tří kategorií.
A. Bílkoviny produkované rychleji, než jsou odbourávány (plasmatická koncentrace zvýšena):
– C-reaktivní protein,
– sérumamyloid A protein,
– kyselý α1-glykoprotein (orosomukoid),
– α1-antichymotrypsin,
– α1-antitrypsin,
– haptoglobin,
– ceruloplasmin,
– fibrinogen.
B. Bílkoviny produkované stejnou rychlostí jako odbourávané (plasmatická koncentrace se
mění málo):
– α2-makroglobulin,
– C3-složka komplementu.
C. Bílkoviny rychleji odbourávané než produkované (plasmatická koncentrace snížena):
– Transferin,
– transthyretin,
– albumin.
Některé fyzikálněchemické charakteristiky proteinů akutní fáze jsou uvedeny v tab.
Tab. :Fyzikálněchemické vlastnosti proteinů akutní fáze
Protein Mr ELFO
pohyblivosti
pI Obsah
sacharidů
( %)
Poločas
(den)
Orosomukoid 40 000 α1 2,7 45,0 2–3
α1-antitrypsin 54 000 α1 4,5 12,0 4
α2-
antichymotrypsin
68 000 α1 3,8–4,0 26,0
Haptoglobin 86 000
(Hp 1-1)
α2 4,1 16,5 4
Ceruloplasmin 135 000 α2 4,4 8,0 2–5
Fibrinogen 341 000 β–γ 5,5 2,5 4–6
C-reaktivní protein (21 500) γ(β) 6,4 0 1
16
Chování proteinů akutní fáze za fyziologických a patologických
stavů
Bílkoviny akutní fáze mají kromě svého účinku při zánětlivých procesech nebo při
jiných náhlých poškozeních tkání také některé účinky specifické; proto změna jejich
koncentrace v krevní plasmě může být u některých stavů odlišná. Co se týče rychlosti nástupu
a trvání změn, můžeme je rozdělit do čtyř skupin.
V první skupině jsou reaktanty akutní fáze s rychlou odpovědí, jako je C-reaktivní
protein, sérumamyloid A protein (ev. sérumamyloid P). Jejich vzestup nastává už po 6
hodinách a dosahuje maxima za 48 hodin. Vzestup může být až 1000násobný oproti
fyziologické hodnotě. Znamená to, že tyto reaktanty mají důležité postavení v reakci akutní
fáze a tím v obranném mechanismu jedince. Nebyl totiž popsán žádný případ s deficitní
syntézou.
Ve druhé skupině jsou proteiny, jejichž nástup i vrchol je o něco pozvolnější. K
prokazatelnému zvýšení dochází 12–24 hodin po poškození tkání a vrcholí za 72–96 hodin.
Návrat k normálním hodnotám je u nekomplikovaných případů za 18–21 dní. Patří sem α1-
antichymotrypsin,
α1-antitrypsin, haptoglobin a fibrinogen. Maximální vzestup je 2–4násobný.
Třetí skupina, zastoupená např. ceruloplasminem, C3-složkou komplementu, reaguje
ještě pozvolněji a maximální vzestup je obvykle 50–100 %.
Ve čtvrté skupině je pak kupř. transthyretin (prealbumin), transferin a albumin, které
se počítají jako negativně reagující reaktanty akutní fáze, u nichž se při poškození tkání
koncentrace
v krevní plasmě snižuje.
Tab. :Změny v koncentraci proteinů akutní fáze
Reaktant Patologické
zvýšení (krát)
Fyziologické
hodnoty ( g/l )
Typická
koncentrace při
zánětu ( g/l )
Rychlost
odpovědi
(hodiny)
CRP až 1000 0,00007–0,008 0,4 6–10
SAA až 1000 0,001–0,030 2,5 6–10
α1-antichymotrypsin 2–4 0,3–06 3,0 10
α1-antitrypsin 2–4 1,0–2,0 7,0
α1-kyselý
glykoprotein
2–4 0,5–1,4 3,0 24
Haptoglobin 2–4 1–3 6,0
Fibrinogen 2–4 2– 4,5 10
Ceruloplasmin 0,5 0,15–0,6 2,0
C-3 komplement 0,5 0,55–1,2 3,0 48–72
C-4 komplement 0,5 0,20–0,50 1,0
Vyšetření spektra reaktantů akutní fáze
I když spouštěcí mechanismus reakce akutní fáze je jednotný pro všechny vyvolávající
škodliviny, může být odezva v syntéze proteinů akutní fáze za různých okolností různá.
Reakci akutní fáze mohou ovlivnit tyto faktory:
a) Geneticky podmíněné defekty proteinů akutní fáze, např. PiZ-fenotyp u α1-antitrypsinu,
Hp0
-gen u haptoglobinu, Wilsonova choroba u ceruloplasminu.
b) Těhotenství nebo perorální kontraceptiva stimulují syntézu ceruloplasminu, fibrinogenu,
C-reaktivního proteinu, α1-antitrypsinu. Zvýšení v těchto případech může mylně budit
podezření ze zánětlivého onemocnění.
17
c) Doprovází-li reakci akutní fáze intravazální hemolýza, pak haptoglobin, který se váže na
volný hemoglobin, je rychle vychytáván v retikuloendotelu a degradován, tzn. není zvýšen,
ale naopak snížen. Podobná situace nastává, když chorobný proces navozující reakci akutní
fáze je doprovázen intravazální koagulopatií, při které se spotřebovává fibrinogen.
d) Zánětlivá onemocnění jater, která vedou k omezení proteosyntézy v hepatocytech, nejsou
provázena zvýšením některých proteinů akutní fáze v plasmě. Platí to především pro
haptoglobin, kyselý α1-glykoprotein a fibrinogen, naproti tomu α1-antitrypsin není tolik
ovlivněn. Pomáhá to při rozlišení akutní virové hepatitidy od cholangiolitidy, kde vzestup
haptoglobinu, kyselého α1-glyko-proteinu a fibrinogenu není omezen.
e) Terapie kortikoidy tlumí syntézu především fibrinogenu, takže v průběhu revmatické
horečky léčené těmito deriváty se hodnoty fibrinogenu (i sedimentace) rychle upravují, ale
hladina haptoglobinu a kyselého α1-glykoproteinu zůstává ještě zvýšená.
f) Při neléčené revmatické horečce jsou v akutním stadiu zvýšeny hodnoty zejména
fibrinogenu, dále haptoglobinu a kyselého α1-glykoproteinu, mnohem méně α1-antitrypsinu.
Význam stanovení jednotlivých reaktantů
C-reaktivní protein (CRP)
Jde o bílkovinu s elektroforetickou pohyblivostí β-globulinů o molekulové hmotnosti
110 000–140 000, která se skládá z pěti identických neglykolysovaných polypeptidových
podjednotek (molekulová hmotnost 21 000). Každá podjednotka může vázat Ca2+
. CRP patří
mezi tzv. pentraxiny, což je skupina proteinů účastnících se obrany organismu a vyskytující se
u všech obratlovců. CRP má schopnost aktivovat komplementový systém, váže se na různé
ligandy (např. polysacharidový obal pneumokoků C – odtud C-reaktivní protein, dále na
cholinové fosfatidy a některé polykationtové a polyaniontové proteiny z rozpadlých buněk).
Tím chrání organismus před škodlivým účinkem těchto nekrotických produktů. Aktivace
komplementu působením CRP se děje nejen klasickou, ale též alternativní cestou
(prostřednictvím „alternativní“ C3-konvertasy C3bBb, na rozdíl od klasické C3-konvertasy
C4b2a. Kromě toho CRP může působit i na thrombocyty účinkem na metabolismus
prostaglandinů. Takto může CRP regulovat akutní zánětlivé procesy. Bylo prokázáno, že
může bránit stimulaci T-lymfocytů a uvolňování lymfokinů. Dále může ovlivňovat
fagocytózu působením na granulocytové a monocytové makrofágy. Pravděpodobně jednou z
hlavních úloh je opsonizace fragmentů nukleových kyselin a histonů (vzniklých z chromatinu
při rozpadu vlastních i mikrobiálních buněk) a tím umožnění jejich rychlejšího odstranění –
zabrání se tak tvorbě autoprotilátek proti jaderným elementům.
Normální syntéza CRP (u stavů bez zánětu nebo nekrózy) činí 1–10 mg/24 h; při
reakci akutní fáze se toto množství zvyšuje až na 1000 mg/den. U chronických afekcí syntéza
může být omezena pravděpodobně sníženou tvorbou IL-1 v monocytech a makrofázích (kupř.
u lupus erythematodes, colitis ulcerosa, progresivní systémové sklerózy, leukemie).
Fyziologické hodnoty
Citlivými metodami bylo prokázáno, že CRP se vyskytuje v séru i za fyziologických
podmínek – v pupečníkovém séru průměrně 0,07 mg/l, u dospělých jedinců průměrně 1,3
mg/l s variačním rozmezím 0,068–8,2 mg/l. U novorozenců jsou hodnoty poněkud vyšší (3.
den až 15 mg/l), u kojenců do 10 mg/l.
Poznámka: Pomocí vysoce citlivých metod (EIA) bylo nalezeno zvýšení „fyziologických“ hodnot CRP
u mužů, kteří prodělali akutní infarkt myokardu (ale jsou už v klidové fázi – průměr 1,51 oproti 1,13 mg/l) nebo
mozkovou mrtvici na bázi ischemie (1,38 oproti 1,13 mg/l). Předpokládá se, že bazální hodnota CRP predikuje
riziko infarktu myokardu nebo mozkové mrtvice.
18
Patologické změny
Za patologických stavů však koncentrace CRP v séru může stoupnout až tisíckrát
(103
). CRP je dominující protein akutní fáze. U bakteriálních infekcí dosahuje CRP
nejvyšších hodnot 200–300 mg/l. Naproti tomu u nádorových onemocnění nebývá tak zvýšen
jako haptoglobin nebo α1-antitrypsin. Rovněž kupř. systémový lupus erythematodes má jen
malé nebo žádné zvýšení, na rozdíl od revmatoidní artritidy nebo polymyalgia rheumatica,
kde jsou hodnoty vysoké. Jeho vzestup po navození reakce akutní fáze (infekční noxa,
chirurgický výkon, infarkt myokardu) je velmi rychlý; maxima dosahuje za 24–48 hodin;
normalizace nastává během 4 dnů (nejsou-li přidruženy komplikace). U perinatální těžší
infekce (septikemie, meningitida, peritonitida) je CRP vždy zvýšen (více než 50 mg/l). Na
rozdíl od bakteriálních infektů nebývá virová infekce provázena zvýšeným CRP. Užitečné je
průběžné sledování hladiny CRP v séru. Úspěšná terapie antibiotiky se projevuje rychlým
poklesem; naproti tomu při neúspěšné léčbě zvýšení přetrvává.
Tab. : Hodnocení hladin CRP
(pokračování tabulky na následující straně)
Onemocnění CRP (mg/l) Patofyziologické poznámky
Těžká bakteriální infekce
(sepse)
až 200–300 Začátek 6–8 hod, maximum 24–48 h. Pokles
při úspěšné terapii.
Virová infekce ne více než 50
u velmi
těžkých;
obvykle 5–20
U 50 % není zvýšení; lze tak rozlišit virovou
pneumonii od bakteriální.
Revmatická horečka 15–100 Koreluje s aktivitou procesu.
Rychlý nástup, rychle odpovídá na terapii;
vzestup po normalizaci svědčí pro
komplikaci.
Nekryje se s FW (FW reaguje pomaleji).
Revmatoidní artritida nad 15
obvykle 50,
někdy
i 100
Výhodné je použít kombinaci stanovení CRP,
FW
a Fe/Cu (lepší informace o aktivitě procesu).
Osteoartritida nemá zvýšení (!).
Polymyalgia rheumatica obvykle nad 30
a více
Zvýšena i FW, koreluje s aktivitou. Terapie
hydrokortizonem
rychle snižuje.
Vysoké CRP odliší od jiných svalových
bolestí.
Juvenilní chronická
artritida
5–50 Zvýšení koreluje s aktivitou, ale ne tak dobře
jako
u dospělých.
Morbus Bechtěrev nad 15
obvykle více
Zvýšení ještě před klinickými obtížemi.
Koreluje s aktivitou.
Lupus erythematodes normální –
lehké↑
Vysoké hodnoty jsou podezřelé z přidružené
bakteriální infekce.
Psoriatická artropatie
Reiterův syndrom
nad 15 Koreluje s aktivitou.
Pseudodna má jen malé zvýšení.
Dna nemá zvýšení.
Morbus Crohn nad 15
obvykle více
Koreluje s aktivitou.
U colitis ulceroza nebývá zvýšení (rozdíl !).
Adnexitis obvykle nad 15 Při zánětu vždy zvýšen, FW jen u 80 %,
leukocyty
u 50 %.
Chorioamnionitis (u
těhotných)
nad 15 Při náhlé ruptuře vaku blan.
19
Onemocnění CRP (mg/l) Patofyziologické poznámky
Perinatální infekce 10–20
(v pupečníku)
Bakteriální infekce může způsobit velmi
vážný stav.
Klinika: u matky horečka 38 °C.
Novorozenec: tachypnoe, dyspnoe, apnoe,
teplotní nestálost, hladké napjaté břicho.
Meningitida
– virová
– tuberkulózní
– bakteriální
pod 20
20–60
nad 100
U virové často normální hodnoty.
Při úspěšné terapii do týdne normalizace
Akutní pankreatitida až 100 Při přetrvávájícím zvýšení 2 a více týdnů
předzvěst komplikací: cysty, pseudocysty.
Infarkt myokardu,
chirurgická
operace
15–50 Začátek vzestupu 6–8 h; maximum 24–36 h,
návrat
u nekomplikovaných případů po 1 týdnu.
U těžkých abdominálních operací bývá
maximum
3. den (50–150 mg/l). Při komplikacích
(infekce,
thrombóza, nekrózy) zvýšení přetrvává.
Nádorové onemocnění 5–100 Obvykle méně výraznější zvýšení, než je
zvýšení haptoglobinu a kyselého α1glykoproteinu.
Výraznější zvýšení ukazuje na
ev. metastázy. U M. Hodgkin
asymptomatická forma mívá 5–20 mg/l,
symptomatická
21–141 mg/l.
α1-antitrypsin (α1-AT; α1-proteinasový inhibitor, α1-PI)
α1-antitrypsin patří mezi skupinu plasmatických bílkovin s antiproteinasovým
účinkem. Je tvořen v játrech a vyznačuje se geneticky podmíněnými variacemi (Pi-systém),
jejichž alely v genetickém lokusu se označují PiM
, PiS
a PiZ
. Klinicky důležité jsou varianty
odpovědné za sníženou hladinu α1-AT v plasmě (defektní alely). Pi ZZ fenotyp (homozygot)
má pouze 10–15 % koncentrace α1-AT v plasmě, heterozygoti Pi ZM 50–60 % a Pi ZS méně
než 40 %. Akutní zánět (nebo jiný podnět reakce akutní fáze) může zvýšit syntézu α1-AT,
takže se může dostat až do normálního rozmezí (nikoli však výrazně nad horní hranici, jako je
tomu u nejobvyklejšího fenotypu Pi MM). Homozygotní nosiči Pi SS vykazují 50 % normální
koncentrace, heterozygoti Pi SM asi 80 %. Snížená koncentrace je u jedinců s alelovou
variantou Pi1
, úplně chybí u tzv. „nulové“ varianty Pi– –
.
Snížená koncentrace α1-AT u některých postižených jedinců má za následek
především výskyt primárního plicního emfyzému (chronická plicní obstrukční choroba).
Dalším typem onemocnění sdruženým s nedostatkem antitrypsinu je neonatální hepatitida
nebo cirhóza, dále někteří autoři uvádějí současný výskyt glomerulonefritidy nebo
revmatoidní artritidy. Hlavní funkcí α1-antitrypsinu je jeho schopnost inaktivovat proteinasy
uvolněné z lysosomů při rozpadu buněk do extracelulární tekutiny, je důležitým inaktivátorem
elastasy uvolněné z granul neutrofilních leukocytů.
Fyziologické rozmezí:
Novorozenci 1,45–2,70 g/l.
Dospělí 0,78–2,00 g/l.
20
Tab. : Patologické změny
Onemocnění (syndrom) α1-AT Patofyziologické poznámky
Akutní záněty ↑↑ Nespecifické záněty vedoucí k rozpadu
leukocytů, tkáňové nekróze a fagocytóze zvyšují
syntézu α1-AT v játrech se vzestupem v plasmě
(12–24 h, s maximem 4.– 5.den).
Chronické záněty
Pooperační syndrom
Infarkt myokardu
Infekce
Bronchopulmonální
zánětlivé onemocnění
↑
N
N
Zvýšení je méně vyjádřeno než u α1-GP.
Narozdíl od α1-GP zůstává α1-AT nezvýšen.
Hepatopatie
– akutní hepatitida
– chronická hepatitida
↑(↑↑)
Zvýšení koreluje se stupněm zánětlivého
procesu. Není však zvýšení ostatních reaktantů (
α1-GP, Hp, fibrinogen).
Negativně se odráží postižení jaterní
proteosyntézy.
Alkoholová cirhóza ↑ Na rozdíl od α1-GP je zde zvýšení.
Maligní bujení ↑↑ Výrazné zvýšení; liší se tak od nenádorového
postižení jater.
Progresivní polyartritida ↑ Zvýšení koreluje s aktivitou procesu.
Defektní alely Pi-systému ↓–(↓↓↓) Snížení α1-AT podmíněné geneticky může
negativně ovlivnit vzestup α1-AT jako reaktantu
akutní fáze.
Haptoglobin (Hp)
Molekula je tvořena podobně jako u imunoglobulinu ze dvou lehkých řetězců (α) a ze
dvou těžkých řetězců (ß) spojených navzájem disulfidovými můstky. α-řetězec se vyskytuje v
dědičně podmíněných variantách 1F, 1S, 2. K šesti obvyklým fenotypům Hp 1F-1F, 1F-1S,
1S-1S, 1F-2, 1S-2 a 2-2 přistupují ještě další méně časté varianty.
Syntéza haptoglobinu se děje v játrech, po snížení Hp (vazba na hemoglobin) se objeví
původní koncentrace za 5–7 dní. Poločas odbourávání Hp je 3,5–4 dny, naproti tomu
haptoglobin-hemoglobinový
komplex je vychytáván z krevního oběhu za 9 minut. Funkce Hp spočívá
především ve vychytávání uvolněného hemoglobinu (intravaskulární hemolýza). Chrání se
tím především ledviny před možným poškozením a zabraňuje se ztrátám Fe potřebného k
resyntéze krevního barviva. Další úloha Hp spočívá v jeho antiproteinasovém účinku, který
mají reaktanty akutní fáze.
Tab. : Rozmezí fyziologických hodnot
Skupina S-haptoglobin (g/l)
průměr min. – max.
Novorozenci
– donošení
– nedonošení
Dospělí podle typu
Hp 1-1
2-1
2-2
0,13
0,03
1,36
1,08
0,82
0–0.70
0–0,26
0.77–1,94
0,32–1,84
0,15–1,49
21
Patologické změny:
Zvýšení haptoglobinu v plasmě
Hodnoty haptoglobinu stoupají při zvýšení syntézy v játrech, navozené poškozením
pojivové tkáně infekcí, traumatem, neoplazií, zánětem apod. (reakce akutní fáze). Velikost
zvýšení je dána současným stavem odburávání Hp (zvýšený při tvorbě Hb-Hp komplexů).
Tab. : Hodnocení zvýšení Hp
Onemocnění Zvýšení Hp Patofyziologické poznámky
Akutní zánětlivé choroby,
infekce
2–4krát Zvýšení za 2 dny, maximum 10. den.
Těžší chirurgická operace,
trauma
3–5krát Zvýšení podle rozsahu poškození.
Infarkt myokardu 1,5krát Nástup rychlý, maximum 3. den, 8 dní trvá
návrat.
Revmatická polyartritida 1,5–3krát Zvýšení je mírou aktivity procesu.
Obstrukční ikterus 1,5krát Zvýšení bývá jak u maligních, tak
benigních
nádorů.
Nádorové onemocnění 0–3krát U solidních lokalizovaných tumorů
nebývá v počátečních stádiích zvýšení, i
když je zvýšen kyselý
α1-glykoprotein nebo sedimentace; Hp
koreluje více s α2-frakcí než s α1-frakcí.
Je-li zvýšen, je ukazatelem průběhu, např.
po ozáření se sníží; objeví se při recidivě.
Hodgkinova choroba Zvýšení jen relativně časté.
Snížení haptoglobinu v plasmě
Probíhají-li vedle sebe pochody vedoucí jak ke zvýšení, tak ke snížení, výslednou
hodnotu S-Hp nutno interpretovat velmi opatrně (např. při zánětu se současnou hemolýzou
najdeme hodnoty normální).
Tab. Hodnocení patologického snížení Hp
Onemocnění P-Hp Patofyziologické poznámky
Intravazální hemolýza
hemolytické
anemie, mechanické
poškození erytrocytů např.
umělými
srdečními chlopněmi,
hereditární sferocytóza,
intravaskulární
diseminovaná koagulopatie,
paroxyzomální noční
hemoglobinurie)
↓–↓↓↓↓ Hp váže velmi rychle volný Hb; komplex se
rychle odbourává v RES (zejména v játrech).
Někdy až nulové hodnoty Hp.
Polycythaemia vera ↓ Zvýšené odbourávání, kratší poločas.
Neefektivní erytropoéza
(nedostatek vitaminu B12
nebo
listové kyseliny
↓ Zvýšené odbourávání; hladina S-Hp je
nepřímou
mírou poločasu rozpadu erytrocytů (vhodné
pro
sledování terapie).
Jaterní cirhóza ↓ Porušená proteosyntéza v játrech.
Proteinurie (ztrácí se jen
Hp 1-1)
↓–↓↓ Neselektivní glomerulární proteinurie nebo
smíšené proteinurie vedou ke zvýšeným
ztrátám močí.
22
Ceruloplasmin (Cpl)
Ceruloplasmin je α1-glykoprotein o molekulové hmotnosti 132 000, obsahující šest
atomů Cu. Má enzymové vlastnosti oxidasy (polyfenoloxidasa). Je v něm obsaženo až 90 %
mědi v plasmě. Vlastním transportním proteinem Cu v plasmě je však albumin. Biologické
funkce Cpl nejsou přesně známy. Předpokládá se, že se účastní metabolismu Fe (oxiduje Fe2+
na Fe3+
), jako reaktant akutní fáze působí pravděpodobně jako ochranný faktor – inhibuje
účinek sérové histaminasy; může oxidovat SH-skupiny některých vysokomolekulových
proteinů.
Tvoří se v játrech. Jeho syntéza je pod vlivem hormonů. Zvýšená estrogenní aktivita ji
zvyšuje; v těhotenství stoupá hladina ceruloplasminu až na trojnásobek. Zvýšení je též u žen
při hormonální antikoncepci. Poločas katabolismu může u jednotlivých případů kolísat od 4–
10 dnů.
Fyziologické hodnoty (imunochemická metoda):
Novorozenci: 0,03–0,17 g/l,
do 14 dní 0,01–0,19 g/l,
do 30 dní 0,08–0,28 g/l,
do 3 měsíců 0,06–0,54 g/l,
do 6 měsíců 0,21–0,69 g/l,
do 12 měsíců 0,27–0,67 g/l,
nad 1 rok 0,30–0,58 g/l.
Těhotné ženy: 0,40–0,90 g/l.
Tab. : Patologické zvýšení
Onemocnění, syndrom g/l Patofyziologické poznámky
Akutní záněty (kupř.
glomerulonefritidy)
maximálně 1–2 Zvýšení je nespecifické, při postižení jater
nebývá zvýšení; naopak při podávání
estrogenních preparátů je hladina i bez
zánětu vyšší.
Infarkt myokardu 0,6–2
Maligní tumory 0,4–1,5 Především leukemie.
Cirhóza Zejméná Laennecova nebo alkoholová.
Biliární cirhóza Velmi často.
Cholestáza 0,6–1 Na rozdíl od hepatitidy, kde bývá i
snížení.
Hyperfunkce ovaria
Těhotenství
Efekt estrogenů.
Hyperthyreóza 0,4–0,9
Tab. : Patologické snížení
Onemocnění, syndrom g/l Patofyziologické poznámky
Wilsonova choroba
(hepatolentikulární
degenerace)
pod 0,10 Výrazné snížení Cpl je pro toto
onemocnění
příznačné; vzácně však byly popsány
případy jen
s lehce nižším nebo normálním Cpl.
Defekt spočívá v chybění receptorového
nebo transportního proteinu umožňujícího
inkorporaci Cu do apoceruloplasminu a
sekreci ceruloplasminu z hepatocytu do
žluče.
23
Nefrotický syndrom pod 0,3 Ztráty Cpl močí.
Exsudativní enteropatie Ztráty stolicí.
Malnutrice Snížená proteosyntéza.
Imunoglobuliny
Patobiochemie
Molekula imunoglobulinů plní dvě úlohy:
a) Má imunitní aktivitu, tj. schopnost specificky vázat příslušný antigen. Tato vlastnost je
vázána na Fab-fragment a je podmíněna charakteristickým sledem aminokyselin (asi 110
zbytků)
N-terminálního konce obou řetězců – lehkého (L) a těžkého (H) – variabilními doménami
označovanými jako VL a VH. Prostorovým uspořádáním řetězců L a H v této doméně vzniká
hypervariabilní oblast (horké místo), které vytvoří jakousi „kapsu“ – vazebné místo pro
antigen. Na Y (ypsilo-novém) tvaru molekuly imunoglobulinů jsou dvě vazebná místa; IgM,
který je pentamerem, jich proto má 10;
b) Má biologickou aktivitu, která je vázána na Fc-fragment – na konstatní doménu
těžkého řetězce (CH). Tato biologická aktivita molekuly imunoglobulinů se může projevit
vazbou komplementu, průchodností placentou, fixací na tkáně; rozdělením v tělních
prostorech (tekutinách), vazbou na monocyty, poločasem katabolismu. Projevy biologické
aktivity nejsou u všech tříd imuno-globulinů stejné.
Třídy a podtřídy imunoglobulinů
U člověka bylo rozlišeno pět tříd imunoglobulinů. Rozdíl je zakotven ve složení
těžkých
(H) řetězců, které se označují písmeny řecké abecedy: γ, α, µ, δ, ε; lehké (L) řetězce jsou u
všech tříd stejné, a to dva typy (κ, λ).
Imunoglobulin G (IgG) (složení: γ2λ2 nebo γ2κ2) má čtyři podtřídy: IgG1, IgG2, IgG3,
IgG4. Je kvantitativně nejčetnější třídou. Je obsažen především v plasmě, ale též v
intersticiální tekutině. Má schopnost přímo neutralizovat toxiny, dále vázat řadu bakteriálních
a virových antigenů a schopnost indukovat aktivitu komplementového systému. Je jediným
Ig, který proniká placentární bariérou. Proto v séru pupečníkové krve se vyskytuje prakticky
ve stejné koncentraci jako
v séru dospělých jedinců. Biologický poločas IgG je 20 dní.
Normální hladina v séru u dospělých: 8–18 g/l.
Imunoglobulin A (IgA) (složení α2λ2 nebo α2κ2) má dvě podtřídy (IgA1 a IgA2). Je
imunogobulinem ochraňujícím před infekcí povrch sliznic, kam je vylučován po navázání tzv.
„sekrečního kousku“ (secretory piece) ve formě dimeru. Toto uspořádání činí molekulu
odolnější vůči působení proteinas, které by ho v sekretech brzy rozložily. Je obsažen v
krevním séru, ale též ve slinách, slzách, ve střevním a bronchiálním sekretu. Neproniká
placentou, takže v séru novorozenců jeho hladina činí 1 % koncentrace dospělých. Má
poločas 6 dní.
Normální hodnoty u dospělých: 0,9–4,5 g/l.
Imunoglobulin M (IgM) [složení: (µ2,λ2)5 nebo (µ2,κ2)5] je pentamer, kde jednotlivé
monomery spojuje tzv. J-spojovací člen. Molekula má tímto 10 vazebných míst, takže
projevuje vysokou afinitu k příslušnému antigenu. IgM je první třída protilátek, která vzniká
jako humorální imunitní reakce vůči antigenu (infekci), se kterým se organismus setkává
24
poprvé. Neprochází placentou, v pupečníkovém séru se vyskytuje jen v nepatrném množství
(cca 10 % hodnot dospělých). Je-li však koncentrace zvýšena (> 400 mg/l), znamená to
perinatální infekci. IgM se vyskytuje
v 75 % v krevní plasmě, kde relativně rychle reaguje na proniklou infekci. Má poločas 5 dní.
Jeho úkolem je rychlá imunitní reakce vůči mikrobům a jiným velkým antigenům. Podobně
jako IgG aktivují komplement.
Normální hladina: Ženy 0,7–2,8 g/l,
muži 0,6–2,5 g/l.
Imunoglobulin D (IgD) patří mezi minoritní Ig; má krátký poločas katabolismu (2,8
dne). Tvoří spolu s IgM povrchové receptory lymfocytů pro reakci s antigeny a podílí se tak
na aktivaci nebo supresi lymfocytů. Je velmi citlivý vůči proteolytickým enzymům, což je
právě vhodné pro zpracování antigen-IgD komplexu.
Fyziologická koncentrace: 0–80 mg/l.
Imunoglobulin E (IgE) má molekulovou hmotnost 188 000; obsahuje 14 %
sacharidů. Po svém vzniku je velmi rychle a velmi pevně vyvázán na povrchu mastocytů.
Proto jeho koncentrace v séru je nepatrná. Při kontaktu s antigenem (alergenem) dochází k
degranulaci mastocytů a uvolnění vasoaktivních aminů (histamin, serotonin).
Fyziologická úloha IgE spočívá pravděpodobně v ochraně slizničních povrchů tím, že
uvolňuje v místě ataky mediátory a efektory, které navodí zánětlivou reakci. Infekční agens,
které prolomí IgA obranu, se dostane do styku s IgE na povrchu mastocytů, což spustí jejich
degranulaci
a uvolnění vasodilatačních a chemotaktických faktorů.
Fyziologická koncentrace: 0–380 kU/l.
Patologie imunoglobulinů
Při hodnocení patologického zvýšení nebo snížení jednotlivých tříd imunoglobulinů je
nutno vycházet vždy z klinické situace a stadia onemocnění, popřípadě dalších laboratorních
nálezů.
Polyklonální gamapatie
Polyklonální hyperimunoglobulinemie je relativně častým projevem řady onemocnění.
Přehled změn v hladinách imunoglobulinů u různých patologických stavů podává tab.
Tab. : Typický vývoj hladiny imunoglobulinů
Onemocnění IgG IgA IgM
Infekce
Infekční mononukleóza
Subakutní bakteriální
endokarditida
Tuberkulóza
Aktinomykóza
Hluboké plísňové infekce
Bartonellóza
↑–↑↑
↑–↑↑
↑–↑↑
↑↑↑
N
↑
N–↑
↓–N
N–↑↑↑
↑↑
N–↑
↓–N
↑–↑↑
↑–↑↑
↓–N
↑↑↑
N
↑↑–↑↑↑
Choroby jater
Akutní virová hepatitida
Odeznívající akutní
virová hepatitida
Rekonvalescence akutní
hepatitidy
Protrahovaná akutní
hepatitida
N
(↑)
↑
N
(↑)
N
↑↑
↑–↑↑
↑
↑
25
Přechod protrahované
akutní hepatitidy do
chronické aktivní
hepatitidy
Chronická perzistující
hepatitida
Chronická aktivní hepatitida
Lupoidní hepatitida
Přechod (tendence) do
cirhózy
Přídatné poškození
alkoholem
Steatóza (I., II. stadium)
Chronická steatohepatitida
(III. stadium)
Alkoholová chronická
steatohepatitida
Alkoholová cirhóza
Cirhóza
Primární biliární
cholangitida,
ev. cirhóza
Zhoršení prognózy u cirhózy
↑↑
↑
↑↑–↑↑↑
↑↑
↑↑
↑↑
N–(↑)
(↑)
(↑)–↑
↑
↑–↑↑
(↑)–↑
↑↑
(↑)
N–(↑)
N–(↑)
↑–↑↑
↑–↑↑
↑–↑↑
N–(↑)
(↑)
↑–↑↑
↑↑–↑↑↑
↑–↑↑
↑–↑↑
↑–↑↑
↑–↑↑
N–↑
N–(↑)
N–(↑)
N–(↑)
N–(↑)
(↑)
(↑)
↑
(↑)–↑
↑↑↑
↑–↑↑
Kolagenózy
Lupus erythematodes
Revmatoidní artritida
Sjoegrenův syndrom
Sklerodermie
↑–↑↑↑
N–↑↑↑
N–↑
N–↑
N–↑
N–↑↑↑
N–↑
N
N–↑↑
N–↑↑
N–↑↑
N–↑
Akutní revmatická horečka ↑–↑↑
Monoklonální gamapatie
Monoklonální gamapatie je možno definovat jako poruchy proliferace B-buněk
produkujících homogenní imunoglobulinovou komponentu (M-komponenta, paraprotein),
kterou možno obvykle detekovat v krevním séru (Rádl).
Je možno rozlišit čtyři kategorie monoklonálních gamapatií:
I. Maligní neoplastická proliferace B-buněk.
II. Benigní neoplazie B-buněk.
III. Imunodeficience s nevyváženým T-B imunitním systémem.
IV. Homogenní protilátková odpověď.
Paraprotein je tedy imunoglobulin (nebo část molekuly Ig), který je tvořen jednou
třídou těžkých řetězců (α, β, γ, δ, ε) a jedním typem lehkých řetězců ( κ, λ).
Na elektroforéze v agarózovém gelu se monoklonální imunoglobulin projevuje jako
homogenní úzká frakce lokalizovaná v oblasti γ až α2.
Rozlišení „maligní“ a „benigní“ monoklonální gamapatie
Rozlišení monoklonálních gamapatií je velmi důležité jak z hlediska prognózy, tak z
hlediska terapie.
Mezi „maligní“ monoklonální gamapatie patří: mnohočetný myelom, varianty
myelomu, Waldenströmova makroglobulinemie, maligní imunoproliferativní choroby,
choroba těžkého řetězce a monoklonální gamapatie u amyloidózy. „Benigní“ monoklonální
gamapatie se někdy označují jako monoklonální gamapatie nejasného významu (Hoffmann;
Kyle).
26
Kritéria určující diagnózu mnohočetného myelomu zahrnují:
– přítomnost alespoň 10 % abnormálních, nezralých plasmatických buněk v kostní
dřeni
nebo histologický průkaz extramedulárního plasmocytomu,
– obvyklé klinické symptomy myelomu,
– alespoň jednu z následujících známek:
* paraprotein v séru (obvykle > 30 g/l),
* paraprotein v moči,
* osteolytické léze.
Poznámka: Obvykle bývá snížení „nemyelomových“ tříd Ig.
Pacienti s diagnózou monoklonální gamapatie nejasného významu jsou podle Kyleho
charakterizováni takto:
– Méně než 5 % plasmatických buněk v kostní dřeni,
– nižší koncentrací paraproteinu v séru než 30 g/l,
– nemají známky anemie nebo osteolytických kostních lézí,
– mají normální koncentraci albuminu v séru,
– nemají paraprotein (nebo jen ve stopách) v moči.
Tab. : Kritéria diferenciální diagnostiky maligní monoklonální gamapatie
a monoklonální gamapatie nejasného významu (Hoffmann)
Nález Maligní MG „Benigní“ MG
Koncentrace paraproteinu
v séru
(ELFO)
IgG > 20 g/l
IgM nebo IgA > 10 g/l
IgG < 20 g/l
IgM nebo IgA < 10 g/l
Průběh progresivní nárůst paraproteinemie paraproteinemie konstantní
Bence Jonesova
bílkovina v moči
> 100 mg/l 0–100 mg/l (většinou neprokážeme)
Kostní dřeň > 10 % plasmatických buněk nebo
lymfoplasmocytoidní infiltrace
nebo lymfatické
buňky > 20 %
< 5 % plasmatických buněk; žádná
lymfoplasmocytoidní infiltrace.
< 20 % lymfatických buněk
Symptomy bolesti v kostech, horečka, noční
pocení, ztráta na hmotnosti
0
Adenopatie 0 až + 0
Splenomegalie 0 až + 0
Krevní obraz anemie, lymfocytóza nebo
lymfopenie
normální
S-Ca normální až ↑ normální
S-kreatinin normální až ↑ normální
Stav skeletu normální, osteolýza, osteoporóza normální
27
Tab. : Vyhodnocení „stagingu“ u pacientů s mnohočetným myelomem (Durie-Salmon)
Stadium Charakteristika
I B-Hb > 100 g/l
S-Ca < 3,0 mmol/l
Na RTG žádné kostní změny nebo jen
solitární
kostní plasmocytom.
M-komponenta:
IgG < 50 g/l
IgA < 30 g/l
Bence Jonesova bílkovina v moči <
4g/den.
II Jen minimálně zvýšené limity uvedené pod
I.
Nepřítomnost žádných podmínek sub III.
III Pozitivní nález jedné nebo více
následujících
situací:
B-Hb < 85 g/l
S-Ca > 3,0 mmol/l
Pokročilé lytické léze na RTG kostí (stupeň
3)
M-komponenta:
IgG > 70 g/l
IgA > 50 g/l
Bence Jonesova bílkovina v moči > 12
g/den.
Význam stanovení podtříd IgG
Kvantifikace podtříd IgG (tj. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), ev. specifická protilátková
odpověď v podtřídách, je indikována u pacientů s opakovanými respiračními infekty, u nichž
se předpokládá možnost imunodeficience. Část pacientů se selektivní imunodeficiencí v IgG
může mít defekt v produkci IgG2 nebo dohromady v IgG2 a IgG4. U jiných pacientů to může
být defektní protilátková odpověď na specifickou antigenní stimulaci v těchto podtřídách.
Sekundární systémová protilátková odpověď na proteinový nebo virový antigen je především
v podtřídě IgG1 a IgG3. Odpověď na sacharidové antigeny je hlavně v IgG2. Selektivní deficit
IgG2 je provázen zejména respiračními infekty. Tato nedostatečnost může být manifestována
snížením nebo chyběním podtřídy nebo selektivní neschopností tvořit specifické protilátky v
IgG2, ačkoli hladina celkové protilátky IgG2 je normální. U části pacientů může být
kombinovaný defekt IgG2 a IgG4; podtřída IgG4 je zajímavá tím, že bývá sdružena s
chronickou antigenní stimulací. Podání (intramuskulárně, intravenózně) imunoglobulinů
nemocným může mít příznivý terapeutický účinek.
Tab. : Charakteristiky IgG podtříd
Podtřída Mr Hladina (mg/l) (% Ig) Poločas
(dny)
Fixace
komplementu
Transport
placentou
IgG 1 146 000 8 400 (70) 25 ++ +
IgG 2 146 000 2 400 (20) 23 + +–
IgG 3 165 000 800 (7) 9 +++ +
IgG 4 146 000 400 (3) 25 – +