Laboratorní preanalytická fáze příprava analytického vzorku Preanalytická fáze • •Proces laboratorní diagnostiky •Tři fáze: preanalytická • analytická • postanalytická •Preanalytická – mimolaboratorní • laboratorní •Mimolaboratorní – příprava pacienta, odběr, identifikace, transport • • Transport biologického materiálu • •Donáška •Potrubní pošta •Transportní vozidlo - chlazení Olomouc_2008 001 Olomouc_2008 004 přenosný mrazící box transportní vozidlo s chladícím agregátem a monitorováním teploty Preanalytická fáze laboratorní •Příjem a identifikace biologického materiálu – povinné údaje, kontrola • •Vložení identifikačních údajů pacienta do LIS –manuálně, pomocí načítacího zařízení nebo automaticky při načtení čárového kódu • •Příprava analytického vzorku – centrifugace (rozložení, bezpečnost) • •Označení analytického vzorku čárovým kódem • •Vytvoření sekundárních analytických vzorků – aliquotů (aliquoting) a jejich označení štítky s čárovým kódem (labeling) • •Roztřídění analytických vzorků pro jednotlivá cílová pracoviště laboratoře (sorting) Laboratorní informační systém (LIS) •Laboratoře – data – jejich shromáždění a zpracování •Tvorba laboratorního nálezu •Předání nálezu lékaři – tisk – elektronicky •Historie – sběr a uložení dat •PC – síť •Čárový kód – jedinečná číselná identifikace •Oboustranná komunikace • • LIS •Definice metod •Vklady •Nálezy •Kontrola nálezů •Interní kontrola kvality •Ekonomika •Statistika • centrifugace Způsoby centrifugace •Diferenciální - běžná, založena na • rozdílné sedimentační rychlosti částic • (rozdílná hustota část. k hust. prostř.) •Izopyknická – stejné, ale prostředí o • měnící se hustotě – sacharóza, • polymery • - diskontinuální • - kontinuální (změna hustoty plynulá) Význam: Ø odstranění sraženin (krevní koláč, deproteinace….) Ø odstranění buněk (získání plazmy z nesrážlivé krve) Ø izolace; koncentrace buněk (cytologický preparát z likvoru – cytospin) Ø zahuštění bílkovin (moč, likvor) Ø dělení směsi nemísitelných kapalin Ø Centrifugační síla •Vliv gravitace nahrazen použitím centrifugy •Zkumavky se pohybují v tzv. rotoru po kruhové dráze •Působí na ně odstředivá síla, je tím větší, čím větší rychlostí a po delší dráze se zkumavky pohybují (síla závisí na poloměru rotoru a jeho rychlosti otáčení ) • • F = m . r . w2 • • m – hmotnost částic • r – poloměr, tj. vzdálenost dna centrifugační zkumavky od osy otáčení • w - úhlová rychlost (w = 2 p f, kde f je frekvence otáček). Relativní centrifugační síla (R); anglický termín Relative Centrifugal Force (RCF) vyjadřuje poměr mezi centrifugačním zrychlením a zrychlením tíhovým Udává se v násobcích g R = r . w2 / g Relativní centrifugační síla R se snadno vypočítá pro kteroukoli centrifugu a daný počet otáček R = 4,02 . f 2 . r (je-li frekvence otáček uváděna v jednotkách [s-1] a vzdálenost r v [m]) R = 1,12 . f 2 . r . 10-5 je-li frekvence otáček uváděna v jednotkách [min-1] a vzdálenost r v [cm] Lze určit rovněž z nomogramu r (poloměr rotoru) [mm] otáčky [f / min.] Relat.centrif. síla (RCF) [g] Typy centrifug •Nízkoobrátkové - zrychlení 5.104 ms-2(5000g) •Středněobrátkové - zrychlení 2.105 ms-2(20000g) •Vysokoobrátkové - zrychlení 107 ms-2 – • ultracentrifugace virů • •Rotory výkyvné - menší zrychlení, rozdělení • horizontální (odstředivá síla • kolmo ke dnu) •Rotory úhlové - větší počet otáček, kratší doba • dělení • Instr Instr Instr GCMS_SKH_AAK_Labsklo_centrifugy 091 Centrifugace •Krevní elementy (erytrocyty, leukocyty, trombocyty, v případě séra krevní sraženina) - vyšší specifická hustota -účinkem odstředivé síly do dolní části odběrové nádobky • •V horní části sérum případně plazma • •Separační gel - specifická hustota mezi krevními • elementy a sérem nebo plazmou • - po centrifugaci mezi nimi – oddělení • - zabrání průniku látek z krevních elementů • (např. draslíku) do séra nebo plasmy • - odstraňuje nutnost sérum nebo plazmu po • centrifugaci přenést do jiné zkumavky preanal_video_2 002 Cytofuga • • • Příprava mikroskopického preparátu • k cytomorfologickému vyšetření mozkomíšního moku - cytospin Instr Speciální centrifugační nádobky • •1) Zahuštění močí, likvorů • Stanovení specifických proteinů • • •2)Analýza ze slin • Zpracování hustých biologických materiálů Instr_tech_lab Instr_tech_lab Instr_tech_lab Centrifugační automatické analyzátory (historie) • otvor pro pipetování reagencie otvor pro pipetování vzorku kyveta s vertikálním průchodem paprsku Automatizovaná a robotizovaná perianalytická laboratorní fáze – jednotlivé kroky : • •Identifikace biologického materiálu •Centrifugace •Odzátkování •Označení aliquotů čarovým kódem - labeling •Rozpipetování – aliquoting •Zazátkování •Roztřídění - sorting •Archivace •Skladování Perianalytické systémy • •„On-line“ - přímé propojení s automatickou analytickou linkou • •Samostatně stojící - • roztříděné primární vzorky i aliquoty se odnášejí do příslušných analyzátorů OLA 2000 (Siemens) DSC1 Modular Preanalytics (Roche Diagnostic) Základní části: •Vstup – místo pro vkládání zkumavek •Dopravníkový systém - transport zkumavek mezi jednotlivými funkčními jednotkami •Laserová čtečka k identifikaci vzorku načtením čárového kódu •(Robotizovaná centrifuga) •Odzátkovací zařízení •Zásobník zkumavek pro aliquoty •Tisk a nalepení štítků s čárovým kódem •Pipetor pro vytvoření aliquotů •Zařízení pro roztřídění primárních zkumavek a aliquotů pro cílové analyzátory •Chlazený sklad pro uložení vzorků – automaticky posílá vzorky pro analýzu doordinovaných testů, po uplynutí skladovací doby vyhodí vzorky Výhody preanalytických systémů: • •Zkrácení TAT •Úspora personálu •Odstranění možnosti potenciální záměny materiálu •Omezení styku s biologickým materiálem •Zachycení sraženiny v séru •Zájem personálu o novou přístrojovou techniku •Representativní laboratoř Olomouc_2008 009 • •