Základní koagulační testy
FN BRNO
Dělení testů
testy globální
^ postihují celý systém (i více) testy skupinové (screening) ^ postihují určitou část koagulačního systému
^ umožňují odlišení poruch vnitřní a vnější cesty a přeměny fibrinogenu
atesty speciální
^ vyšetřují jednotlivé složky systémů
Protrombinový čas - PT
-^tromboplastinový čas dle Quicka * monitoruje zevní koagulační systém
FF VII, X, II, V a fibrinogen
sledování času tvorby fibrinu po přídavku Ca2+ tromboplastinu k vyšetřované plazmě
reagencie Ca2+ tromboplastin (různý původ) Ca2+ (CaCI2) *j TF (tkáňový faktor) íj PL (fosfolipidy)
Aktivace kontaktem XII, PK HMWK
XI Tkáňový tromboplastin +
^ _
IX VIII
II
I (fibrinogen) —► Fibrin_
„ XIII
Fibrinové koagulum
Vyjadřování výsledků PT
■^koagulační čas v sekundách ( čas normálu)
poměr R = čas vyš. plazmy/ čas normálu
->INR (mezinárodní normalizovaný poměr) INR=RISI - pro léčbu kumariny
* % normální koagulační aktivity - odečtení z kalibračn křivky
^1 % zlomek normální hodnoty (100% = 1,0)
Kalibrace PT
kalibrační materiál
^ směsná normální plazma ^ komerční kalibrační plazma (100%)
stanovení času normálu pro výpočet R, IN ^ průměr opakovaných měření ^ pro každý přístroj
vyšetření různých ředění kalibrační plazmy v případě vyjadřování výsledků v %
* 100%, 50%, 25%, 12,5% ^ log/log závislost
International Normalized Ratio (INR)
mezinárodní normalizovaný poměr INR = RISI
vyjadřování PT při léčbě kumariny ISI = international sensitivity index
^ mezinárodní index citlivosti
^ vyjadřuje citlivost daného tromboplastinu stanovenou vůči mezinárodnímu standartnímu tromboplastinu
^ hodnota ISI stanovena
• pro každou šarži reagencie j výrobcem reagencie u ISI < 1,5
International Normalized Ratio (INR)
vyjadřování výsledků pouze při léčbě kumariny zajišťuje standardizaci testu * umožňuje porovnání výsledků PT ^ z jednotlivých laboratoří ^ testované různými reagenciemi
Stanovení ISI
Vyšetření PT:
25 pacientů (minimálně)
-léčených kumariny
-v terapeutickém rozmezí
5 normálů
Testovaný tromboplastin Ao&
Indikace vyšetření PT
-v
základní koagulační test predoperační vyšetrení krvácivý stav léčba kumariny
podezŕení na patologický inhibitor
cKy
defekt faktoru vnějšího systému * patologický inhibitor ^ specifický ^ nespecifický
nedostatek vit. K kumariny
heparin (dle typu a dávky, dle citlivosti reagens) FDP
novorozenec
Defekty faktoru
vrozený
*l defekt FF II, V, VII a X získaný
^ snížená syntéza
^ zvýšená spotřeba
^ zvýšené ztráty
Normální hodnoty a terapeutický rozsah
Normální hodnoty
koagulační čas = 11 - 15 s poměr R = 0,8- 1,2
% normální aktivity = 70 - 120 % 5j %zlomek normální hodnoty = 0,7 -1,2 Terapeuticky rozsah
INR = 2,0 - 4,0 (dle klinické indikace) %, % zlomek NH
^ liší se dle šarže reagencie
^1 nejsou vhodné pro monitorování léčby!!!!
Požadavky na PT reagencii
^/citlivost k defektům faktorů citlivost na kumariny (ISI < 1,5) stabilita
snadná manipulace
* citlivost k heparinu
* citlivost k inhibitorům
-v
Aktivovaný parciálni tromboplastinový test - APTT
monitoruje vnitřní koagulační systém
*l PK, HMWK, FF XII, XI, IX, VIII ale i X, II, V a fibrinogen
sledování času tvorby fibrinu po přídavku aktivátoru, parciálního tromboplastinu a Ca2+ k vyšetřované plazmě
reagencie ^ aktivátor (silica, kaolin, kys. elagová..) ^ parciální tromboplastin (kefalin=fosfolipidy) *l Ca2+ (CaCI2)
Aktivace kontaktem (+ PL + Ca2+)
XII, PK IIMWK
XI
IX VIII
II
Tkáňový tromboplastin +
VII
T _
I (fibrinogen) —► Fibrin
XIII
Fibrinové koagulum
Vyjadřování výsledků APTT
koagulační čas v sekundách ( čas normálu) ^ poměr R = čas vyš. plazmy/ čas normálu
// cas
Normální hodnoty
koagulační čas = 28 - 45 s
^ závisí na typu reagencie
poměr R = 0,8- 1,2 ^ nezávisí na typu reagencie
Kalibrace APTT
kalibrační materiál
^ směsná normální plazma ^ komerční normální plazma
stanovení času normálu pro výpočet R ^ průměr opakovaných měření ^ pro každý přístroj
Indikace vyšetření APTT
základní koagulační test predoperační vyšetření krvácivý stav
léčba heparinem (UFH)
^terapeutické rozmezí
závislé na typu reagencie
• citlivé reagencie R = 2,0 - 5,0
• méně citlivé R = 1,5 - 3,0
podezření na patologický inhibitor
Citlivost různých typu APTT m
heparin
aPTT-R
10
0
0,2
0,3
0,4 0,5 heparin IU/ml
0,6
0,7
0,
Příčiny prodloužení APTT
defekt faktorů vnitřního systému
patologický inhibitor
^ specifický
^ nespecifický heparin * FDP
novorozenec
Defekty faktoru
* vrozený
hemofílie A, hemofílie B, defekt FF XII, XI, PK, HMWK, vWF
* získaný ^ snížená syntéza ^ zvýšená spotřeba ^ zvýšené ztráty
Požadavky na APTT reagencii
* citlivost k defektům faktorů
citlivost na heparin
citlivost k LA ^ množství PL ^ optimální zastoupení PL
stabilita ■^snadná manipulace
Klinický význam PT a APTT
screening hypokoagulace ^ prodloužení základních koagulačních testů
vyšetření hyperkoagulace
^ nutné provedení speciálních testů
^ zkrácení časů APTT (málo citlivé) j v porovnání s předchozím výsledkem za vyloučení arteficiálního ovlivnění při odběru
ili PT není citlivé
Korekční testy
sledování korekce (zkrácení) PT, APTT po přídavku normální plazmy (směs 1:1)
prodloužení se koriguje - defekt faktorů
prodloužení se nekoriguje - přítomnost inhibitoru
^ specifického
^ nespecifického
Trombinový čas -TČ
monitoruje třetí fázi koagulace
vyšetření poruch štěpení fibrinogenu trombinem
sledování času tvorby fibrinu po přídavku trombinu k neředěné vyšetřované plazmě
reagencie - trombin (nízká koncentrace) vyjadřování výsledků ^ koagulační čas v sekundách (norma < 1812M s) ^ (poměr R)
Aktivace kontaktem
XII, PK HMWK
XI
IX VIII
X V
II
Tkáňový tromboplastin +
VII
I (fibrinogen) —► Fibrin
I XIII
Fibrinové koagulum
Příčiny prodloužení TČ
hypo-, afibrinogenémie * dysfibrinogenémie heparin FDP
jiné patologické inhibitory (myelom, revmatoidn artritida)
novorozenec
Reptilázový čas
test s trombinu podobným enzymem reptilázou *jed hada Bothrops atrox na rozdíl od trombinu není ovlivněn heparinem vyjadřování výsledků
^ koagulační čas v sekundách (norma < 18 /21/s) klinický význam
stejný jako TC s výjimkou vlivu heparinu
základní koagulační test * metody stanovení fibrinogenu
^ funkční - vyšetření schopnosti přeměny na fibrin (metoda dle Clause)
^ vyšetření množství (EID)
metoda dle Clause
^ sledování času tvorby fibrínu po přídavku nadbytku trombinu k ředěné vyšetřované plazmě
^ reagencie - trombin (vysoká koncentrace)
vyjadřování výsledků v g/l (norma 1,8 -3,5 g/l) odečet z kalibrační křivky (log/log závislost) kalibrace
^ komerční kalibrační plazmy ^ vyšetření různých ředění
omezení metody -nutnost opakování vyšetření ^ u nízkých hladin Fbg (menší ředění a přepočet) ^ u vysokých hladin Fbg (větší ředění a přepočet)
Fibrinogen - klinický význam
Snížení
* vrozené hypo-, afibrinogenémie těžké poruchy jaterního parenchymu (syntéza zvýšená spotřeba (DIC) zvýšené ztrát] ■^trombolytická léčba ■^dysTiDnnogene
Fibrinogen - klinický význam
Zvýšení těhotenství zánět
nádorová onemocnění ústavy po operaci
Trombinový čas
Neředěná plazma obsahující: fibrinogen antitrombiny heparin FDP...
trombin
Cas koagulace závisí na zbytkové aktivitě trombinu
Fibrinogen
ředěná plazma
(méně Fbg, antitrombinu...)
trombin
Cas koagulace závisí na koncentraci fibrinogenu
Kontroly kvality (rutinní koagulace)
interní kontroly kvality
j kontroly správnosti
j shoda mezi naměřenou hodnotou a hodnotou udanou výrobcem kontrolního materiálu
j kontroly přesnosti
j shoda mezi výsledky opakovaných měření stejného kontrolního materiálu
^ porovnatelnost přístrojů
shoda mezi výsledky měření na různých přístrojích
externí kontroly kvality