LABORATORNÍ DIAGNOSTIKA PARAZITŮ PETRA KUBÁČKOVÁ OKM npřímý průkaz nmakroskopický nmikroskopický nprůkaz antigenu nPCR nkultivace nnepřímý průkaz nprůkaz protilátek PŘÍMÝ PRŮKAZ n nmateriál: 1.stolice – vajíčka červů, cysty prvoků 2.moč – vajíčka schistosom, trichomonády 3.krev – plasmodia, babesie, leishmanie, trypanosomy 4.výtěr – trichomonády 5.biopsie – vajíčka schistosom, E. histolytica, echinokok,… PŘÍMÝ PRŮKAZ nMIKROSKOPIE - v nativním preparátu nebo po koncenteraci n - v barveném preparátu (Giemsa, trichrom, Miláček) nPRŮKAZ ANTIGENU (giardie, kryptosporidia, tricho) nPCR (Toxoplasma gondii – PCR RT, plasmodia, entaméby) nKULTIVACE (trichomonády, entaméby, akantaméby) nMAKROSKOPICKÝ (články tasemnice, škrkavky, larvy,…) n n ODBĚR KRVE NA MALÁRII IMG IMG_0001 BARVENÍ IMG_0002 IMG_0003 npo usušení tenký roztěr fixujeme metanolem (1 minutu) nbarvíme Giemsa-Romanowski (1 díl G-R + 9 dílů pufrované destilované vody), tlustou kapku 20 minut, tenký roztěr 30 až 40 minut nbarvicí roztok splachujeme opatrně nvždy připravíme nový barvicí roztok n STANOVENÍ PARAZITÉMIE nprohlížíme při zvětšení 100x nparazitémie v tenkém roztěru se počítá na 10 000 erytrocytů (200 ery na zorné pole, 50 zorných polí), výsledek se udává v procentech nparazitémie vyšší než 2,5% - pacient patří na jip n DIAGNOSTIKA STŘEVNÍCH PARAZITŮ nbarvení trichromem n nstolici špejlí rozetřeme na podložní sklo do středně silného nátěru nhned za vlhka ( nesmí v průběhu barvení včetně montování do Solakrylu uschnout ) fixujeme n1. sublimát alkohol 1 hod. n2. 75% alkohol 10 min. n3. 75% alkohol 10 min. n4. TRICHROM 10 min. noplach pod tekoucí vodou noplach v 96% alkoholu nvložit do 96% alkoholu 10 min. nkarboxylen 10 min. nxylen 10 min. nmontovat do Solakrylu = na sklo kápneme skleněnou tyčinkou 2 kapky Solakrylu, překryjeme krycími skly nnativ + Faust n n1.nativní preparát nnativní preparát se provádí ze stolice hned, jak vzorek přijde do laboratoře nvzorek velikosti obilného zrna rozmíchat špejlí do kapky fyziol.roztoku / RINGER/ na podložním skle /slabší nátěr/ npřikryjeme krycím sklíčkem nhledáme pohyb v čerstvé stolici = vegetativní stadium u améb n2.Faustova metoda flotační nvzorek stolice asi 1g (jako fazole) se špejlí přenese do zkumavky s dest.vodou a důkladně rozmíchá nsuspenzi centrifugovat při 2500 ot./min. asi 1 minutu, supernatant odsát vodní vývěvou, 2 - 3 x opakovat ndoplnit 1cm pod okraj roztokem ZnSO4, řádně promíchat a stočit 3 minuty při 2500 ot./min. ndoplnit po okraj a přiložit krycí sklíčko na hladinu roztoku npo 20 minutách položit toto krycí sklo na podložní sklo lamb2 cysta lamb2 lamb nsedimentační metoda (formol – éterová) n nvzorek nativní stolice (asi 1 g) přenést do krevní zkumavky, řádně rozmíchat ve fyz. roztoku nsuspenzi opakovaně promývat centrifugací (2 min. při 1500 ot./min.) fyz. roztokem (popř. vodou) nvypraný sediment suspendovat do 5 ml 4%formaldehydu nnechat stát 5 minut npřidat 1,5 ml éteru (popř. octanu ethylnatého), zazátkovat gumovou zátkou, řádně roztřepat ncentrifugovat 2 min. při 1500 ot./min. ntřívrstevný supernatant uvolnit špejlí od stěn zkumavky a odstranit nsediment přenést na podložní sklo a přikrýt krycím sklem roup škrkavka nlaboratorní diagnostika kryptosporidií n nuděláme silný nátěr a necháme zaschnout n nfixace metanolem 5 minut nmethylová violeť nebo gencianová violeť 30 minut nkrátce opláchnout tekoucí vodou ndiferencovat v 1-2% H2SO4 do světle fialové barvy 30 s- 2 minuty nopláchnout tekoucí vodou ndobarvit oranž G ( nebo roztok tartrazinu ) 30 s – 2 minuty nkrátce opláchnout tekoucí vodou nnechat zaschnout při pokojové teplotě nmontáž do média ( Solakrylu, Caedaxu ) DIAGNOSTIKA TRICHOMONÁD n nTRICHOMONAS VAGINALIS n specifický parazit lidského urogenitálního systému, kosmopolitní, přenos pohlavním stykem, netvoří cysty a je málo odolný mimo tělo hostitele n t_vaginalis_trophozoites odběry: u mužů – výtěr z uretry, popř. po masáži prostaty,moč u žen – výtěr z uretry, pochvy, cervixu materiál se odebírá do speciálního transportního média, po celou dobu by měl být udržován na teplotě 37°C mikroskopujeme a kultivujeme do 2. dne ve spec.kult.médiu při 37°C NEPŘÍMÝ PRŮKAZ nprůkaz protilátek (toxoplasmóza, toxokaróza, echinokokóza, schistosomóza, E. histolytica, trichinelóza, filárióza) n DIAGNOSTIKA TOXOPLASMÓZY nopakované serologické všetření nstanovení avidity protilátek nKFR, ELISA protilátek IgM a IgG npřímý průkaz - PCR DIAGNOSTIKA TOXOKARÓZY nmateriál: nsrážlivá krev, sklivec, likvor nELISA IgG, WB nvysoká eosinofilie nzobrazovací metody - CT DĚKUJI ZA POZORNOST