Praktické cvičení č. datum____________ jméno___________________ Téma praktika: Seznámit se s konstrukcí a funkcí atomového absorpčního spektrofotometru – plamenová technika Stanovit koncentraci Ca ve vzorcích moče a v kontrolním vzorku. Přístroje a pomůcky: Atomový absorpční spektrofotometr PYE UNICAME SP9 Pracovní standard (Ca) 12,48 mmol/l 0,3% roztok Sr(NO[3] )[2 ] p.a. ( ředící roztok-stand.;vzorky;blank) Pipety, laboratorní sklo, dávkovač Úkoly: a) Obeznámení se se základními prvky AAS, jejich funkcí a optimálním nastavením b) Kalibrace přístroje a stanovení koncentrace Ca v kontrolním vzorku a ve vzorcích moče 1. změření absorbancí stand-1; stand-2; stand-3; kontrolní vzorek; vzorky sér. Výpočet faktoru a koncentrace Ca v kontrolním vzorku a v vzorcích sér 2. vytvoření kalibračního grafu (EXCEL) a odečtení koncentrace Ca ve vzorcích z grafu 3. nastavení módu AAS měřícího přímo koncentrace Ca ve vzorcích a) Obeznámení se se základními prvky AAS, jejich funkcí a optimálním nastavením PLYNY: Acetylén-tlaková nádoba Hlavní uzávěr; redukční ventil k nastavení redukovaného tlaku; uzávěr výstupu redukčního ventilu Vzduch-kompresor Nádobka pro zachycení kondenzované vody; ukazatel tlaku VÝBOJKA S DUTOU KATODOU Karusel; zapnutí; nastavení žhavícího proudu; centrování paprsku ŠTĚRBINA 0,2 nm; 0,5 nm (vliv na odezvu fotonásobiče) VLNOVÁ DÉLKA Nastavení monochromátoru (Ca 422,7 nm); hrubé; jemné; aretace HOŘÁK Zapalovač elektrickou jiskrou Délka absorpčního prostředí Ovládací prvky pro nastavení polohy hořáku * vertikální * předozadní * v ose paprsku (rotační) kontrola polohy paprsku z výbojky nad rovinou hořáku NEBULIZÉR Nasávací kapilára Nastavení polohy tříštivé kuličky nebulizéru Změřit rychlost sání (ml/min) b) Kalibrace přístroje a stanovení koncentrace Ca v kontrolním vzorku a ve vzorcích moče Zapnutí přístroje: POWER OFF/ON Optimalizace nastavení optické části Vysunuté tlačítko AAS Zapnuté tlačítko Bc (korekce pozadí) a D2 LAMP (zanutí Deuteriové lampy) Zapnutí výbojky (Ca) pozice 1 Nastavit žhavící proud na hodnotu 7,5 mA Nastavit štěrbinu 0,5 nm (0,2 nm) Nastavit vlnovou délku (Ca) 422,7 nm (hledat maximální výchylku ručičkového ukazatele ENERGY. Po každém zásahu spojeném s pohybem ručičky doprava vrátit její polohu otáčením knoflíku GAIN do středu modrého pole Vycentrovat výbojku (Ca) pomocí stavěcích šroubů na maximální odezvu ukazatele ENERGY. ZAPÁLENÍ A NASTAVENÍ PLAMENE – (Acetylén/vzduch) Přesvědčit se, zda v odpadní nádobce kompresoru není kondenzační voda, případně uvolnit spodní uzávěr nádobky a vodu vypustit. Zapnout kompresor Otevřít hlavní uzávěr tlakové nádoby s acetylénem a otevřít výstupní uzávěr redukčního ventilu (Manometr ukazuje na značku, případně upravit redukčním ventilem.) SUPPORT Gas (vzduch)- průtok je nastaven automaticky (AUX. SUPPORT GAS (např. N[2]O) Zapálení plamene (elektrickou jiskrou) Stisknout tlačítko SART (AIR / FUEL) Úprava průtoku acetylénu na 18-20 mm (sledovat změnu charakteru plamene). Nasávací kapilárou nasávat deionizovanou vodu (ustálení přístroje). Příprava analytického vzorku Moč / kontrolní vzorek 0,1 ml Ředící roztok (dávkovač) 3,9 ml **** důkladně promíchat****** MĚŘENÍ Příprava standardních roztoků (Ca) Stand-č. Koncentrace [umol/l] Prac. standard [ml] Ředící roztok 1 1,25 10,0 Doplnit do 100 ml 2 5,00 40,0 Doplnit do 100 ml 3 12,50 --- --- Nasávat blank (0,3% roztok Sr(NO[3] )[2]) Vynulování – opakované krátké stisknutí tlačítka AUTOZERO Nasávat Snad-1; Stand-2; Stand-3 a zapisovat hodnotu absorbancí Nasávat kontrolní vzorek a vzorky – zapsat změřené absorbance. Ca absorbance Faktor = Stand-1 Stand-2 Stand-3 Konc. (faktor) Konc. (graf) Konc.(přímo) Kontrola-K1 Kontrola-K2 Vzorek č.1 Vzorek č.2 Po skončení měření nasávat deionizovanou vodu. Přímé měření koncentrace Ca VE vzorcích. Použijeme Stand-1 a Stand-2. Přesvědčtese, že tlačítka CONC/ABS a FES/AAS jsou uvolněna (platí funkce ve jmenovateli) a knoflíky EXPANSION a CURVATURE jsou nadoraz v krajní poloze otáčení proti směru hodinových ručiček. Nastavte DAMPING na 1,0 s. Nasávejte blank Po stabilizaci stiskněte tlačítko AUTOZERO a držte dokud se hodnoty na displey nepohybují v rozmezí 0,000+/-0,002. Vytáhněte nasávací hadičku. Nasávejte Stand-1 a po stabilizaci zapište absorbanci Nasávejte Stand-2 a po stabilizaci zapište absorbanci. Za stálého nasávání Stand-2 stlačte tlačítko CONC/ABS a knoflíkem EXPANSION nastavte na displey hodnotu absorbance Stand-2. Knoflíkem CURVATURE nastavte na displey hodnotu (Stand-2*) 0,078 Knoflíke EXPANSION nastavte na displey hodnotu koncentrace Stand-2. K ověření správnosti nastavení kalibrační křivky nasávejte postupně Blank, Stand-1 a Stand-2 Na displey by se měly objevovat koncentrace standardů. Nasávejte vzorky a zaznamenávejte změřené hodnoty koncentrace Zn. Po skončení měření nasávat deionizovanou vodu. Výpočet hodnoty Stand-2* (10 ^abs.Stand-1 - l) Stand-2* = 2log x ------------------------------ - (1-10 ^abs.Stand-1 - abs.Stand-2 ) VYPNUTÍ PŘÍSTROJE Stiskneme tlačítko FLAME OFF Přístroj řízeně uzavře přívod paliva a po několika vteřinách i vzduchu. Uzavřeme hlavní uzávěr na tlakové nádobě s acetylénem, výstup z redukčního ventilu. Vypneme kompresor. Vypneme přístroj ON/OFF.