Biochemické vyšetření mozkomíšního moku MUDr. Zdeňka Čermáková OKB FN Brno Základní vyšetření ¡Počet elementů a erytrocytů –kvantitativní cytologie ¡Kvalitativní cytologie- trvalý cytologický preparát ¡Celková bílkovina ¡Glukóza ¡Laktát Celková bílkovina ¡Fyziologická hodnota 0,15 - 0,40 g/l (stoupá s věkem) lalbumin, prealbumin, transferin,imunoglobuliny lhaptoglobin, C-reaktivní protein, C3 a C4 složky komplementu, antitrombin III, α1-antitrypsin lorosomukoid. ¡ ¡Zvýš. CB lzáněty (porucha hematoencephal. bariéry) lporucha cirkulace likvoru lintratekální syntéza Ig ¡ Stanovení-fotometrie reakce s benzethoniumchloridem ¡ Glukóza ¡Základní energetický zdroj nervové tkáně ¡Hladina závisí na glykémii ( 60% sérové hladiny) ¡Snížení: lbakteriální meningitida lnádory lkrvácení ¡Metoda stanovení-fotometrie hexokinázová reakce Laktát ¡Fyziologická hodnota 1,2-2,1 mmol/l ¡Nezávisí na plazmatické koncentraci, prakticky neprochází přes hematoencephalickou bariéru ¡ ¡Zvýšení: lZáněty – rozlišení virové a bakteriální meningitidy (produkován hlavně bakteriemi při anaerobní glykolýze) lPoruchy zásobení mozku kyslíkem – ischemie, krvácení lZvýšení intenzity metabolismu – nádory Albumin ¡Tvorba v játrech ¡Albumin v likvoru pouze z obvodové krve ¡ ¡Referenční hodnoty: CSF-Albumin: 120–300 mg/l ¡ ¡Albuminový kvocient – Qalb = alb.CSF/ alb.S (je závislý na věku): ldo 15 let: ≤ 5×10−3 ldo 40 let: ≤ 6,5×10−3 ldo 60 let: ≤ 8×10−3 ¡ ¡Albuminový kvocient se využívá k matematickému vyjádření funkce hematolikvorové bariéry: ¡k hodnocení míry postižení hematolikvorové bariéry; ¡pro výpočet intratékální syntézy imunoglobulinů. ¡ ¡Metoda stanovení-imunoturbidimetrie,imunonefelometrie ¡ Porucha hematolikvorové bariéry ¡Mírně porušená 7.3-10x 10-3 ¡ Roztroušená skleróza, chronické neuroinfekce, serózní meningitidy,nezánětlivé polyneuropatie ¡ ¡Střední porucha 10-20x 10-3 ¡ Serózní meningitidy,CMP,diabetická neuropatie ¡ ¡Těžká porucha nad 20 x 10-3 ¡ Meningitida bakteriální,herpetická, tuberkulózní,karcinomatóza,polyradikuloneritida-Guillaina-Barrého ¡I při velmi vysokých hodnotách Qalb. je zachována určitá funkčnost bariéry Imunoglobuliny ¡Zdroj – sérum ¡Lokální syntéza(intratékální) l lCSF-IgG: 12,0–40,0 mg/l lCSF-IgM: 0,2–1,2 mg/l lCSF-IgA: 0,2–2,1 mg/l ¡ ¡ Intratékální syntéza ¡ perivaskulární infiltráty lymfocytů B, které lokálně proliferují dozrávají v plazmocyty a produkují protilátky ¡ ¡Princip měření – imunochemicky, turbidimetrie, nefelometrie ¡ ¡ ¡ Humorální imunitní reakce v CNS ¡Koncentrace albuminu v moku pozitivně koreluje s koncentrací IgG ¡ 1.IgG index 2. 2. 2.Kvantitativní výpočet intratékální syntézy Ig -výpočet dle Reibera 3. 3.Kvalitativní průkaz intratékální syntézy -izoelektrická fokuzace – průkaz oligoklonálních proužků IgG _{index} = \frac{IgG_{CSF}/IgG_{s\acute{e}rum}}{Alb_{CSF}/Alb_{s\acute{e}rum}} IgG_{index} = \frac{Q_{IgG}}{Q_{alb}} Výpočet dle Reibera Reiberův_diagram.png (780×720) •Oblast 1 – normální nález; •Oblast 2 – izolovanou poruchu hematolikvorové bariéry bez lokální syntézy Ig •Oblast 3 – poruchu hematolikvorové bariéry společně s intratékální syntézou I •Oblast 4 – izolovaná intratékální syntéza Ig bez poruchy hematolikvorové bariéry; •Oblast 5 – oblast analytických chyb. • Výpočet dle Reibera ¡ ¡Q Lim(IgG) = 0,93 x √QAlb2 + (6x10-6) – 1,7 x 10-3 ¡ ¡QLim(IgM) = 0,67 x √QAlb2 + (120x10-6) – 7,1 x 10-3 ¡ ¡ ¡ IgGLOC = (QIgG –QlimIgG) x IgGs (mg x 1-1) ¡ ¡ IgGITH = (1-QlimIgG/QIgG) x 100% ¡ Kvalitativní-izoelektrická fokuzace – průkaz oligoklonálních proužků ¡Elektroforéza v gradientu pH – rozdělení podle izoelektrického bodu jednotlivých bílkovin ¡ ¡Současně se analyzuje i sérum ¡ ¡Významný je nález, kdy nacházíme proužky v likvoru, které nejsou v séru – znamená intratekální syntézu Ig ¡ ¡ Perspektivy vývoje vyšetření likvoru ¡Diagnostika degenerativních onemocnění a prionových infekcí. Dg. Creutzfeldtovy-Jakobovy choroby svědčí zvýšená koncentrace 14-3-3 proteinu v likvoru ¡Likvorová diagnostika Alzheimerovy choroby se opírá o stanovení β-amyloidu,τ-proteinu a fosfo- τ-proteinu. Protein β-amyloid je součástí amyloidových plak, které se akumulují v mozku. Protein τ se vyskytuje v cytoskeletu CNS. U Alzheimerovy choroby se nachází snížené hodnoty β-amyloidu a zvýšené hodnoty τ-proteinu.Dále se hodnotí jejich vzájemný poměr, index τ/ β-amyloid, který bývá zvýšený. ¡ ¡Strukturální protein S-100 patří do rodiny proteinů vážících vápník. Zvýšená hodnota S100 může svědčit pro poruchu hematolikvorové bariéry a často je známkou neuronového postižení. ¡β2 mikroglobulin patří k proteinům, které jsou přítomny ve všech tělních tekutinách.Vzestup jeho koncentrace v likvoru nacházíme u stavů obecně spojených s aktivací a zmnožením lymfocytárních a makrofagických elementů. Spektrofotometrie likvoru ØProvádí se při podezření na intermeningeální krvácení. ØJe přínosné v časných stadiích, kdy ještě nejsou změny v cytologickém obrazu. Ø ØSpektrofotometrie je 10x citlivější než lidské oko, pozitivní nález můžeme získat i u napohled bezbarvého likvoru. Ø ØProvádí se registrací absorbance v oblasti viditelného světla (380-700 nm), detekuje se přítomnost oxyhemoglobinu a bilirubinu. Ø Spektrofotometrie likvoru Ø Spektrofotometrie_oxy_a_bili Průkaz likvorey ØLikvorea – závažný stav s komunikací likvorových cest Detekce likvoru je možná stanovením parametru specifického pro likvor. Ø ØStanovení beta trace proteinu – enzym, který je syntetizován v buňkách chorioideálního plexu. V likvoru se nachází v koncentracích 20-30x vyšších než v séru. ØDalším parametrem je β2 transferin. Ze sérového transferinu se v likvorových prostorách odštěpí zbytky kyseliny sialové (mozkovou neuraminidázou), vzniká asialotransferin, který lze detekovat pomocí elektroforézy s imunofixací v β2 zóně. Ø Stanovení beta 2 transferinu Ø Obrázek1 Obrázek2