Krev Krevní buňky (formované elementy) Red blood cells /RBC/ – erytrocyty - 4 – 6 milionů/ 1 l White blood cells /WBC/ – leukocyty - 5,000 – 9,000/ 1 l Platelets /PLT/ – trombocyty - 150,000 – 300,000/ 1 l ERYTROCYTY • 4 – 6 milionů/μl • tvar: bikonkávní terčík • velikost: 7.4 μm (normocyt) • struktura: • plazmalema • cytoplazma + hemoglobin 33 % • chybí jádro a buněčné organely • životnost: 120 dní • funkce: transport O2 a CO2 poikilocytóza a anisocytóza sferocyty drepanocyty různý tvar různá velikost např. • osmotická resistence a hemolýza (osmotický tlak má velký vliv na živé buňky, protože jejich membrány jsou permeabilní) • v hypertonickém roztoku – ery se smršťují →echinocyty • v hypotonickém roztoku – ery bobtnají, plazmalema praská - hemolýza polyglobulie, polycytémie, erytrocytóza – zvýšený počet ery anemie – snížený počet ery retikulocyty • nezralé ery , v periferní krvi - 0.5 – 1.5 % • obsahují zbytky organel /polyribosomy, mitochondrie – substantia reticulofilamentosa/ • v ery dozrávají během 24 – 48 hod • znázornění - brilantkresylová modř LEUKOCYTY •granulocyty - neutrofily - eosinofily - basofily obecná charakteristika polymorfonukleáry acidofilní cytoplazma specifická + azurofilní granula •agranulocyty - lymfocyty - monocyty obecná charakteristika mononukleáry basofilní cytoplazma jenom azurofilní granula Neutrofilní granulocyty • 71 % z DBOK •  10 – 12 m • cytoplazma: acidofilní • specifická granula: neutrofilní • jádro: tyčka (4 %) nebo segmenty (67 %) - (2-5 segmentů ) • životnost: několik hodin nebo dní • funkce: mikrofág Eosinofilní granulocyty • 1– 4 % z DBOK •  12 – 14 m • cytoplazma: acidofilní • specifická granula: eosinofilní • jádro: 2 laloky propojené tenkým chromatinovým můstkem, připomíná činku nebo brýle • funkce: fagocytóza komplexů antigen- protilátka •  - eosinofilie – alergie, parazitární onemocnění Basofilní granulocyty • do 1 % z DBOK •  do 10 m • cytoplazma: lehce basofilní • specifická granula: • basofilní - heparin, histamin, .. • jádro: nepravidelně laločnaté, tvar „tlustého písmene S“ • funkce: hypersensitivita Agranulocyty • obecná charakteristika: - mononukleáry – jádro je sférické, oválné nebo ledvinovité - basofilní cytoplazma - chybí specifická granula - azurofilní granula s lysosomálními enzymy lymfocyt monocyt Lymfocyty • 20 -25 % z DBOK • cytoplazma – modrá s azurofilními granuly, četné ribosomy • jádro – kulaté, hyperchromatické • třídění: - T- a B-lymfocyty - malé ( 8 m), střední ( 10-12 m), velké ( 16-18 m) Monocyty • 5 % z DBOK • velikost:  15 – 20 m • cytoplazma – objemná, šedomodrá, nespecifická granula a četné ribosomy • jádro – ledvinovité až laločnaté, většinou v excentrické pozici, chromatin je jemně vláknitý • funkce : makrofág Trombocyty • nejsou buňky, ale fragmenty cytoplazmy megakaryocytů • tvar: primárně vřetenovitý, po aktivaci - pseudopodie • velikost: 2 – 4 m • hyalomera světle modrá periferie • granulomera červeně zbarvená zrníčka v centru destičky • životnost: 10-12 dnů • funkce : hemostáza /zástava krvácení/ http://www.platelet-research.org/1/function_morpho.htm# Trombocyty Aktivace -změna tvaru, nové uspořádání cytoskeletu centralizace organel -uvolnění obsahu denzních granul (ADP,ATP, serotonin) -uvolnění obsahu α granul (fibrinogen, fibronectin, vWF) -vystavení receptorů pro fibrinogen a fibronectin na povrchu destičky -uvolnění kyseliny arachidonové →thromboxan A2 (mediátor agregace destiček) Jak připravit krevní nátěr? 1 2 3 4 krevní nátěr fixovat (methylalkohol, 3-5 minut) a barvit (speciální panoptické barvení dle Pappenheima) Neutrofily • tyčky : segmenty - 4 % : 68 % →1 : 17 • posun doleva • posun doprava • Hynkovo číslo – 2.7 5 35 41 17 2 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 band 2 segm. 3 segm. 4 segm. 5 segm. neutrophils (nuclei) % Anomálie DBOK   Neutrofily neutrofilní granulocytóza neutrofilní granulocytopenie Eosinofily eosinofilní granulocytóza eosinofilní granulocytopenie Basofily basofilní granulocytóza basofilní granulocytopenie Lymfocyty lymfocytóza lymfocytopenie Monocyty monocytóza monocytopenie Jak počítat DBOK? • krevní nátěr musíte prohlížet systematicky – meandrovitě Tabulka 1 2 Neu tyčky / Neu segmenty //// // /// Eos / Baso Ly // //// Mono // 10 10 9 10 výsledky norma // 4 % //// / /// 67 % / // 3 % / 1 % / //// 20 % 5 % 10 10 100 100 % Diferenciální bílý obraz krevní • průměrné hodnoty Neutrofily - tyčky 4 % - segmenty 67 % Eosinofily 3 % Basofily 1 % Lymfocyty 20 % Monocyty 5 % ∑ = 100 % Hemopoéza denní obnova / kg 2.5 x 109 erytrocytů 1 x 109 granulocytů 2.5 x 109 trombocytů Všechny krvinky se vyvíjejí ze stejné pluripotentní kmenové buňky kostní dřeně /pluripotential PHSC/ - hemopoietické kmenové buňky Kmenová buňka se brzy diferencuje ve dvě buněčné linie – myeloidní a lymfoidní /multipotential hemopoietic stem cells – CFU-S - colonyforming unit-spleen a CFU-Ly - colony-forming unit-lymphocyte/. Dávají vzniknout buňkám progenitorním, které se diferencují v prekursorové buňky – blasty, které jsou už cytologicky heterogenní a dobře rozpoznatelné histologicky. • Tvorba krevních tělísek probíhá v hemopoetických orgánech – kostní dřeň, brzlík /T-lymfocyty/, tonsily, lymfatické uzliny, bílá pulpa sleziny /B- lymfocyty/. • Hemopoéza je aktivována a řízena hemopoetickými růstovými faktory. Nejznámější jsou erytropoetin, interleukin-3, IL-7, CSF-G /granulocyte colony-stimulating factor/, CSF-GM /granulocyte-macrophage CSF/, CSFM /macrophage CSF/. CFU-E - erythrocytes CFU-GM – granulocyte-monocyte CFU-L – lymphocytes CFU-Me – megakaryocytes ERYTROPOÉZA Erytropoéza • Proerytroblast - 15-20 µm, velké světlé jádro s jadérky, cytoplazma basofilní /ribosomy/, patrné projasnění kolem jádra, cytoplazma vybíhá v „ouška“ • Basofilní erytroblast – 15-16 µm, jádro menší, tmavší, bez jadérek, cytoplazma basofilní • Polychromatofilní erytroblast – 12-13 µm, zvýšená syntéza Hb /barví se eosinem → dvojitá barevná reakce cytoplazmy/ • Ortochromatofilní erytroblast – 9-10 µm, dále se nedělí, malé až pyknotické jádro, cytoplazma eosinofilní, enukleace jádra • Retikulocyt – zbytky polyribosomů a mitochondrií – substantia retikulofilamentosa, tvoří 1-2 % ery v periferní krvi, do 48 hod dozrávají • Erytrocyt Chasis, J. A. et al. Blood 2008;112:470-478 Proliferation and differentiation processes occurring within the erythroid niche Erytropoéza (7-8 dní) nátěr kostní dřeně nátěr kostní dřeně Granulopoéza Ovale WK, Nahirney PC : Netter´s Essential Histology, 2013, délka: 14 – 18 dní Granulopoéza myeloblast prekursorová buňka – 15-20 µm, jádro s jemně rozptýleným chromatinem, více jadérek, středně basofilní cytoplazma promyelocyt 25-30 µm, oválné jádro, jadérka, azurofilní granula Granulopoéza myelocyt 15-20 µm, jádro tvaru D, leží excentricky, bez jadérek, granula zralá – neutrofilní, eosinofilní, basofilní metamyelocyt 12-14 µm, jádro tvaru tyčky nebo ledvinovité, cytoplazma jako u zralých granulocytů, zralá granula - neutrofilní, eosinofilní a basofilní metamyelocyt Granulopoéza • myeloblast • promyelocyt • myelocyt • metamyelocyt • granulocyt myelos – mícha, dřeň (řec.) Granulopoéza nátěr kostní dřeně Granulopoéza nátěr kostní dřeně Kostní dřeň • stroma • retikulární vazivo – retikulární buňky, retikulární vlákna a jemná amorfní matrix • provazce hemopoetické tkáně • sinusoidní kapiláry Medulla ossium rubra Trombopoéza • megakaryoblast • 15-45 µm, ovoidní jádro s jadérky, basofilní cytoplazma • promegakaryocyt • megakaryocyt • 80-150 µm, • polyploidní (16n-64n – endomitóza) a mnohonásobně členěné jádro • cytoplazma basofilní, • demarkační membrány • z jednoho až 8.000 trombocytů promegakaryocyt Vývoj lymfocytů Vývoj monocytů lymfoblast prolymfocyt lymfocyt monoblast promonocyt monocyt source: http://en.wikipedia.org/wiki/Bone_marrow Myeloidní : erythroidní je 3:1