Cytochemická vyšetření Bourková L., OKH, FN Brno substrát ↓ inkubační roztok + enzym ↓ buňka è obarvené precipitáty ↓ v místech přítomnosti enzymu v buňce (v granulích) Cytochemická reakce hodnocení: intenzita zbarvení granulí (precipitátu) je úměrná množství enzymu Myeloperoxidáza •Princip: Peroxidáza přenáší vodík z vhodného donoru na peroxid. Donor je oxidován a přeměněn na nerozpustnou sraženinu. •Hodnocení: –v primární granulaci leukocytů –intenzita pozitivity: 0 až +++ –také se sleduje přítomnost Auerových tyčí (nemusí být při panoptickém barvení viditelné přes jádro). –fyziologická pozitivita: myeloidní buňky 0 / +++ monocyty 0 / + lymfocyty 0 •Klinický význam: Rozlišení myeloblastické nebo monoblastické leukemie od lymfoblastické leukemie POX-1AMMoL AMMoL POX-2LYneg Lymfoblasty - negativní POX-3AuerT POX-4AuerT Auerovy tyče Nespecifické esterázy •Princip: Buněčná esteráza reaguje se substrátem (např. alfa-naftyl-acetát nebo alfa-naftyl-butyrát ) a nebo je reakce blokovaná NaF. •Hodnocení: –pozitivita v granulích v cytoplazmě leukocytů –intenzita pozitivity: 0 až +++ –fyziologická pozitivita: monocyty + až +++ myeloidní buňky, lymfocyty 0 až ++ –pozitivita po NaF: monocyty zeslabení na 0 nebo +. ostatních buňky: pozitivita stejná nebo snížená maximálně o (+) •Klinický význam: –k rozlišení AML M4 a AML M5 –↑ NE + ↓ NE/NaF → monocytární buňky –NE + NE/NaF – srovnatelná → myeloidní, lymfoidní buňky NE-mono+++,gran+ Mono: ++/+++ Granulo: + Esterase2-nespec s NaF NE+NaF: 0 PAS •Princip: Průkaz sacharidů •Hodnocení: –intenzita: 0 až +++ –vzhled (typ) pozitivity: •fyziologická pozitivita: myeloidní buňky: difúzní zbarvení cytoplazmy monocyty: jemně granulární pozitivita lymfocyty: negativní, ojediněle výraznější granula trombocyty a megakaryocyty: výrazně pozitivní NRBC : negativní •patologická pozitivita. lymfocyty - CLL: ve většině lymfocytů výrazná zrnitá pozitivita blasty - ALL, nedif. leukémie: hrubozrná pozitivita NRBC - patologické: hrubozrná – kapkovitá pozitivita •Klinický význam: leukémie, MDS, anémie PAS-AMLM6 AML - M6 PAS-difus,granul,MGK,seg pozitivita: difúzní, granulární PAS 1-bloková poz ALL http://media.mssm.edu/blood/morphology_tutorial_scigliano/images/2164.jpg http://fce-study.netdna-ssl.com/images/upload-flashcards/948622/1210982_m.jpg https://encrypted-tbn0.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcT2P1uUCrHwC2I8zpMeHRhc9LLLkbHKyVJLXQbWYQlbPP2 ZFC7f https://encrypted-tbn0.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcRvNS8DdbYDGuh-uT1iRXU9j66aUgd6CFlPRLefeZXAxTr O4G8s https://encrypted-tbn0.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcREKwCLhdMeR9cA-UUzi0gInMV2WrYuEwzeQ3Me3NUHnhh Hks2A Typy pozitivity PAS Poznámky •Cytochemická vyšetření hodnotit v souvislosti s: •ostatním cytochemickým vyšetřením •morfologickým hodnocením a rozpočtem kostní dřěně •stádiem vyzrávání buněk • Cytochemické reakce Podpořeno MZ ČR – RVO (FNBr, 65269705)