Protokol č. 1 Kalibrace a praktické provedení základních koagulačních vyšetření PT, APTT a FBG na poloautomatickém koagulometru Jméno: Nevídalová Hana Obor: Datum: Ročník: 1) Principy stanovení: (doplnit) · PT: · APTT: · Fibrinogen (FBG): 2) Odběr a manipulace s materiálem (Doplnit odběr – do jakého antikoagulačního roztoku, preanalytické zpracování krve) 3) Přístroje a pomůcky: ST4 Bio (Stago) – poloautomatický koagulometr Automatické pipety 4) Spotřební materiál: Kyvety, kuličky Špičky modré, žluté Zkumavky 5) Reagencie: PT: STA NeoPTimal (králičí tromboplastin) APTT: STA PTT Automate, STA CaCl[2] FBG: DG-FIB L HUMAN (lidský trombin), STA Owren-Koller Buffer (diluent) Kalibrační materiál: DG – REF (kalibrační plazma s udanou hladinou fibrinogenu 2,85 g/l) Kontrolní materiál: STA Coag Control N+P (atestovaný kontrolní materiál s deklarovaným rozmezím) 6) Pracovní postup: (doplnit) · Test PT: · Test APTT: · Test FBG: 7) Kalibrace: FBG - provedení kalibrace: a) Ředění kalibrační plazmy DG-REF pomocí diluentu STA Oweren-Koller Buffer. b) Výpočet koncentrace jednotlivých ředění kalibrační plazmy. (doplnit do tabulky) Víme, že ředění 1:20 má koncentraci FBG 2,85 g/l. c) Měření koagulačního času jednotlivých ředění. d) Sestrojení kalibrační křivky z naměřených hodnot sekund a vypočítané koncentrace (osa x – koncentrace g/l, osa y – čas sec.) ředění Koncentrace (g/l) Čas (sekundy) 1:50 46,0 1:40 37,4 1:30 28,1 1:20 2,85 18,9 1:12 11,3 1:8 8,1 PT – provedení kalibrace: a) Stanovení referenčního času – provedení testu PT pomocí kalibrační plazmy 3x. b) Z naměřených hodnot vypočítat průměr. (Doplnit do tabulky) Naměřený čas PT (sekundy) 1. 14,1 2. 14,0 3. 14,0 Průměr: Referenční čas (neboli čas normálu) = ISI = 1,05 APTT – provedení kalibrace: a) Stanovení referenčního času – provedení testu APTT pomocí kalibrační plazmy 3x. b) Z naměřených hodnot vypočítat průměr. (Doplnit do tabulky) Naměřený čas APTT (sekundy) 1. 34,0 2. 34,3 3. 34,2 Průměr: Referenční čas (neboli čas normálu) = 8) Kontroly kvality: Deklarované rozmezí testů: PT STA Coag Control N 12 – 16 sec. STA Coag Control P 19,5 – 27,5 sec. APTT STA Coag Control N 28 – 38 sec. STA Coag Control P 51 – 67 sec. FBG STA Coag Control N 2,30 – 3,45 g/l STA Coag Control P 0,85 – 1,45 g/l Výsledky měření kontrol kvality: STA Coag Control N: PT = 13,6 sec., APTT = 32,8 sec., FBG = 18,5 sec. STA Coag Control P: PT = 22,9 sec., APTT = 55,3 sec., FBG = 24,8 sec. (V závěru zhodnotit výsledky kontrol kvality, zda vyšly v deklarovaném rozmezí, u fibrinogenu se musí odečíst g/l z kalibrační křivky). 9) Hodnocení výsledků a referenční rozmezí testů: PT: výsledky se vyjadřují v sekundách koagulačního času, poměru R a INR APTT: výsledky se vyjadřují v sekundách koagulačního času a poměru R FBG: primárně naměřenou jednotkou jsou sekundy koagulačního času, ale výsledky se vydávají v koncentraci g/l (musí se odečíst z kalibrační křivky) Referenční rozmezí: PT 11 – 17 sec. R, INR = 0,8 – 1,2 APTT 26 – 40 sec. R = 0,8 – 1,2 Fibrinogen 3,8 – 4,2 g/l 10) Výsledky: Pacient 1: PT Čas = 14,4 sec. R = INR = APTT Čas = 36, 8 sec. R = FBG Čas = 17,9 sec. Koncentrace = (Vypočítat R, INR a odečíst koncentraci FBG z kalibrační křivky. V závěru zhodnotit výsledky pacienta v souvislosti s referenčním rozmezím) 11) Závěr: Protokol č. 2 Interpretace výsledků rutinních testů - PT, APTT, FBG, TT, AT, D-Dimery Jméno: Obor: Datum: Ročník: · Pacient 1: Test: PT APTT FBG (g/l) TT (sec.) AT (%) Di-Dimery (mg/l) sec. INR R sec. R Výsledek: 1,09 15,2 1,08 38,4 1,12 2,55 21,9 111 0,04 Zhodnotit výsledky (↑- prodloužení času/vyšší hladina, N – norma, ↓ - zkrácení času/nižší hladina) a v případě patologie dopsat doplňující vyšetření: Závěrečné hodnocení nálezu pacienta 1 (diagnóza, léčba): · Pacient 2: Test: PT APTT FBG (g/l) TT (sec.) AT (%) Di-Dimery (mg/l) sec. INR R sec. R Výsledek: 13,7 1,04 1,03 69,5 2,07 2,57 - - - Zhodnotit výsledky (↑- prodloužení času/vyšší hladina, N – norma, ↓ - zkrácení času/nižší hladina) a v případě patologie dopsat doplňující vyšetření: Závěrečné hodnocení nálezu pacienta 2 (diagnóza, léčba): · Pacient 3: Test: PT APTT FBG (g/l) TT (sec.) AT (%) Di-Dimery (mg/l) sec. INR R sec. R Výsledek: 17,5 1,36 1,27 41,3 1,23 1,73 24,8 78 1,23 Zhodnotit výsledky (↑- prodloužení času/vyšší hladina, N – norma, ↓ - zkrácení času/nižší hladina) a v případě patologie dopsat doplňující vyšetření: Závěrečné hodnocení nálezu pacienta 3 (diagnóza, léčba): · Pacient 4: Test: PT APTT FBG (g/l) TT (sec.) AT (%) Di-Dimery (mg/l) sec. INR R sec. R Výsledek: 16,3 1,29 1,21 98,5 3,01 4,31 >180 86 2,68 Zhodnotit výsledky (↑- prodloužení času/vyšší hladina, N – norma, ↓ - zkrácení času/nižší hladina) a v případě patologie dopsat doplňující vyšetření: Závěrečné hodnocení nálezu pacienta 4 (diagnóza, léčba): · Pacient 5: Test: PT APTT FBG (g/l) TT (sec.) AT (%) Di-Dimery (mg/l) sec. INR R sec. R Výsledek: 12,7 0,95 0,96 64,1 1,91 3,19 - - 0,20 Zhodnotit výsledky (↑- prodloužení času/vyšší hladina, N – norma, ↓ - zkrácení času/nižší hladina) a v případě patologie dopsat doplňující vyšetření: Závěrečné hodnocení nálezu pacienta 5 (diagnóza, léčba): Protokol č. 3 Vyšetření agregace trombocytů Jméno: Obor: Datum: Ročník: 1) Abstrakt: Doplnit, do jaké skupiny testů patří vyšetření agregace trombocytů, uvést nejpoužívanější principy měření. 2) Princip: Napsat princip turbidimetrického měření. 3) Odběr a manipulace s materiálem: Doplnit odběr při turbidimetrické měření (př. typ antikoagulačního roztoku, preanalytické zpracování krve). 4) Přístroj a pomůcky: - agregometr APACT 4004 - kyvety - špičky (modré, žluté) 5) Reagencie (induktory): Doplnit nejčastěji používané induktory. 6) Pracovní postup: Doplnit postup turbidimetrického měření (př. typ vyšetřovaného materiálu, doba měření). Kolagen 2 µg/ml – křivka č. 7 ADP 5 µM – křivka č. 7 ADP 10 µM desagregace – křivka č. 7 7) Výsledky: Do tabulky doplnit výsledky odečtené z přidělených křivek. Induktor: ADP 5 ADP 10 Kolagen 2 Amax (%) Desagdregace (%) Slope (%/min) Doba latence (sec.) 8) Hodnocení výsledků a referenční rozmezí: Hodnocené parametry - Maximální amplituda (Amax) – v maximu (reversibilní křivka), v 6. minutě (ireversibilní křivka). - Desagregace – jen u ADP v případě reversibilní křivky. - Doba latence - Strmost křivky (Slope) Normální hodnoty Maximální agregace Kolagen 2 = 74,5 – 87,3 % Slope Kolagen 2 = 87,8 -125,4 %/min Doba latence Kolagen 2 = 38,2 – 73,3 s Maximální agregace Kolagen 5 = 74,7 – 88,9 % Slope Kolagen 5 = 88,0 – 128,1 %/min Doba latence Kolagen 5 = 32,4 – 49,9 s Maximální agregace ADP 5 = 57,0-86,2 % Slope ADP 5 = 63,9 – 108,0 %/min Desagregace ADP 5 = 0 - 10% Maximální agregace ADP 10 = 66,6 – 90,7 % Slope ADP 10 = 73,2 – 111,0 %/min Desagregace ADP 10 = 0 - 10% 9) Závěr: Vyhodnotit odečtené výsledky křivek z tabulky vzhledem k uvedeným normálním hodnotám (norma x patologie). Napsat klinický význam vyšetření agregace. Protokol č. 4 Monitorování antitrombotické léčby Jméno: Obor: Datum: Ročník: (Ke všem léčbám doplnit mechanismus účinku a laboratorní sledování, v závěru zhodnotit výsledky vzorků) 1) Léčba antagonisty vitamínu K Mechanismus účinku antagonistů vitamínu K: Laboratorní sledování léčby: Výsledky: PT APTT Vzorek č. sec. R INR sec. R 1 21,6 1,53 1,73 34,7 1,03 2 26,0 1,87 2,24 46,8 1,38 3 48,5 3,44 4,92 62,8 1,86 Závěr: 2) Léčba LMWH Mechanismus účinku LMWH: Laboratorní sledování léčby – principu testu: Výsledky: Vzorek č. antiXa - kIU/l PT APTT Sec. R INR Sec. R 1 0,10 14,8 1,06 1,08 34,9 1,05 2 0,37 16,2 1,09 1,10 33,0 0,96 3 0,62 14,4 1,04 1,05 39,1 1,14 Závěr: 3) Léčba UFH Mechanismus účinku UFH: Laboratorní sledování léčby: Výsledky: PT APTT TT Vzorek č. sec. R INR sec. R sec. 1 15,9 1,13 1,17 > 180,0 > 5,0 > 180,0 2 13,5 0,96 0,95 67,5 2,0 53,9 3 17,7 1,27 1,37 146,8 4,41 155,8 Závěr – hodnocení výsledků: 4) Léčba DOAC Mechanismus účinku DOAC: Xarelto, Eliquis: Pradaxa: Laboratorní sledování léčby – princip testů: Xarelto, Eliquis: Pradaxa: Výsledky: Vzorek: PT APTT TT 1. lék: sec. R INR sec. R sec. Xarelto konc. 13,5 0,96 0,95 31,0 0,92 19,8 20 μg/l 2. lék: sec. R INR sec. R sec. Xarelto konc. 20,8 1,48 1,65 35,1 1,04 20,1 173 μg/l 3. lék: sec R INR sec. R sec. Pradaxa konc. 16,3 1,16 1,21 42,3 1,23 143,9 14 μg/l 4. lék: sec R INR sec. R sec. Pradaxa konc. 19,5 1,38 1,52 71,8 2,12 > 180,0 232 μg/l 5. lék: sec R INR sec. R sec. Eliquis konc. 13,7 0,97 0,96 41,1 1,22 19,3 126 μg/l Závěr – hodnocení výsledků: