1 Cytologie II Buněčné organely, inkluze, mezibuněčná spojení, buněčný cyklus (mitóza, meióza), diferenciace buněk Buněčné organely Membránové ̶ Mitochondrie ̶ Endoplazmatické retikulum (drsné a hladké) ̶ Golgiho aparát ̶ Lyzosomy a endosomy ̶ Peroxisomy Bez membrány ̶ Ribosomy ̶ Centrioly 2 jsou konstantní součásti cytoplazmy vyžadují přísun energie k vykonávání svých funkcí 1 2 3 4 5 6 7 3 Přiřaďte názvy k očíslovaným strukturám 1 2 3 4 5 6 7 4 Mitochondrie ̶ tvar: kulatý, oválný (až vláknitý) ̶ velikost:  ~0,5 m, délka 1-10 m ̶ počet: různý dle metabolické aktivity buňky a jejich nároků na dodání energie (např. v jaterní buňce 1000 – 2000 mitochondrií) ̶ nové mitochondrie vznikají dělením stávajících 5 6 Stavba mitochondrie ̶ zevní membrána (hladká) ̶ vnitřní membrána s kristami ̶ matrix (DNA, RNA, ribosomy, enzymy) – semiautonomie ̶ mitochondriální tělíska (osmiofilní) Mitochondriální kristy Hřebenovité (listovité) kristy tubulózní kristy Prizmatické kristy 7 8 9 10 tubulózní kristy 11 Funkce mitochondrií v matrix: ̶ enzymy Krebsova (citrátového) cyklu ̶ β-oxidace mastných kyselin ̶ dekarboxylace pyruvátu na vnitřní membráně: dýchací řetězec, oxidativní fosforylace (ATP-syntáza) Ribosomy ̶ tělísko složené ze 2 podjednotek ̶ rRNA + proteiny ̶ velikost ribosomu: ~20-25 nm Ø volné poly(ribo)somy ribosomy na ribosomy endoplazmatickém retikulu Proteosyntéza „pro buňku“ a „na export“ (např. žlázové bb.) nebo jako součást membrán mRNA 12 volné ribosomy polysomy GER 13 Endoplazmatické retikulum (ER) ̶ členitý 3D systém membrán, v cytoplazmě buňky – 2 formy: ̶ zrnité (granulární) ER – GER: ̶ systém plochých, anastomozujících cisteren + (poly)ribosomy reverzibilně vázané na membránu ̶ hladké (agranulární) ER – AER: ̶ systém tubulů a váčků s membránou bez ribosomů 14 Komunikace GER s perinukleárním prostorem jaderného obalu 15 16 Zrnité (granulární) endoplazmatické retikulum (GER) Cisterny drsného ER pozitivní na glukózo-6-fosfatázu Glukozo-6-fosfatasa je jedním z enzymů účastnících se procesu tvorby glukózy. 17 Funkce zrnitého ER ̶ Proteosyntéza a posttranslační modifikace a skládání a následný transport proteinů do Golgiho aparátu (transportními váčky) nebo do membrán ̶ Intercelulární uskladnění proteinů ve specifických (leukocyty) a pro transport mimo buňku (sekreční granula) ̶ Produkce peroxisomů 18 19 Hladké (agranulární) endoplazmatické retikulum (AER) Funkce hladkého ER – syntéza lipidů včetně fosfolipidů a steroidních hormonů – detoxikační procesy (jaterní buňky) – sarkoplazmatické retikulum ve svalových buňkách (Ca2+) 20 Golgiho aparát (GA) - Systém hladkých membrán ohraničujících: cisterny (3-10) a vesikuly - Polarita GA: cis trans cis trans 21 Funkční polarita GA Transport proteinů z GER: transportními váčky Strana konvexní – cis (produkční) Strana konkávní – trans (maturační) kondenzační vakuoly sekreční zrna lyzosomy 22 Funkce GA ̶ posttranslační úprava a maturace proteinů (glykosylace, sulfatace, fosforylace) ̶ kondenzace a skladování sekrečních produktů  kondenzační vakuoly, sekreční granula ̶ vznik lysozomů ̶ vznik akrozomálního váčku při přeměně spermatidy ve spermii ̶ donor membrán 23 Lyzosomy ̶ váčky – jednoduchá membrána, ̶ matrix s hydrolytickými enzymy kyselého pH (kys. fosfatáza, karboxylesterhydrolázy, katepsiny, hyaluronidáza, nespecifická esteráza, lipáza, ribonukleáza, kolagenáza aj.) primární (ještě se nezapojily do trávení, jen enzymy) fagosomy (exogenní původ tráveného obsahu) Lyzosomy sekundární autofagické vakuoly (endogenní původ t. obsahu) (multivesikulární tělíska) terciární (reziduální tělíska /lipofuscin/) 24 Lyzosomy primární Ly sekundární Ly fagosomy autofagická vakuola terciární Ly reziduální tělíska multivesikulární tělísko 25 26 autofagická vakuola27 28 Peroxisomy (mikrotělíska) - váčky – 0,1 - 0,5 m Ø, jednoduchá membrána - matrix s oxidativními enzymy (peroxidáza, kataláza, urikáza aj.) [nukleoid = krystaloid] 29 30 31 Funkce lyzosomů a peroxisomů ̶ Ly – intracelulární digesce endo- a exogenního materiálu ̶ Pe – detoxikace (rozklad H2O2, štěpení purinů a mastných kyselin) – účast na syntéze žlučových kyselin – účast na syntéze fosfolipidů 32 33 Centriol ̶ tvar: cylindr (válec) ̶ velikost: Ø 0,2 m, délka 0,3 - 0,5 m ̶ stavba: 9 tripletů mikrotubulů po obvodu stěny centriolu ̶ výskyt v buňce (v interfázi): 1 pár na sebe kolmých centriolů [„T“] v cytoplazmě blízko jádra = centrosom Mikrotubulus – podélně a příčně protofilamentum se skládá z dimerů α a β tubulinu mikrotubulus se skládá z 13 protofilament mikrotubulus: (13 protofilament) dublet v řasince triplet v centriolu Dublety a triplety – částečně sdílená stěna mikrotubulů 34 Stavba centriolu Pár vzájemně kolmých centriolů spolu s pericentriolární matrix a satelitními strukturami vytváří centrosom → mikrotubuly organizující centrum35 Centriol, pericentriolární matrix a satelitní struktury - příčně36 Centriol a satelitní struktury - podélně 37 Funkce centriolů Duplikace centrozomů v průběhu dělení buňky  vznik dělícího vřeténka Mnohočetná replikace centriolů v průběhu ciliogeneze  vznik bazálních tělísek řasinek a z nich vycházející axonemy 38 bazální tělíska řasinky řasinky axonema Dělící vřeténko s chromosomy39 40 Řasinky - bazální tělísko a axonema41 Inkluze ̶ přechodné (dočasné) součásti buňky ̶ Sekreční granula ̶ Zásobní látky glykogen lipidové kapky ̶ Krystaly ̶ Pigmenty endogenní - autogenní (melanin), hematogenní (hemosiderin, biliverdin, bilirubin), lipofuscin exogenní - prach, barviva (karoteny), tetováž 42 Sekreční granula 43 Glykogen β – granula (40 nm) α – granula (shluky, až 400 nm) lineární, bohatě větvený polymer složený z molekul glukózy 44 Beta granula glykogenu45 Alfa granula glykogenu46 Lipidové kapky 47 nemají membránu, pouze fázové rozhraní Krystaly, pigmenty Pigment melanin 48 Buněčný povrch ̶ apikální – směřuje k volnému povrchu - hladký nebo s výběžky (mikroklky, stereocilie, řasinky, bičíky) ̶ laterální - povrch přivrácený k jiné buňce – mezibuněčné spoje ̶ bazální - přivrácený k bazální membráně – poloviční spoje (hemidesmosomy) 49 Apikální (volný) povrch ̶ hladký (rovný nebo členitý – např. pseudopodie) ̶ mikroklky, stereocilie ̶ Kinocilie, bičíky 50 Mikroklky = výběžky cytoplazmy vyztužené aktinovými mikrofilamenty, především zvětšují povrch pro resorpci ̶ žíhaná kutikula – př. epitel. bb. střeva ̶ kartáčový lem – př. kanálky nefronu ̶ stereocilie – jsou delší - př. ductus deferens 51 52 Mikroklky vyztužené aktinem kartáčový lem žíhaná kutikula53 Mikroklky 54 Stereocilie na epitelových buňkách v nadvarleti Řasinky (kinocilie) ̶ Pohyblivé výběžky cytoplazmy vyztužené mikrotubuly: ̶ Axonema = 9 dubletů + 1 centrální pár ̶ Bazální tělísko = centriol ̶ Žíhaná nožka – kontraktilní proteiny 55 Řasinky – žíhaná nožka, bazální tělísko a axonema 56 57 58 Bičíky ̶ složitější stavba ̶ centriol, axonema a další vyztužující struktury (chordy) ̶ př. spermie Laterální povrch ̶ intercelulární štěrbina (20 nm) ̶ mezibuněčné spoje 59 Mezibuněčné (intercelulární) spoje ̶ těsné = okluzní: zonula occludens ̶ adhezní: zonula adherens, dezmosom (macula adherens), na bazálním povrchu hemidezmosom ̶ komunikační: nexus (gap junction) 60 1. ZO, 2. ZA, 3.MA, 4.N 61 62 Zonula occludens ̶ těsné pásovité spojení blízko apexu buňky ̶ plazmalema sousedních buněk místy splývá (společné integrální proteiny – klaudiny, okludiny) ̶ funkce: utěsnění intercelulární štěrbiny 63 Zonula adherens ̶ pásovitý spoj kolem buňky ̶ intercel. štěrbina – 20 nm, kadheriny ̶ inzerují aktinová mikrofilamenta (Ø 6 nm) ̶ funkce: adheze buněk 64 Dezmosom (macula adherens) ̶ diskovitý spoj (Ø 0,3-0,5 μm) ̶ intercel. štěrbina – 40 nm; el.denzní ploténka, kadheriny ̶ inzerují intermediární filamenta (cytokeratin) ̶ funkce: adheze buněk Desmosomy a intermediární filamenta65 66 Nexus (gap junction) ̶ plošný „kanálkový“ spoj ̶ intercel. štěrbina – 2 nm ̶ 6 konexinů → kanálek konexon ̶ funkce: komunikace Mezibuněčná spojení - speciality ̶ Interkalární disky – v myokardu, obsahují adhezní spoje (dezmosomy, fascia/zonula adherens) a komunikační spoje (nexusy) ̶ Spojovací komplex (terminální lišta) - kombinace zonula occludens (těsnost, pás), zonula adherens (pevnost, pás) a dezmosomů (body); od apexu k bázi v tomto pořadí ̶ Buněčné interdigitace – na laterární straně buněk, zvětšení povrchu buňky 67 68 Bazální povrch - Hemidezmosom ̶ adhezní spoj na bazální straně buňky, diskovitý tvar ̶ „poloviční dezmosom“ ̶ inzerují intermediární filamenta ̶ funkce: ukotvení buňky 69 Bazální povrch - Bazální labyrint ̶ záhyby buněčné membrány ̶ mezi nimi mitochondrie ̶ v buňkách transportujících ionty (zvětší povrch, mitochondrie zajistí energii) Buněčný cyklus = sled dějů v buňce mezi 2 po sobě jdoucími mitózami, jehož výsledkem je vznik 2 dceřinných buněk Fáze buněčného cyklu ̶ G1 (postmitotická) ̶ S (syntetická DNA) ̶ G2 (premitotická) ̶ M (mitóza) G0 70 Interfáze ̶ G1 – fáze: postmitotický růst buňky; intenzivní tvorba nových organel – syntéza proteinů, jak strukturních, tak i enzymů a regulačních proteinů, [chromosom = 1 chromatida] (délka fáze závisí na typu buňky ± 11 hod.) ̶ S – fáze: replikace DNA v jádře  [chromosom = 2 chromatidy], replikace centriolů; (asi 8 hod.) ̶ G2 – fáze: postsyntetické zmnožení organel, syntéza tubulinu; (3-4 hod.) ̶ M – fáze: (mitóza) (± 1 hod.) ̶ G0 – fáze = zastavený cyklus (neurony, svalové buňky) 71 https://microbenotes.com/ chromosome-structure- types-and-functions/ Mitóza mechanismus, který zajišťuje genetickou identitu somatických buněk Karyokineze (rozdělení jádra): 1) Profáze - dělící vřeténko; kondenzace a spiralizace chromosomů, rozpadnutí jaderného obalu a vymizení jadérek; 2) Metafáze - chromosomy v ekvatoriální rovině (monaster), dělící vřeténko – připojení na kinetochory chromosomů; 3) Anafáze - oddělení sesterských chromatid, zkracování dělícího vřeténka - rozestup chromosomů k pólům buňky (diaster); 4) Telofáze - dekondenzace a despiralizace chromosomů, rekonstrukce jaderného obalu, Cytokineze (rozdělění cytoplazmy) – kontraktilní prstenec z aktinu 72 73 Meióza ̶ redukce a rekombinace genetického materiálu ̶ zajišťuje rozdělení diploidních primárních gametocytů (oocyt, spermatocyt) na haploidní gamety 1. meiotické dělení 2. meiotické dělení Pozn.: 2n = diploid.počet chromosomů, c = počet řetězců DNA (chromatid) od jednoho typu chromosomu Gametocyty I (diploidní; 2n, 4c) S-fáze pouze před 1.meiot.dělěním (46 chromozomů, každý o 2 chromatidách) Gametocyty II (haploidní; 1n, 2c) (23 chromozomů, každý o 2 chromatidách) před 2. meiot. dělěním již není S-fáze Gamety (haploidní; 1n, 1c) (23 chromozomů, každý o 1 chromatidě) 75 Meióza 1. Meiotické dělení Profáze I – dlouhá a modifikovaná: Leptoten – kondenzace chromosomů Zygoten – párování homologních chromosomů – bivalenty, synaptolemální komplex Pachyten – chromatidy = tetrády, rekombinace - crossing-over Diploten – zánik synaptolemálních komplexů a rozestup tetrád, chiasmata – místa, kde došlo k rekombinacím (crossing-over) Diakineze – zánik (terminalizace) chiasmat, rozpad jaderného obalu, profáze končí Metafáze (rozestup celých chromosomů), anafáze, telofáze 2. Meiotické dělení Profáze, Metafáze (rozestup chromatid), anafáze, telofáze 76 Mezi 1. a 2. meiotickým dělením nedochází k replikaci DNA! Meióza Interfáze - replikace DNA 78 79 Spermatogeneze Oogeneze 82 Srovnání mitózy a meiózy Mitóza - vznik diploidní buňky - dceřinné bb. jsou identické s mateřskou - mateřská b. 2 dceřinné bb. Meióza - vznik haploidní buňky - crossing-over spermatocyt I oogocyt I 4 spermie 1 oocyt + (2xX, 2xY) 2 pólová tělíska (X) 83 Diferenciace buněk ̶ postupná specializace buněk (biochemická, morfologická a funkční) uskutečňovaná postupným zapojováním jednotlivých částí genomu ̶ úloha signálů z okolí buňky = vzájemné interakce buněk v mnohobuněčném organizmu, příp. buněk a mezibuněčné hmoty 84 Růst buňky ̶ Růstové faktory – aktivují geny odpovědné za zahájení G1 fáze buněčného cyklu ̶ Zvětšení orgánu: hyperplazie (počet buněk ) hypertrofie (velikost buněk ) ̶ Zmenšení orgánu: atrofie 85 Buněčná smrt ̶ Nekróza - ruptura buněčné membrány; vylití cytoplazmy, uvolnění lysozomálních enzymů, zánět v okolí! ̶ Programovaná buněčná smrt - Apoptóza – kondenzace chromatinu, fragmentace cytoplazmy, apoptotická tělíska s membránou likvidace makrofágy aj. (fagocytóza), bez zánětlivé reakce! - Autofagie - rozklad buněčných struktur pomocí lysozomů 86 87 Použité zdroje ̶ Cytologický a embryologický atlas, PETR VAŇHARA (ED.), JANA DUMKOVÁ (ED.) ̶ Histologický atlas LF MU VAŇHARA, Petr, Miroslava SEDLÁČKOVÁ, Irena LAUSCHOVÁ, Jana DUMKOVÁ, Veronika SEDLÁKOVÁ, Svatopluk ČECH a Aleš HAMPL. Histologický atlas LF MU. 1. vyd. Brno: Masarykova univerzita, 2018. Elportál. ISBN 978-80-210- 9068-2.