De novo nebalancovaná komplexní přestavba zahrnující chromosomy 3, 7, 14 nalezená u postižených dvojčat narozených po IVF - kazuistika. Hanáková M.1'3, Vaňásková M.1, Gromesová B.1, Vilémova M.1, Nikolová P.1, Wayhelová M.1'2, Filková H.1, Hladílková E.1, Němečková J.1, Kalina Z.1, Sobotka J.4, Kuglík P.1'2, Gaillyová R.1'2 Fakultní nemocnice Brno, Oddělení lékařské genetiky, Brno ! Masaryk ova univerzita, Přírodovědecká fakulta, Ústav experimentální biologie, Oddělení genetiky a molekulární biologie, Brno 2 Masarykova univerzita, Lékařská fakulta, Katedra laboratorních metod, Brno3 Spadialab, a.s., Laboratoř lékařské genetiky, cytogenetická laboratoř, Nový Jičín4 ÚVOD Na OLGFN Brno byla vyšetřena postižená monochoriální biamniální dvojčata bez stigmatizace narozená po IVF/KETbezPGD. Sourozenci ze 6. gravidity, primipara, zavedeno 1 embryo, průběh gravidity bez obtíží. Prenatálně od počátku jeden z plodů menší. Porod ve 35+3 tg.. Míra postižení sourozenců se liší. U dvojčete Abyla zjištěna izolovaná VW atrezie jícnu Vogt 3b, porucha polykacího aktu, opakované respirační infekty, neprospívání, opožděný vývoj a oboustranná percepční nedoslýchavost. Dvojče B, které prospívá lépe než dvojče A, trpí dyskoordinací polykacího aktu, zatékáním potravy do trachey, VW jícnu není přítomna, předpokládá se funkční nezralost GIT. Ve vývoji je rovněž opožděn. Oba sourozenci nejsou schopni normálně přijímat potravu a proto jim byl zaveden PEG. Předchozí gravidity rodičů: 2xGEU, 2xSA, lx biochemická gravidita MATERIÁL A METODY Stanovení karyotypu: periferní krev - G-pruhování chromosomů; LUCIA-KARYO software, Laboratory Imaging, Praha, Česká republika FISH: KreatechFISH probes Leica Whole Chromosome, 3,7,14, The Netherlands;LUCIA-KARYO/FISH software, Laboratory Imaging, Prague, CzechRepublic array-CGH : čip: SurePrintG3 Human CGH Microarray Kit 8x60K, značení: SureTagDNA Labelling kit, software: Agilent Genomic Workbench 7,0, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA; hodnotící filtry: CNV min. 200kb (5 sond), log2 ratio 0,2 mBAND: Human mBand Probe Xcyte 3, MetaSystems, Altlussheim, Germany VÝSLEDKY A DISKUSE U obou sourozenců byla detekována komplexní chromosomová přestavba zahrnující translokaci chromosomů 3, 7 a 14, suspektní inverzi na chromosomů 3 a mikrodeleci na chromosomů 14 o velikosti 7,84 Mb. V oblasti mikrodelece se nachází 13 OMĽVI genů, z toho 3 (PAX9, SEC23Aa TRAPPC6B) jsou popsány v souvislosti s patologickými fenotypy. GenPAX9 kóduje protein rodiny transkripčních faktorů. Patogenní sekvenční varianty jsou popisovány v patogenezi selektivní agenezí zubů 3 (AD). Gen SEC23Akóduje protein účastnící se transportu veziklů v buňce meziendoplazmatickýmretikulema Golgiho aparátem. Patogenní sekvenční varianty jsou popisovány v souvislosti s craniolenticulosuturální dysplazií (AR), projevuje se faciální stigmatizací, pozdním uzavíráním fontanel, kataraktami, defekty skeletu. Gen TRAPPC6B kóduje protein, jenž je součástí komplexu TRAPP, účastnícího se vezikulárního transportu v buňce. Patogenní sekvenční varianty jsou popisovány v patogenezi neurovývojové poruchy s mikrocefalií, epilepsií a atrofií mozku (AR) (OMĽVI #617862). Inverze na chromosomů 3 zůstává nadále suspektní, pomocí metody mBAND nebylo možné přítomnost inverze potvdit ani vyloučit. V době vyšetření byly u pacientů zjištěny pouze patologické projevy popsané v kapitole „Úvod". Vzhledem k nízkému věku pacientů nelze posoudit některé aspekty fenotypu, které by mohly souviset s nalezenou mikrodeleci. U pacientů s delecí 14ql3 jsou dle literatury časté potíže s příjmem potravy (problémy se sáním, polykáním, reflux) v období po porodu. S věkem se problémy zlepšují. Pokud delece zasahuje až do pruhu 14q21,jak je tomu i u našich pacientů, bývá zpravidla postižení dětí závažnější. Obvykle j sou krmeny nosojícnovou sondou nebo PEGem.(databázeUnique- 14ql3 deletion, w\j .org). Studie prováděné u monozygotních dvojčat naznačují, že rozdílné vyjádření patologického fenotypu u sourozenců může souviset s neodhalenými environmentálními nebo epigenetickými faktory. Je možné uvažovat také o vzniku somatických mutací v DNA plodů během embryonálního vývoje, tyto ale bývají detekovány pouze zřídka. KARYOTYP SOUROZENCŮ (Obr. 1): HOL li 11 M U Obr. 1 Zápis dle ISCN(2016) 46,XY,der(3)?inv(3)(q23q27)t(3;14)(q2?7;q?12)del(14) (ql3.3q21.2),der(7)t(3;7)(q2?7;q3?5),der(14)t(7;14)(q3?5;q?12) Karyotyp dvojčat byl detekován postnatálně. KARYOTYP RODIČŮ: 46.XX a 46.XY PROFIL ARRAY-CGH - ANALÝZA DVOJČAT (Obr. 5): Zápis dle ISCN (2016) arr[hgl9] 14ql3.3q21.2(37099933_44935036)xl velikost mikrodelece: 7,84Mb OMM geny v oblasti mikrodelece, zvýrazněné geny byly popsány v souvislosti s patologickými fenotypy: PAX9, SLC25A21, MIPOL1, FOXA1, SSTR1, CLEC14A, SEC23A, SIPÍ, TRAPPC6B,PNN, CTAGE5, FBX033, LRFN5 FISH (Obr. 2,3,4): 3Í A Obr. 2 Obr. 3 Obr. 4 . Obr. 5 ZAVER VzWedem k velikosti a charakteru zasažených genů je mikrodelece příčinou patologického fenotypu u sourozenců. Jednoznačný klinický dopad zjištěné komplexní přestavby není možné přesně specifikovat, jedná se o unikátní cytogenetický nález. Je možný komplexní zdravotní dopad včetně poruchy sluchu. Pomocí dalších vyšetřovacích metod by bylo možné upřesnit příčiny rozdílného vyjádření patologického fenotypu u dvojčat. Podpořeno projektem Institutional Support of University Hospital Brno 2019 - PIG 5/2019