1
BÍLKOVINY KREVNÍ PLASMY
© Biochemický ústav LF MU   (V.P.)   2007
BÍLKOVINY KREVNÍ PLASMY
dělení podle funkce:
1/ transportní proteiny 2/ proteiny (reaktantv) akutní fáze 3/ proteiny srážení krve 4/ proteiny imunitního systému 5/ regulační proteiny
6/ proteiny a jejich fragmenty uvolňované při degradaci nebo poškození buněk a tkání
j
Elektroforéza proteinů lidské plazmy
(acetylcelulosa, pH - 8,6)
elektroforeogram
denzitometrické vyhodnocení
**
* <?  ^
^    ^ o° J&    <č
Alb.      Alpha^  Alpha2   Beta
Gamma
Proteinové frakce lidské krevní plazmy
Proteinová frakce	% z celkových proteinů plazmy	Např.	
albumin	gl                   ■ — 59,2	prealbumin (transthyretin) albumin	PREA ALB
Otj-globuliny	3,9	oc,-glykoprotein (kyselý) «.-antitrypsin ax-lipoprotein (HDL)	AiAG AlAT
a2-gIobuliny	.   7,5	ceriiioplnsmin haptoglobin a2-makroglobulin	CPL Í1PG A2M
ß-globuliny	12,1	hcniopexin transferrin fibrinogen [^-lipoprotein (LDL)	IIPX TRF FBG
y-globuliny	17,3	IgM, IgA, IgE, IgD, IgG	
Haptoglobin (Hp)
a2-globulin krevní plasmy, glykoprotein (Mr= 86.000). Váže volny Hb, pokud se abnormálně vyskytuje v krevní plasmě. (2 Hb : 1 Hp) —» RES jater (Kupffe-rovy bb.)
[Existují 3 genetické varianty, složené ze 2 druhů bílkovinných řetězců („1 a 2" nebo „a a ß"), které se kombinují ve dvou podjednotkách. Výsledek je Hp 1-1, Hp 2-1 a Hp 2-2],
Hemopexin (Hpx)
ßi-globulin krevní plasmy (Mr= 57.000). Váže v krevní plasmě volny hem.
7
MONOCLONAL
GAMMOPATHY
□ Normal Pattarn Abnormal Changes
;■■«;■;:■
POLYCLONAL GAMMOPATHY
PROTEIN LOSS THROUGH INTESTINE
5E RESPONSE
NEPHROTIC SYNDROM
Recovery—Acute
Thermal Burns
Alpha-2 Macroglobuiin
Cystatin C,   clearance:
Kreatininová clearance je nahrazována clearancí cystatinu C.
Je to nízkomolekulární bílkovina, která má v extracelulárních
tekutinách funkci inhibitoru cysteinových proteas (odtud název:
Cys + statin).
Cystatin C je rovnoměrně uvolňován z buněk do krevního oběhu,
kde jeho koncentrace je stálá (nezávislá např. na zánětlivých
stavech).
[Cystatin C vykazuje větší intraindividuální variabilitu, ale menší
interindividuální variabilitu ve srovnání s kreatininem. To
umožňuje časnější odhalení poškozené ledvinové funkce.]
V ledvině je vylučován výhradně glomerulární filtrací (kreatinin
také v nepatrné míře tubulární sekrecí!).
Stanovuje se imunochemicky. Určitá omezení diagnostického
významu lze očekávat u některých onkologických pacientů a
u nemocných po transplantaci ledvin.)                                 13
Micral test (mikroalbuminemie)
diabetes:
neenzymová glykace kolagenu v bazálni membráně glomerulů
hypertenze:
zvýšený filtrační tlak
[—
J
1
bteôoVWXA
^AT&&
S^n:
^k^k^v
§*&
Mi
5
6   7
v    /   /I|^H^^taMM^H^^H^H^H
1.   nosná fólie
2.    „zásobník" moče
3.   pufrovací zóna.
4.   protilátka značená zlatem
5.   zóna se zakotveným   albuminem (k zachycení přebytku protilátky)
6.   zóna barevné reakce
7.   průsvitná fólie
14
t


j WANNHEIM
novrn \
'    \>.   ■    ■■■■■■
„Albumin < 20 mg . ľ1"
(v ranní moči)
15
i
-r*-v
^*

^^v     ■
16
17
18
3ÍLK0VINA
filtrační bariéra
praktická neprostupnost
s> pro proteiny   Mr > /SO. 000
^ pro proteiny    Mr > CO. OVO waji-fi výrazný neacctívní naboj
ftransrerin Mr= S°.000 f* C albumin  Mr - 67 000 J (srwnej:   almtrultrňť prtétiMkřie.)
- tubu lát n í resorpce/pinocytoša) temeř všech proteinu,   primární r»oče
S M~ < 7S.O00    /srovnej: tubular »ť r                        I           w    proteinurie)
Proteiny AJ poškozených   bb, á) Ta. f chronicko'eeW 3) průnik p/azmy.
Moč zdravých obsahuje
<~ albumin < 20 ma/ä' f primer 3-£}*al9*
~ tysotym                            < 0j&
~ /i*- mikroa/obufth *>32M&~
Proteinurie
19
E lek tro fora za     SDS - PA&
0
nr~f
n
i©
Hí*\
431
4SS-
trř
'Proteinurie
—i—i—i—i-------------1—
Jfe) MAT:       Hbz AÁA&
l l l I I
—I—
2'1
K2P
4Q>  At Hb
31i
r      x; ,
6selektívna
S
loynervIcĹrni' necelekti'vm
r
íubulárnZ
éubuloĹrm' inkomplett
r~        •
&ortrena-lm   a.   mtcene
neprosiv-phoft alomenilu, >4&0
<           I
< ?£* a řfornieLlm   tubu laur »ľ r*sorpc-c
>«
bíHcriňy j rff%\tnjm M *abt?j*m
LEDVIN*.
Proteinurie
20
Typyproteinurií                                                                    Elektroforeogram SDS-PAGE
I
o
00
■i I
■ti             fi
ca                       EC
1       i    «
Kj            d        ö                      *o
I------------------------------------------------------1
glomerulární selektivní
H
neselektivní glomerulární
tubulární
nekompletní
tubulární
Proteinurie
a		■M
u		
«'		o
N		00
> —<	£	1
O a	o a	a
£3	o S	IN CCL
■    I ■ 11   ■ ■ ■ II
Mr.103        150                   89           67       54     44              32          22        16      12
+
Mikroalbuminurie (20 - 300 mg/d) - časný indikátor začínající diabetické nefropatie                                                       ~,
Kallikreiny :
•  serinové proteinasy (proteasy), hormonálně regulované
•  původ: hl. hormonálně závislé tkáně
(mléčná žláza, vaječník / prostata, varle)
•  funkce: není zcela známá   -   hemokoagulace
-   fibrinolýza
-   trávení
-   regenerace a remodelace
ECM    ( = extracelulární matrix)
-   aktivace receptom
•  onkológie: vztah mezi růstem mortality a aktivitou
kallikreinů
22
Proteinasv (proteasy) - klasifikace :
Třídy proteolytických enzymů (podle aktivního centra) :
1/ serinové / threoninové
(trypsin, chymotrypsin, elastasa, koagulační enzymy, proteasom)
2/ cysteinové
(kaspasy)
3/ aspartatové
(pepsin, katepsin, renin)
4/ metaloproteinasy
(ACE)
Proteolytické enzymy j sou hydrolasy   (EC 3.4.....)
23
Kaspasy :
Caspase = Cysteine-dependent ASPartate specific proteASE
(akronym, zkratkové slovo) zv. neurovegetativní choroby,        sn. nádorové bb.
infarkt,
mozková mrtvice
•   proteinasy Cys typu
•   účastní se apoptózy
•   existují kaskády kaspas
•   v klidovém stavu v bb. přítomny jako zymogeny
(pro-kaspasové molekuly)
24
25