Nátěr krve na skle
Bourková L., OKH FN Brno
Zhotovení nátěru krve
* potřeby:
podložní sklíčko, roztírací sklíško
* roztírací sklíčko položit před kapku krve na
podložním skle pod úhlem cca 30 - 40° (nikdy
ne do kapky krve); po doteku krve a roztíracího
skla se krev rozlije podél hrany skla; po té
rychle krev rozetřít po podložním skle
* sílu nátěru zvažovat ­ čím větší úhel, tím
silnější nátěr
* nátěr musí být: rovnoměrný, přiměřeně tenký,
dlouhé okraje musí být rovné, na konci
přechází ,,do ztracena" (alespoň 1 ­ 2 cm)
Provedení nátěru
Barvení
* Důležité: správné provedení, zaschnutí, fixování,
barvení nátěrů
* Zamezení vlhkostí v roztocích a na nátěru (již 1%
příměs vody v metanolu může znemožnit správnou
interpretaci vyšetření, zvláště morfologie erytrocytů)
* Nejběžnější metoda barvení:
May-Grőnwald / Giemsa-Romanowski
,,MGG"(Papenheimova metoda) - nejpoužívanější metoda,
ve všech směrech zcela uspokojující
* Další metody např.:
Wrightova (jednoduchá), Leishmanova (rychlá,
orientační)
* Správný immerzní olej
ˇˇ kontroly nabarvených nátěrůkontroly nabarvených nátěrů
Barvení - MGG
* Základní složky barvení:
­ fixace: metanol + barviva
­ barvení: metanol +glycerin + fosfátové pufry + barviva
* pH 6,8 ­ 7,0
­ Kationtové nebo zásadité barvy, jako je např. azur B, se váží
na aniontovou složku a dávají modrošedá zbarvení
nukleových kyselin (DNA nebo RNA), nukleoproteinů,
granulí bazofilů a slabě barví granula neutrofilů.
­ Aniontové nebo kyselé barvy, jako je např. eosin Y, se váží
na kationtovou složku proteinů a dávají oranžovočervená
zbarvení hemoglobinu a eozinofilním granulím
* Celkové barvení se skládá z řady různých kombinací
těchto barev, které nakonec dávají výsledný vzhled
nabarveného nátěru.
Hodnocení
* komplexně celý nátěr (WBC, RBC, PLT)
* v rovnoměrně rozetřeném místě
* zvětšení 1000x, 200x (100x)
* zbarvení nátěru
* zbarvení buněk
* hodnotit buňku v kontextu s celým nátěrem
* hodnotit periferní nátěr v souvislosti s přístrojovým KO
* minimální běžný počet hodnocených buněk:
­ periferní krev: 100 leukocytů
­ kostní dřeň: 250 jaderných elementů
* vydávané výsledky pro nátěr periferní krve i KD: [%]
Hodnocení nátěru
Leukocyty
* Velikost buněk: malé, střední, velké
* Charakteristika jádra: jaderné stíny, holá jádra, poměr
jádra k cytoplazmě, jaderný chromatin, jadérka
(přítomnost, nepřítomnost, počet, velikost), členitost a tvar
jádra (variantní lymfocyty, reaktivní lymfocyty), velikost
jádra (tyče, metamyelocyty), hypo-,hyper segmentace NE
* Charakteristika cytoplazmy: granulace, bez granulace,
specifická, nespecifická, toxická granulace, barevný odstín
cytoplazmy (zralost buňky, reaktivní lymfocyty),
vakuolizace, barevné inkluze, Auerovy tyče, okraje
cytoplazmy (členité, hladké, vlasaté)
Velké granulované lymfocyty ­ LGL (large granular
lymphocytes)
Erytrocyty
* Velikost (MCV, RDW, distribuční křivka)
* Barevné odchylky (MCH, MCHC)
* Tvarové odchylky
* Buněčné inkluze
* Shluky
* Rozložení
* Jaderné elementy (NRBC)
Trombocyty
* Velikost (MPV, PDW, distribuční křivka)
* Granulace
* Shluky (satelitóza)
* Fragmenty (RBC, WBC)
* MGK, holá jádra MGK
* Kontrola mikroskopicky pod 80x109/L
* PLT mikroskopicky:
počet PLT na 1000 RBC * RBC(1012/L)
* Odběr do citrátu