Klinická genetika, genetické poradenství, cytogenetika, DNA diagnostika (od pacienta k DNA a zpět) OLG a LF MU 2011 Renata Gaillyová Lékařská genetika •Charakteristika a historie a současný stav oboru •Genetická prevence •Genetická vyšetření – indikace, postup •Pacienti genetických poraden • Lékařská genetika •Pokud se ve starších medicínských knihách psalo, že genetická onemocnění představují minoritu, je dnes opak pravdou. • •Pouze minorita onemocnění nemá menší či větší genetické dispozice. • Lékařská genetika •Medicína 21. století prochází i díky genetice revolučními změnami a zásadně mění pohled na etiologii a klasifikaci mnoha onemocnění a zároveň slibuje v budoucnu i významné změny v terapii. • •Klinická genetika se stala nejen uznávanou medicínskou specializací, ale bylo nezvratně prokázáno, že lidská genetika představuje důležité obecné a společné principy, které osvětlují a sjednocují veškerou lékařskou praxi. • Historie •J. G. Mendel - zakladatel vědního oboru •1865 - Mendelovy zákony • •1944 - funkce DNA •1953 - struktura DNA •1956 - 46 chromosomů u člověka •1957 - léčba fenylketonurie •1959 - M. Down - 47, XX, +21 •60. léta - založeno několik genetických laboratoří •1965 - 100. výročí Mendelových zákonů Lékařská genetika • I když v současné době jsou naše možnosti ještě velmi omezené a můžeme pouze zatím většinou • „diagnostikovat neléčitelné“ • a vyhledávat osoby v riziku, • lze terapeutické využití oboru v příštích desetiletích jistě očekávat. • Lékařská genetika •Lékařská genetika se zabývá diagnózou dědičných chorob a stará se o jejich medicínské, sociální a psychologické aspekty. •Stejně jako ve všech ostatních oblastech medicíny i v genetice je zásadní stanovit správnou diagnózu a poskytnout vhodnou péči, která musí zahrnovat pomoc postiženému jedinci a členům rodiny tak, aby porozuměli povaze a důsledkům onemocnění a vyrovnali se se s nimi. Lékařská genetika •Je-li však choroba dědičná, přistupuje další rozměr: potřeba informovat ostatní členy rodiny o jejich riziku a o možnostech, jak toto riziko modifikovat. • •Jako je specifickým znakem genetické choroby její tendence se vyskytovat v rodině opakovaně, je specifickým rysem genetického poradenství jeho zaměření nejen na původního pacienta, ale také na členy pacientovy rodiny, a to současné i budoucí. Lékařská genetika •Medicína pro minulou, současnou a budoucí generaci Genetické pracoviště •Genetická poradna - ambulance • •Laboratoře cytogenetické (prenatální, postnatální, molekulárně cytogenetické, onkocytogenetické) • •Laboratoře DNA/RNA diagnostiky (monogenně podmíněná onemocnění, onkogenetika, identifikace jedinců..) • Genetická onemocnění •Vrozené chromosomové aberace • •Monogenně podmíněné nemoci •Mitochondriální choroby • •Polygenně a multifaktoriálně dědičná onemocnění • • • VZOR2kar Kopie - TOCIVA SROUBOVKA Portrét Zastoupení genetických chorob a vývojových vad podle etiologie •0,6 % populace má vrozenou chromosomovou aberaci •incidence vážných monogenně podmíněných chorob odhadnuta na 0,36% u živě narozených novorozenců (studie na 1 000 000 dětí), méně než 10% se manisfestuje po pubertě •až 80 % populace onemocní do konce života multifaktoriálně podmíněnou chorobou (genetická predispozice + vliv zevního prostředí) Vzácná onemocnění •Vzácné onemocnění je definováno frekvencí v populaci menší než 5 pacientů na 10 000 zdravých. Pacienti se vzácným onemocněním a jejich rodiny se často nacházejí ve velmi těžké životní situaci. Diagnostika těchto onemocnění vyžaduje specializované postupy a pro raritní výskyt choroby může správná diagnostika trvat několik měsíců, někdy i let. Dalším závažným problémem je, že na mnohá vzácná onemocnění zatím neexistuje účinný lék. Pro léčitelná vzácná onemocnění jsou léky obvykle extrémně drahé. • Vzácná onemocnění •Ačkoli hovoříme o vzácných onemocněních, jedná se o skupinu více než 7000 chorob, není tedy vzácné vzácným onemocněním trpět. •Předpokládá se, že některou z těchto nemocí trpí v Evropské unii zhruba 30 000 000 lidí, což představuje 6-8% všech obyvatel. V České republice tedy můžeme předpokládat vzácné onemocnění u 60 000 až 80 000 pacientů. •Specializované týmy mají za cíl zlepšit diagnostiku, léčebnou péči a informovanost o těchto nemocech, pacientech a jejich rodinách a napomoci ke snadnějšímu přístupu k erudovanému týmu odborníků - lékařů, sociálních pracovníků, speciálních pedagogů a dalších. • Genetická konzultace Shormáždění informací •Osobní anamnesa •Rodinná anamnesa •Genealogické vyšetření, sestavení minimálně třígeneračního rodokmenu •Etnické informace •Konsanquinita •Nonpaternita Klinickogenetické vyšetření •Somatické odchylky - stigmatizace •Vrozené vývojové vady •Psychomotorický vývoj •Mentální retardace •Dermatoglyfy • • Genealogie sestavení rodokmenu sňatek rozvod konsanguinita monozygotní dvojčata dizygotní dvojčata žádné potomstvo potrat mrtvě narozené dítě muž žena postižený neznámé pohlaví přenašeč proband zemřelý jedinec Symboly používané k zakreslení rodokmenů Rodokmen Autosomálně dominantní dědičnost Autosomálně dominantní dědičnost riziko onemocnění potomka 50% 0% 50% 50% 0% 0% Rodokmen Autosomálně recesivní dědičnost Autosomálně recesivní dědičnost riziko nosičství mutace 100% 50% 2 mutace - nemocný 25% 25% 50% 50% 50% Autosomálně recesivní dědičnost Riziko pro sourozence Riziko onemocnění pro sourozence nemocného – 25% Riziko přenašečství pro sourozence nemocného – 50% Rodokmen - X-recesivně vázaná dědičnost riziko pro děti 50% dcer jsou přenašečky 50% synů je nemocných všechny dcery nemocného muže jsou přenašečky, všichni synové jsou zdraví žena - přenašečka nemocný muž Mílníky v lidské cytogenetice ●1956 Tjio a Levan korigovali počet chromosomů na 46 (vizualizace chromosomů,colchicin+hypotonie) ●1959 Lejeune a spol.- popsaná 1.trisomie lejeune Kardiovaskulárne anomálie okolo 40% -Atrioventrikulárny kanál Tracheoesofageálna fistula, pylorická stenóza , duodenálna atrézia 8% Hematologické-polycytemia, akútna lymfoblastická leukémia má zvýšený výskyt Chromosomy VZOR2mit Cytogenetické vyšetření •Karyotyp • zdravá žena 46,XX • zdravý muž 46,XY • •Patologický nález • vrozené chromosomové aberace • získané chromososmoé aberace • (onkocytogenetika) • Materiál pro cytogenetické vyšetření VCA •prenatálně •buňky plodové vody •choriové klky •placenta •pupečníková krev •tkáně potracených plodů • •postnatálně •periferní krev (+ Heparin) •vzorky různých tkání (biopsie kožní, stěry bukální sliznice..) • Cytogenetické vyšetření postnatální •Obvykle 2-3 ml krve + 5-6 kapek Heparinu •Protřepat •Předat do laboratoře •Objednané termíny vyšetření • •Kultivace •Výsledek nejdříve za 7-10 dní, obvykle za 1 měsíc • Nejčastější indikace k postnatálnímu stanovení karyotypu •1. typický fenotyp – podezření na VCA •2. novorozenec s mnohočetnými vývojovými vadami •3. neprospívajicí kojenec +/- stigmata •4. psychomotorická retardace+/-stigmata •5. anomalie genitálu •6. porucha pohlavního vývoje •7. sterilní a infertilní páry •8. dárci gamet • Nejčastější indikace k prenatálnímu stanovení karyotypu (plodu) •1. Patologický UZ nález plodu •2. Patologický nález v biochemickém screeningu •3. Vyšší věk rodičů •4. Rodiče nesou balancovanou chromosomovou aberaci •5. Předchozí porod dítěte s vrozenou chromosomovou aberací • • Molekulárně genetické vyšetření •Monogenně dědičná onemocnění •Detekce mutací na úrovni DNA-RNA- přímá analýza •Segregace patologie v rodině – nepřímá analýza • •Submikroskopické změny na chromosomech •Onkogenetická vyšetření • •DNA/RNA analýza, CHG, HR-CGH, array CGH, MLPA Molekulární biologie •Metodiky využívané stále šířeji v laboratorní praxi mnoha oborů • •Využití v klinické genetice je jednou z možností využití metod molekulární biologie Diagnostika chorob na molekulární úrovni •Stále se rozšiřuje počet onemocnění s objasněnou molekulární podstatou • •Stále se zvyšuje počet onemocnění s možností DNA diagnostiky • •Stále se rozšiřuje spektrum metod využívaných v DNA diagnostice - při vyhledávání mutací způsobujících závažná dědičná onemocnění DNA analýza dědičných onemocnění •Diagnostické testy – potvrzení klinické diagnosy na molekulární úrovni, případně potvrzení segregace patologické alely v rodině • •Prediktivní (presymptomatické) testování – onemocnění s pozdním nástupem klinických příznaků, onkologie • •Prenatální testy • Genetické poradenství a DNA analýza •Vyšetření na molekulární úrovni by vždy mělo doprovázet genetické poradenství • •Diagnostika na molekulární úrovni musí být vždy prováděna s informovaným souhlasem pacienta nebo jeho zákonného zástupce • •Výsledek molekulárně genetického vyšetření by měl být vždy interpretován erudovaným lékařem – klinickým genetikem Molekulárně genetické vyšetření •Protokolární postupy – cílené vyšetření vysoce suspektního onemocnění •Pokud možno přesná klinická dg. •Informovaný souhlas •Interdisciplinární spolupráce • (klinický lékař, klinický genetik, molekulární biolog, pacient) •Genetické poradenství před prováděným molekulárně genetickým vyšetřením a při předání – interpretaci výsledku vyšetření DNA banka •Slouží k uchování biologického materiálu, který bude možno využít v případě zavedení nových metodik, postupů či vyšetření u různých dědičných onemocnění • •Izolace a uložení DNA v DNA bance se souhlasem pacienta nebo rodiny umožňuje zachování vzácného materiálu, který v budoucnu může umožnit rodinám využít diagnostické, presymptomatické či prenatální vyšetření DNA banka •Slouží k uchování biologického materiálu, který bude možno využít v případě zavedení nových metodik, postupů či vyšetření u různých dědičných onemocnění • •Izolace a uložení DNA v DNA bance se souhlasem pacienta nebo rodiny umožňuje zachování vzácného materiálu, který v budoucnu může umožnit rodinám využít diagnostické, presymptomatické či prenatální vyšetření Pacienti genetické poradny •Zemřelí, již nežijící členové rodin •Dospělí •Těhotné ženy •Plody- budoucí děti •Děti •Partneři plánující rodičovství • • Pacienti genetických poraden •rodiny s výskytem dědičného onemocnění, chromosomové aberace, vývojové vady •páry léčené pro poruchy reprodukce •těhotné ženy se zvýšeným rizikem postižení plodu •příbuzenské páry •osoby se zvýšeným rizikem indukovaných mutací (vliv zevního prostředí) •dárci gamet •pacienti s onkologickým onemocněním •Děti •s vrozenými vývojovými vadami a jejich rodiny • •s podezřením či potvrzením dědičné choroby a jejich rodiny • •s podezřením nebo potvrzenou dědičnou poruchou metabolismu a jejich rodiny • •s podezřením na vrozenou chromosomální aberaci (atypická vizáž, vývojové vady, neprospívání, předčasný porod) •děti s předčasnou či opožděnou pubertou • •děti s vývojovými vadami genitálu • •děti pro náhradní rodinnou péči (z kojeneckého ústavu) Děti a dospělí pacienti •s psychomotorickou retardací • •s malým nebo nadměrným růstem • •rodiny s výskytem onkologického onemocnění u dítěte nebo při opakovaném výskytu onkologického onemocnění v rodině • • Dospělí pacienti •příbuzenské páry • •osoby dlouhodobě exponované škodlivinám zevního prostředí • •transsexuálové • •partneři léčení pro neplodnost a partneři s opakovanými spontánními potraty • •dárci spermií a dárkyně vajíček • • Těhotné ženy •s positivní rodinnou anamnézou (neplodnost, opakované potraty, dědičná onemocnění, vývojové vady) • •s nepříznivou anamnézou v těhotenství (dlouhodobé onemocnění, léky v těhotenství, akutní onemocnění v počátku těhotenství - teploty, léky, rtg vyšetření, CT, očkování, návykové látky...) • Těhotné ženy •s patologickým nálezem v biochemickém screeningu • •s patologickým UZ nálezem u plodu- vývojová vada u plodu • •starší 35 let (event. součet věku rodičů 70 a více let) • Postup při vyšetření v genetické poradně •Konzultace •Klinicko-genetické vyšetření •Informovaný souhlas •Návrh a zahájení laboratorních genetických vyšetření – odběr krve většinou stačí •Další odborná vyšetření •Shromáždění výsledků a dokumentace •Genetická prognóza • Genetické poradenství •Specializovaná konzultace a genealogická studie partnerů, případně specializovaná laboratorní vyšetření, které mohou potvrdit nebo vyloučit podezření na genetickou zátěž v rodině Cíl genetického poradenství Stanovit přesnou klinickou diagnosu a na jejím základě vyslovit pro danou rodinu genetickou prognosu se všemi důsledky Genetické poradenství genetická prognóza •Povaha a důsledky postižení •Riziko opakování onemocnění v rodině •Možnost dalšího vyšetření nyní nebo v budoucnu •Možnosti dalších vyšetření před graviditou nebo v těhotenství - prenatální vyšetření •Doporučení sledování a léčby u specialistů •Informace a kontakty na svépomocné organizace, specializovaná pracoviště a instituce Svépomocné organizace •Organizace obvykle zaměřené na jednu chorobu nebo skupinu onemocnění s podobnými příznaky •Mohou významně pomáhat lidem, kteří mají zájem sdílet své zkušenosti s někým, kdo má stejné problémy, předávají vzácné informace (novým pacientům, ale i lékařům a dalším profesionálům), sledují novinky v léčbě a prevenci, podporují výzkum… Genetické poradenství •Základní úlohou genetického poradenství je poskytnout pacientům s geneticky podmíněným onemocněním, případně jejích příbuzným, dostatek informací o charakteru dědičné choroby, o jejím dalším průběhu, možnostech léčby a o výši rizika opakovaného výskytu u dalších příbuzných. Prevence v lékařské genetice • •Primární • •Sekundární • Primární genetická prevence •Preventivní postupy, které můžeme nabídnout před (optimálně plánovanou) graviditou Primární genetická prevence •Reprodukce v optimálním věku •Prevence spontánních a indukovaných mutací •Očkování proti zarděnkám •Prevence infekcí •Prekoncepční a perikoncepční péče •Vitamínová prevence velkých rozštěpových vad •Prekoncepční konzultace ošetřujícího lékaře, případně specialisty •Vyšetření získaných chromosomových aberací •Kontracepce, sterilizace, adopce, dárcovství gamet Sekundární genetická prevence •Postupy v graviditě •Prenatální diagnostika •Postnatální diagnostika Prevence sekundární •včasná diagnostika postiženého plodu •prenatální diagnostika •preimplantační diagnostika •předčasné ukončení těhotenství •zábrana klinické manifestace dědičného onemocnění v předklinickém období •presymptomatický screening •genetické poradenství • • • • Vnímání a hodnocení • •genetického rizika a genetické • •prognosy je zcela individuální Vnímání genetického rizika je ovlivněno •osobními zkušenostmi •charakterem •touhou po dítěti •počtem zdravých dětí v rodině •možnostmi prenatální diagnostiky Dědičná onemocnění •Vyrovnání se s dědičným onemocněním •Porozumění povaze a důsledkům nemoci •Nutná informace o rizizích pro další členy rodiny a o možnosti preventivního a presymptomatikého vyšetření příbuzných • •Nedirektivní přístup • Hlavním cílem genetické konzultace je pomoci rodině porozumět a vyrovnat se s genetickým onemocněním, ale ne redukovat výskyt geneticky podmíněných onemocnění v populaci! Existuje veľké množstvo syndrómov a sú diagnostikované nové syndrómy , ktorých fenotyp okrem retardácie je charakterizovaný „len“ nezvyčajným chovaním, motorickými prejavmi Je známa jasná korelácia medzi niektorými genetickými chorobami a špecifickým behaviorálnym typom. Behaviorálny fenotyp je výsledkom interakcie mnohých faktorov-genetických aj negenetických. Klinická genetika napomáha pochopeniu behaviorálneho fenotypu Klinická genetika napomáha pochopeniu behaviorálneho fenotypu Rozhodnutí rodiny není okamžité a definitivní. Genetik neříká, jak by se rodina měla rozhodnout, ale jak se může rozhodnout !!! Rodina si vybírá z nabídky možných postupů a vyšetření dle vlastních etických kritérií.