Laboratorní vyšetření v těhotenství- screening vrozených vývojových vad RNDr. I. Klabenešová OKB FN BRNO Logo Metodika screeningu §Lékařský screening slouží k vyhledávání osob s významným rizikem výskytu určité choroby před její klinickou manifestací. §Metoda-jednoduchá, dostupná,levná §Pozitivní výsledek screeningového vyšetření zahajuje sérii specifických a náročnějších diagnostických vyšetření nebo preventivních opatření. Parametry screeningu §Falešná pozitivita –procentuální část screeningovaných pacientek s pozitivním výsledkem testu,u kterých však specifická diagnostická vyšetření ani pozdější průběh onemocnění nepotvrdí (jednotka =%). §Falešná negativita –určitá část skutečně postižených,která je biochemicky němá.Falešná negativita u vrozených vad je 10-30 % §Senzitivita-procentuální část všech skutečných postižených,kteří byli detegováni pomocí screeningu(jednotka= %) § Screening VVV je zaměřen na zjištění rizika § §Chromozomálních aberací plodu ( trisomie chromozomu č.21-Downův syndrom a trisomie 18- Edwardsův syndrom) §Defektů kožního krytí plodu(defekty neurální trubice,rozštěpy břišní stěny) §Porodnických komplikací ve III.trimestru Chromozomální aberace §Trisomie chromozomu 21-Downův syndrom §Trisomie chromozomu 18 -Edwardsův syndrom,13-Patauův syndrom §Aberace pohlavních chromozomů,XXY nebo XO –(Klinefelterův syndrom a Turnerův syndrom) E91DBADA soubor chromozomů Soubor chromozomů v jádře buňky DS obr Downův syndrom §Syndrom trisomie 21,mongolismus §syndrom vývojových vad se slabomyslností a velmi charakteristickým klinickým vzhledem-plochý obličej s mongoloidním postavením očních štěrbin,hluboko uložený kořen nosu,malý nos, §krátká šíje,malý vzrůst,krátké neohrabané ruce a prsty,čtyřprstová rýha na dlani, §Slabomyslnost ( imbecilita nebo debilita). §svalová hypotonie sejmout0023 sejmout0034 sejmout0035 Edwardsův syndrom §Trisomie 18 §Intrauterinní opoždění růstu,porodní hmotnost 2000 g. §Malý vzrůst,typická dysmorfie obličeje(vyklenuté čelo),úzká lebka,dysplazie ušních boltců,těžké psychomotorické opoždění §Jiné mnohočetné anomálie §90% postižených umírá do 6 měsíců po narození sejmout0020 Trisomie13-Patauův syndrom sejmout0018 •charakteristický obličej, mongoloidní postavení očí •mikrocefalie •malý vzrůst •rozštěp rtu, čelisti, patra •těžké opoždění psychomotorického vývoje Smithův-Lemliho-Opitzův syndrom §Porucha pohlavního vývoje bez chromozomálních aberací. §Velmi variabilní dědičné onemocnění s malým vzrůstem,opožděním duševního vývoje.Mikrocefalii při vysokém čele, srůsty prstů u nohou. §Anomálie genitálu u §mužského pohlaví atd. sejmout0026 sejmout0030 sejmout0032 Defekty neurální trubice (NTD) § Markerem je MS AFP §Anencefalie z lebky plodu je vytvořena pouze obličejová část-jde o vadu neslučitelnou s přežitím. §Spina bifida porucha uzávěru páteřního kanálu Komplikace v III.trimestru §Riziko komplikací při zvýšení hodnot AFP,hCG nebo obou metod. §Nízká porodní hmotnost §Intrauterinní růstová retardace §Perinatální smrt plodu §Gestóza(edémy+proteinurie+hypertenze) §Nespecifické vrozené vady § § Screening VVV v těhotenství §I.trimestr (10.-13.týdnu gravidity) §II.trimestr(14.-22.týdnu gravidity)-plošně §Integrovaný screening § Biochem.screeningové markery pro VVV § § §Látky,které vytvářejí orgány plodu, dostávají se do mateřského oběhu přestupem přes placentu a plodové obaly. II.trimestr-biochemické markery § §AFP-alfafetoprotein § -primárně produkován žloutkovým váčkem,později (13.týden) fetálními játry,koncentrace v MS roste,v PV klesá. (CMIA-ARCHITECT i 2000 SR) §hCG- lidský choriogonadotropin § -tvorba hlavně v placentě,8. -10. týden maximum,dále pokles.(CMIA-ARCHITECT i 2000 SR) §uE3-nekonjugovaný(volný ) estriol § -syntéza placentou za spolupráce plodu -ukazatel fetoplacentární jednotky.Hodnota stoupá až do konce 40. týdne.(RIA manual-Immunotech) size ARCHITECT i 2000 firmy Abbott Markery pro I.trimestr §Biochemické: §odběr v 10.-13. týdnu těhotenství §PAPP-A -Plazmatický protein A spojený s těhotenstvím. § Produkován trofoblastem a vylučován do mateřského séra. Hladina PAPP-A během těhotenství roste.(ECLIA) §Free-beta hCG § Koncentrace do 10. týdne gravidity roste,dále klesá na pětinu vrcholové koncentrace.(ECLIA) §Ultrazvukové: §Provádí se v 11.-13+6.týdnu těhotenství §NT/CRL( nuchální translucence) §NB (přítomnost nosní kůstky) + - § § § § Cobas e601 firmy Roche UZ stanovení gestačního stáří §CRL vzdálenost temeno-kostrč plodu v mm (angl.crow-rump lenth).CRL 8.-16.týden = 10-80 mm. UZ-Nuchální translucence- šíjové projasnění Norma NT do 2,5- 3 mm Integrovaný test §I.trimestr:Stanovení PAPP a fβhCG a NT/CRL-vyhodnocení §II.trimestr(integrovaný test): § stanovení AFP,hCG,(uE3) + markery z prvního trimestru PAPP-A a UZ marker NT/CRL-vyhodnocení. § Integrovaný test-nejefektivnější-detekce DS: 94% při 5 % falešné pozitivitě § § Software pro hodnocení VVV §Program ALPHA §Výrobce - Logical Medical System Ltd (London) §I.trimestr, II.trimestr, integrovaný test §V programu nastaveny parametry pro biochemické a UZ markery §Klinické údaje-datum odběru,věk a hmotnost matky, UZ stáří plodu (týden,den CRL), počet plodů Hodnocení programem ALPHA §Hodnoty biochem markerů v absolutních jednotkách a v MOM(v násobcích mediánu). §Výsledek screeningu: pozitivní-negativní § Riziko : §defektu neurální trubice (NTD) §Downova syndromu §Edwardsova syndromu § Smith Lemli Opitzova syndromu §DS-vzhledem k věku matky sejmout0011 sejmout0012 Doporučení společností o lab.screeningu VVV podmínky pro zařazení do registru: §Provádět minimálně 1000 vyšetření ročně-spolehlivé stanovení mediánů. §Laboratoř musí mít VŠ pracovníka odpovědného za provádění screeningu se specializovanou způsobilostí. §Laboratoř používá účinný systém vnitřní kontroly kvality, zúčastňuje se externího hodnocení kvality nejméně ve 2 kontrolních cyklech ročně a vlastní platné příslušné certifikáty/osvědčení. § Laboratoř má vypracovaný postup pro odběr, transport a skladování vzorků, které provádí v souladu s požadavky na preanalytickou fázi. § Doporučení společností o VVV §Laboratoř musí spolupracovat s ošetřujícím gynekologem a genetickým pracovištěm, které provádí konečné vyhodnocení screeningu. §Výsledky stanovení jednotlivých analytů musí být laboratoří vydány nejpozději do tří pracovních dnů od přijetí vzorku. §Výsledek výpočtu rizika VVV je vydáván nejen v absolutní hodnotě, ale i v násobcích mediánu pro daný gestační věk. Výsledek screeningu je předáván požadujícímu gynekologickému pracovišti, které je odpovědné za další postup § Preanalytické požadavky §Analyt § Odebíraný (*) Stabilita séra Stabilita séra Stabilita séra § materiál (plazmy) (plazmy) (plazmy) § při +20 a + 25 oC při +4 a +8 oC při -20 oC § §Volný beta-hCG plná krev 6 h 1 d 1 r §hCG plná krev 12 h 3 d 1 r §AFP plná krev 12 h 7 d 3 m §Volný estriol plná krev 6 h 2 d 1 r §PAPP-A plná krev 6 h 1 d 2 m §Plnou krev je nutno doručit do laboratoře do 3 hodin po odběru. *Vlastní stanovení se provádí v krevním séru. Analytické požadavky § §Analyt Opakovatelnost** Reprodukovatelnost** Bias § §Volný beta-hCG 6 % 10 % ≤ 3 % §hCG 6 % 10 % ≤ 3 % §AFP 6 % 10 % ≤ 3 % §Volný estriol 6 % 10 % ≤ 5 % §PAPP-A 8 % 12 % ≤ 5 % § §**průměrná hodnota ze tří koncentračních hodnot v rozmezí pracovního intervalu Děkuji za pozornost § dítě