BC_SACHARIDY_N2011 1 Glukóza Analytická část Petr Breinek 2 Diabetes mellitus •8% v ČR,tj. 800 000 diabetiků •7% výskyt ve vyspělých zemích • (140 miliónů obyvatel země) •Předpověď: kolem roku 2030 se počet případů zdvojnásobí na 350 miliónů) •Asi polovina nemocných zůstává nediagnostikována ( riziko rozvoje jiných chorob) 3 Laboratorní výsledek u DM má zásadní význam pro: •Stanovení diagnózy ← glukóza • •Sledování léčby ← HbA1c • krátkodobá kompenzace • dlouhodobá kompenzace •Odhalení komplikací diabetu 4 •Charakteristická je chronická hyperglykémie (= zvýšená koncentrace glukózy v krvi) • •Příčina: organismus nevytváří dostatek inzulínu nebo není schopen inzulín patřičně využít • •Onemocnění s několika zcela odlišnými mechanismy vzniku 5 • • •Udržet koncentraci glukózy co nejblíže fyziologickým – normálním hodnotám •Snížit riziko diabetických komplikací (zrak, ledviny, kardivaskulární a nervové choroby) Cíl léčby diabetu 6 Klasifikace diabetu Typ Charakteristika Diabetes 1.typu na inzulinu závislý, imunitní Autoimunitnní destrukce beta-buněk slinivky břišní A.AUTOIMUNITNÍ B.IDIOPATICKÝ (non-imunitní) Diabetes 2.typu na inzulinu nezávislý Dochází k poruše sekrece inzulinu a sníženému působení (inzulinová rezistence) A.INZULINREZISTENTNÍ B. INZULINDEFICITNÍ Gestační diabetes Zvýšená inzulinová rezistence je dána působením těhotenských hormonů Specifické typy diabetu MODY – genetické defekty funkce beta-buněk MIDD – defekt podmíněný poruchou mitochondriální 7 Gestační diabetes mellitus •Každá porucha metabolismu glukózy diagnostikovaná u těhotné ženy •Nebezpečí pro plod (defekty nervové trubice, fetální obezita) •Při vysokém riziku (v prvním trimestru gravidity se provádí oGTT) •Ostatní těhotné ženy ( oGTT mezi 24.-28.týdnem gravidity) •Po ukončení gravidity je nutné provést rekvalifikaci gestačního diabetu 8 Rizikové faktory pro vývoj gestačního diabetu mellitu indikující provedení oGTT v 1.trimestru (alespoň dva z devíti rizikových faktorů) •Pozitivní rodinná anamnéza •Předešlé těhotentsví – novorozenec >4000g •Obezita •DM v předešlém těhotenství •Glykosurie •Mrtvý plod •Hypertenze v předešlém těhotenství •Věk > 30 roků 9 Kritéria pro nízké riziko gestačního diabetu mellitu (musí být splněny všechny) •Věk < 25 roků •BMI < 25 kg/m2 •Bez DM v rodinné a osobní historii •Bez komplikací v předešlém těhotenství • • 10 • • • •Nástroj laboratorní diagnózy diabetu mellitu • • • • Glukóza glukóza 11 Odběr krve na stanovení glukózy •Žilní krev • pro diagnostiku DM • a pro případ, že jsou potřebná další laboratorní vyšetření • •Kapilární krev • pro kontrolu léčby, ne pro diagnostiku 12 Preanalytická fáze Doporučení ČSKB, ČDS, 2005 •stanovení v plazmě žilní krve • (EDTA + NaF) •zpracování do 60 min po odběru •odběr nalačno (min. 8h lačnění) • (přiměřená hydratace,v posledních 3 dnech vyloučit fyzickou aktivitu a kouření,stravování bez restrikce sacharidů-min.150g denně) 13 •Metody stanovení • 1.REFERENČNÍ metoda • ID-GC/MS • standardní přidání značené glukózy C14 (izotopová diluce) do analyzovaného vzorku, následné rozdělení plynovou chromatografií a stanovení glukózy hmotnostní spektrometrií • Certifikovaný referenční materiál (CRM) • (SRM 909b NIST, SRM 917 NIST) 14 1. 2.Doporučené rutinní metody (enzymové) • a) (GOD/ PAP) glukózaoxidasa/peroxidáza • •β-D-GLUKÓZA + O2 + H2O ®β-D-glukonolakton +H2O2 • GOD • • • • • • • Enzymové stanovení glukózy glukóza + O2 ¾¾® glukonolakton + H2O2 H2O2 + H2A ¾¾® 2 H2O + A Glukosaoxidáza Peroxidáza bezbarvý chromogen barevný produkt 15 Chromogen: nejčastěji 4-aminoantipyrin + subst.fenol → chinonimin (barevný) 16 • • b) (HK/ G6PD) • hexokináza /glukóza-6-fosfátdehydrogenáza • •GLUKÓZA + ATP ® glukózo-6-fosfát + ADP • HK • • • • • • • 17 • •GLUKÓZA + ATP ® glukózo-6-fosfát + ADP • HK • • •glukózo-6-fosfát + NADP+ ® glukono-6-fosfát +NADPH •G6PD • • spektrofotometricky - vzrůst absorbance NADPH při 340 nm • 18 1. • • c) (GDH) • glukózadehydrogenáza • •β-D-GLUKÓZA + NAD+ ® β-D-glukonolakton + NADH • GDH • • • spektrofotometricky -vzrůst absorbance NADH při 340nm 19 • • 3. Elektrochemické metody • Clarkova kyslíková elektroda • Biosenzory s membránou se zakotvenou GOD • Glukometry (POCT) • • xceed_big autolanceta_easy_touch_big 20 Princip: přímé elektrochemické stanovení 1.Glukóza + O2 → glukonolakton + H2O2 (glukózaoxidáza) 2.Elektrochemická redukce H2O2 na H2O 3.Vzniklý elektrický proud nebo náboj je úměrný koncentraci glukózy (amperometrické nebo coulometrické stanovení) a.jpg 21 4.Jiné možnosti stanovení (starší metody) • •Reflexní fotometrie • •chemické • - reakce glukózy s o-toluidinem v kyselém prostředí po zahřátí modrozelené zbarvení • 22 • Kontinuální monitorování koncentrace glukózy • •Transkutánní senzory •Mikrodialýza kůže •Reverzní iontoforéza • •Neinvazivní kožní a oční přístroje •Fluorescenční metody •Infračervená spektroskopie 23 • • Referenční rozmezí: • • S,P-Glukóza 3,9-5,6 mmol/l • CSF-Glukóza 2,8-3,9 mmol/l • dU-Glukóza 0 -1,7 mmol/24h • P-Glukóza (oGTT) nalačno 3,9-5,6 mmol/l • P-Glukóza (oGTT) po 2h 3,9-7,8 mmol/l • 24 •Klinické symptomy •P-Glu (náhodný odběr) ³11,1 mmol/l •P-Glu (nalačno) ³7,0 mmol/l •P-Glu (oGTT) po 2h ³11,1 mmol/l •Opakované vyšetření •Přesnost < 2,5% •Správnost (bias) < 2,0% DM - diagnóza 25 Glukózový toleranční test (oGTT) •Diagnóza diabetu • •Verifikace zvýšené hodnoty FPG • •