BC_Kalibrace_2010
Kalibrace analytických metod
Petr Breinek

‹#›
2
ØMěřící zařízení (zjednodušeně přístroje) pro měření fyzikálních veličin musí být výrobci
kalibrovaná
Objem: pipety
Teplota (+37°C ± definovaná přesnost)
Hmotnost: váhy
Čas (?), ……
Ø
ØPro účely akreditace:verifikace (ověření)    - certifikát (Český metrologický institut)
- v laboratoři

‹#›
3
Měření vlastností (především koncentrace) chemických látek a kalibrace měřících systémů v
klinických laboratořích
je obtížnější

‹#›
4
IVD MD 98/79 EC
• Týká se výrobců
• Je vyžadována návaznost  hodnot  pracovních kalibrátorů a povinnost poskytnutí dat výkonnostních
charakteristik měřících postupů, včetně postupu kalibrace
(realizace návaznosti je popsána v normách ISO 17511 a ISO 18153)

‹#›
5
Validace a verifikace
Výrobci mají povinnost provádět validaci
Laboratoř musí validované metody
IVD MD 98/79 EC   verifikovat (ověřovat )
Pokud laboratoř používá vlastní měřící metody, musí je validovat (to je poměrně velký problém)

‹#›
6
• Definice:
• Soubor úkonů, kterými se za specifických podmínek stanoví vztah mezi hodnotami veličin, které
jsou indikovány měřícím přístrojem nebo měřícím systémem nebo referenčním materiálem a
odpovídajícími hodnotami kalibrátorů
•
Kalibrace

‹#›
7
Kalibrátory
•Primární kalibrátory
•Certifikované referenční materiály (CRM)
•Sekundární kalibrátory
•Pracovní kalibrátory výrobce
•Kalibrátory dodávané výrobci
•

‹#›
8
• Ideální kalibrátor
•
•Hodnoty odvozené srovnáním s CRM (certifikovaný referenční materiál) nebo stanovenými referenčními
metodami
•Komutabilní (bez vlivu matrice)
•S udanou nejistotou hodnot

‹#›
9
Nejčastější nedostatky kalibrátorů pocházející od výrobce
•Hodnoty bez návaznosti na referenční materiál (metody)
•Návaznost není řádně provedena a dokumentována
•Rozdíly mezi šaržemi
•Různé hodnoty v závislosti na použité metodě

‹#›
10
• Zjednodušeně:
• Kalibrace určuje vztah mezi měřeným signálem (např.absorbancí) a množstvím (koncentrací)
zjišťované látky (analytu).
• Tento vztah je definován matematickým modelem (kalibrační funkcí)
•
•Zajišťuje přenos hodnot z referenčních materiálů/metod do rutinní laboratoře
• (kalibrace je nástrojem návaznosti)

‹#›
11
• Kalibrační funkce
*
* Lineární
* Nelineární
•
• Vyhodnocení:
•Manuální
•Počítačové programy

‹#›
12
•Přednost se dává lineárním funkcím (závislostem)
•
•Vypočítá se regresní analýzou
• (statistická technika porovnání metod)

‹#›
13
Kalibrace_lineárni 1bod
    Ca = Ckal . Aa/Akal  = Aa  . faktor
     e =A/c.l

‹#›
14
•
• Rovnice lineární regresní analýzy
• Y = a  + b.X
• Y…. signál (např.absorbance)
• X…. koncentrace analytu
• a…. úsek na ose y (intercept)
• b…. směrnice přímky(slope)
• (a…by měla být blízká nule)
•

‹#›
15
• Lineární regresní analýzou můžeme kontrolovat (ověřovat) linearitu kalibrace
•
• Pomáhají  i metody korelační analýzy      (= metoda, která studuje vztah mezi dvěma proměnnými
hodnotami)
•Pasing-Bablokova regrese
•Demingova regrese

‹#›
16
•Nelineární funkce
•Typická např. pro imunochemické metody
•
•Kalibrace obvykle realizována šesti kalibrátory
•Proložení kalibrační křivky
• spline
• logit-log-1, logit-log-2, logit-log-3
• kvadratický model
• kubický model

‹#›
17
ppp

‹#›
18
rrrr

‹#›
19
•Statistické (počítačové) programy
•Analyse-It®
•MedCalc ®
•CBstat®
•ADSTATLabo®
•Excel,….
•
• Používá se parametrický (Pearson) nebo neparametrický přístup (Spearman, Passing-Bablok,…)

‹#›
20
Počet a rozmístění kalibrátorů,
rozsah kalibrace
•dodržovat postup kalibrace výrobcem IVD MD 98/79 EC
•
•počet: 1, 3 (L-M-H), 6
• (při validaci 10 – 15)
•n = 1, 2, 3 (při validaci až 5)

‹#›
21
•Rozsah kalibrace
• (pracovní rozsah měření):
•
• Interval koncentrací, v němž lze dosáhnout požadované hodnoty přesnosti a pravdivosti měření
•
• Meze: dolní a horní mez stanovitelnosti
•

‹#›
22
Kontrola kalibrace a
četnost kalibrací (rekalibrace)
•Analýza kontrolních materiálů
•Dodržovat doporučení výrobců
•VKK
•Kontrolní grafy (regulační diagramy)

‹#›
23
• Rekalibrace
• - nová šarže reagencií
• - doporučené údaje výrobce
• - výsledky kontrolních vzorků mimo   povolené rozmezí, …
• - výměna některých částí měřícího zařízení (např. dávkovače,elektrody)
•