KOMPLEMENTOVÝ SYSTÉM KOMPLEMENT •komplementový systém je tvořen desítkami složek (přítomny v séru nebo vázány na povrchu buněk) • •„starobylý“ systém – primitivní vícebuněčné organismy disponují proteiny příbuznými našemu kompl.systému • •složka vrozené imunity, která může být spuštěna i humorální složkou imunitního systému KOMPLEMENT - funkce •LÝZA - buněk, bakterií, virů •OPSONIZACE - podpora a zprostředkování fagocytózy •PROPAGACE imunitní reakce – přivolání a rozpoznání dalšími složkami IS, vyvolání zánětu •IMMUNE CLEARENCE – odstraňování imunokomplexů z cirkulace Aktivace komplementu membranolytický komplex (MAC) klasická cesta (C1-INH) C1 C4 C2 lektinová cesta MBL MASP 1, 2 C4 C2 alternativní cesta C3b B D P C3 konvertáza C3 C3b C5 C5b C5b C6 C7 C8 C9 Biologické funkce aktivovaných složek komplementového systému · lýza buněk (mikroorganismů) (MAC) · opsonizace (C3b) · chemotaxe (C5a, C3a) · prozánětlivá aktivita (C3a, C5a) · přenos imunokomplexů (C3b, C4b) · regulace paměťové odpovědi (C3b, C3d) Regulace komplementové kaskády •regulace je velmi důležitá (různé mechanismy: nestabilita složek, regulační proteiny) • •regulátory komplementové kaskády • C1INH, C4bp, CR1, MCP, DAF, faktor H, faktor I, faktor P, CD59 Deficience komplementového systému •C1-C4 : častý vývoj systémových imunokoplexových chorob (SLE-like), náchylnost k pyogenním infekcím •C3-C9: zejména náchylnost k pyogenním infekcím; u deficitu C9 jsou typické opakované meningokové meningitidy •C1 INH: hereditární angioedém Hereditární angioedém •způsoben deficitem C1 INH •dominantně dědičný •dochází k nekontrolované aktivaci komplementového systému při traumatech, stomatologických výkonech, infekcích, menstruaci •vazoaktivní peptidy způsobují zvýšenou vaskulární permeabilitu se vznikem edému •klinické příznaky: nesvědivé kožní otoky, dechové obtíže, průjmy, křeče v břiše TEST CH50 •Funkční test komplementové kaskády spuštěné klasickou cestou aktivace •využívá hemolytické schopnosti komplementu •nelze jím získat odpověď o kvantitě jednotlivých složek - snížené výsledky jen při velmi nízkých hladinách účastnících se složek, nebo při špatné funkci některé ze složek • •protože jsou složky komplementu termolabilní je třeba sérum co nejdříve zamrazit • Klasická cesta aktivace komplementu Princip funkčního testu CH50 •beraní erytrocyty po inkubaci s protilátkami (amboceptorem) vytvoří komplex antigen-protilátka • •přidání vyšetřovaného séra (obsahuje komplement) • •lýza erytrocytů se projeví uvolněním hemoglobinu, který detekujeme spektrofotometricky beraní erytrocyt složky komplementu králičí protilátky (amboceptor) C1 C4bC2b C4bC2aC3b C5b MAC-lytický komplex lýza & uvolnění hemoglobinu měření absorbance centrifugace, přepipetování Schéma testu CH50 fyz.roz. fyz.roz. fyz.roz. fyz.roz. fyz.roz. 1) 2) sérum 1:40 sérum 1:60 sérum 1:40 odstranit 100ul odstranit 100ul promíchání a přenos 100ul promíchání a přenos 100ul promíchání a přenos 100ul A B C D E F G H1 1:160 1:320 1:60 1:40 1:120 1:240 1:80 sérum 1:60 H2 fyz.roz. x H O 2 100ul lýza 0% lýza 100% 3) 100ul hemol.sys. 100ul hemol.sys. 100ul hemol.sys. 100ul hemol.sys. 100ul hemol.sys. 100ul hemol.sys. 100ul hemol.sys. 100ul hemol.sys.