GLUKÓZA_2014 1 GLUKÓZA Petr Breinek 3 Koncentrace FPG je nástrojem pro: • Určení diagnózy diabetu mellitu (DM) • Vyhledávání osob se zvýšeným rizikem DM Klinický význam Glukóza FPG (plazmatická koncentrace glukózy v žilní krvi nalačno) 4 • Klinické symptomy • P-Glu (náhodný odběr) 11,1 mmol/l • P-Glu (nalačno) 7,0 mmol/l • P-Glu (oGTT) po 2h 11,1 mmol/l • Opakované vyšetření Diagnostická kritéria diabetu 5 * Při diagnostice gestačního diabetu Rozhodovací meze FPG (mmol/l) Interpretace ˂5,6 (˂5,1)* Vyloučení diabetu mellitu 5,6 až 6,9 Zvýšená FPG (IFG, prediabetes) 7,0 Diabetes mellitus 6 S,P-Glukóza 3,9-5,6 mmol/l CSF-Glukóza 2,8-3,9 mmol/l dU-Glukóza 0 -1,7 mmol/24h P-Glukóza (oGTT) nalačno 3,9-5,6 mmol/l P-Glukóza (oGTT) po 2h 3,9-7,8 mmol/l Rozhodovací meze 7 Doporučení ČSKB a ČDS 8 9 Odběr krve na stanovení glukózy • Žilní krev pro diagnostiku DM a pro případ, že jsou potřebná další laboratorní vyšetření • Kapilární krev pro kontrolu léčby, ne pro diagnostiku 10 Preanalytická fáze Doporučení ČSKB, ČDS, 2012 Stanovení v plazmě žilní krve (EDTA + NaF), event. +citrát sodný ( úbytek až 0,6 mmol/l vs 0,1 mmol/l a stabilita 24h při +25oC) do 60min oddělit plazmu od krevních elementů!!!  Plazmatická koncentrace glukózy v žilní krvi nalačno (FPG)  Zpracování do 60 min po odběru  Odběr nalačno (min. 8h lačnění) (přiměřená hydratace,v posledních 3 dnech vyloučit fyzickou aktivitu a kouření,stravování bez restrikce sacharidůmin.150g denně) 11 Mezilehlá preciznost* CV < 2,5 % Pravdivost (bias)* b < 2,0 % Celková chyba* TE < 6,9 % Metrologická návaznost na referenční metodu Požadavky na analytickou kvalitu měření Intraindividuální biologická variabilita 4,9 Preciznost odvozená z biologických variabilit 2,5 Interindividuální biologická variabilita 6,9 Pravdivost odvozená z biologických variabilit 2,2 Celková biologická variabilita 8,9 Celková chyba odvozená z biologických variabilit 6,9 www.westgard.com 12 Požadovaná preciznost je definována vztahem: CVa ≤ 0,5 . CVi (%) Požadovaná hodnota pravdivosti (bias) je definována vztahem: b ≤ 0,25 . CVb (%) 13 Referenční metoda ID-GC(LC)/MS Standardní přidání značené glukózy C14 (izotopová diluce) do analyzovaného vzorku, následné rozdělení plynovou nebo kapalinovou chromatografií a stanovení glukózy hmotnostní spektrometrií Certifikovaný referenční materiál (CRM) (SRM 909b NIST, SRM 917 NIST) Metody stanovení 14 Doporučené metody (enzymové) 1.(HK/ G6PD) Hexokináza /glukóza-6-fosfátdehydrogenáza Glukóza + ATP  glukózo-6-fosfát + ADP HK glukózo-6-fosfát + NADP+  glukono-6-fosfát +NADPH G6PD Spektrofotometricky - vzrůst absorbance NADPH při 340 nm 15 2. (GOD/ PAP) Glukózaoxidasa/peroxidáza β-D-Glukóza + O2 + H2O β-D-glukonolakton +H2O2 GOD H2O2 + H2A  2 H2O + A bezbarvý chromogen barevný produkt Chromogen: nejčastěji 4-aminoantipyrin + subst.fenol → chinonimin (barevný) 17 Elektrochemické metody • Clarkova kyslíková elektroda • Biosenzory s membránou se zakotvenou GOD • Glukometry (POCT) 18 Princip: přímé elektrochemické stanovení 1.Glukóza + O2 → glukonolakton + H2O2 (glukózaoxidáza) 2.Elektrochemická redukce H2O2 na H2O 3.Vzniklý elektrický proud nebo náboj je úměrný koncentraci glukózy (amperometrické nebo coulometrické stanovení) 19 Glukometry Jsou určeny k selfmonitoringu pacientů s DM, dále pro ambulantní měření koncentrace glukózy Použití glukometrů k dg. DM se nedoporučuje Proti referenční metodě nesmí chyba měření překročit: ± 0,83 mmol/l pro koncentrace < 5,6 mmol/l ± 15% pro koncentrace ≥ 5,6 mmol/l 20 Glykosurie, glukosurie Pro diagnostiku DM není stanovení doporučeno Má jen orientační význam Prakticky byla nahrazena selfmonitoringem glykémií Glukóza v moči 21 Používá se k potvrzení diagnózy DM v případech:  Stavy IFG (prediabetu) s hodnotami FPG 5,6 až 7,0 mmol/l  Těhotenství u skupin se zvýšeným rizikem vzniku DM  Jedinci se zvýšeným rizikem vzniku DM  V situacích s FPG < 5,6 mmol/l při podezření na poruchu tolerance glukózy z předchozích vyšetření Glukózový toleranční test (oGTT) 22 23 Zátěž 75g glukózy Stanovuje koncentrace glukózy: Před zátěží 1 h po zátěži* 2 h po zátěži * těhotné ženy Provedení