• • Miniaturizace laboratorních metod Biosenzor •Analytické zařízení obsahující citlivý prvek biologického původu, který je buď součástí nebo v těsném kontaktu s fyzikálně-chemickým převodníkem • •Poskytuje průběžný elektronický signál přímo úměrný koncentraci jedné nebo několika chemických látek ve vzorku • •Biosenzory •Specifický druh chemického senzoru - z biologického indikačního prvku a chemického převaděče •Biologickým prvkem je nejčastěji specifický enzym - enzymové elektrochemické biosenzory •Enzym katalyzuje specifickou enzymovou reakci se specifickým substrátem •Výsledkem reakce je měřená tvorba produktu, nebo rozklad substrátu •Biosenzory pro glukosu, laktát, kreatinin a močovinu •Součást glukosových analyzátorů, ABR analyzátorů, ale také velkých automatických biochemických analyzátorů (Beckman) – rychlé stanovení - asi 1 min. • Glukosové analyzátory •Stanovení kapilární glukosy •H2O2 2 H+ + O2 + 2e- • • • •Je měřená časová změna proudu, která je úměrná koncentraci glukózy ve vzorku. •SensoStar G, firma DiaSys • •Enzymatickoamperometrický princip •Enzymový amperometrický biosenzor (imobilizována glukosoxidasa) na stanovení glukózy využívá k měření vznikající peroxid vodíku: • •glukózooxidáza • Glukóza + O2 -----------à kys. glukonová + H2O2 •Vznikající peroxid je oxidován na platinové elektrodě při konstantním potenciálu •podle rovnice: •BIOSEN S-line Lab, EKF-diagnostic, dodává Medesa •Automatický analyzátor pro stanovení glukózy nebo laktátu ze séra, krve a plasmy. •Využívá elektrochemický princip měření kombinovaný s čipovou technologií Enzymy imobilizované na čipu zajišťují oxidaci glukózy a laktátu ve vzorku za tvorby peroxidu vodíku,ten je redukován na měřících elektrodách. •Změna protékajícího proudu úměrná koncentraci •Rozsah měření 0,5 –50 mmol/l (glukóza), 0,5 – 40 mmol/l (laktát) •Objem vzorku : 20µl , ředí se • 1 ml systémového roztoku • • S-line Lab Mikročip = integrovaný obvod •Moderní elektronická součástka •Spojení (integraci) mnoha jednoduchých elektrických součástek, které společně tvoří elektrický obvod vykonávající nějakou složitější funkci Mikročip (microchip) •Mikročip • využívaný při analýze či detekci nazývaný anglicky většinou • microarray • • př. DNA microarray DNA microarrays (čipy) •Využívají se pro detekci mutací a polymorfismů, sekvenční analýzy • •Princip techniky: •Hybridizační reakce mezi vzorkem DNA a sekvenčně specifickýni sondami navázanými na povrchu čipu • •Na čipu imobilizováno až několik stovek tisíců sond specifických vůči různým úsekům DNA • •Možnost analyzovat široké spektrum mutací v genech způsobujících dědičná onemocnění najednou • DNA čipy - materiály •Možnost snadné imobilizace DNA sond • •Sklo se speciálně upraveným povrchem • •Sondy přeneseny a natištěny na povrch čipu (přístrojem spotter) •DNA microarrays (čipy) Multiplexové metody (multianalýza) Princip xMAP technologie ( microarraye partical) •100 druhů mikrokuliček (magnetické) rozlišených kombinací dvou fluorescenčních barev •Na každém druhu je navázána molekula vázající specificky jeden analyt •Na kuličku se naváže analyt a druhá protilátka •Kuličky protékají přístrojem •Vyhodnocení na principu flow cytometrie •Měří se fluorescence vzniklá po excitaci dvěma lasery – jeden určuje barvu – druh analytu (kvalita) • druhý - množství analytu (kvantita) •Přístroj Luminex 100 IS • Luminex 100 (100 IS), Luminex Corp. LMNX-100IS_web_lg_image • Princip flow cytometrie – průchod kuliček • Nebo možnost simultanního měření až 100 analytů • Měření v jamce mikrotitrační destičky nebo po přepipetování ve • zkumavce (panely – př. cytokiny) • Potřeba velmi malého objemu • Cenově výhodné • Možnost měřit imunochemické metody, nukleové kyseliny, enzymy • Nevýhodou dlouhá inkubace a nutnost práce ve větších sériích • evidence Biočipová array technologie • • Přístroj Evidence, Randox • Imunoanalýza založena na simultánní multianalýze • Na biočipu celé panely příbuzných testů • Princip ELISA