Nátěr krve na skle Bourková L., OKH FN Brno Zhotovení nátěru krve •řídí se hodnotou hematokritu •potřeby: podložní sklíčko, roztírací sklíško –sklíčka musí být čistá (z důvodu falešné kontaminace cizími buněčnými elementy, bakteriemi atd.) •roztírací sklíčko položit před kapku krve na podložním skle pod úhlem cca 30 - 40° (nikdy ne do kapky krve); po doteku krve a roztíracího skla se krev rozlije podél hrany skla; po té rychle krev rozetřít po podložním skle •sílu nátěru zvažovat – čím větší úhel, tím silnější nátěr •nátěr musí být: rovnoměrný, přiměřeně tenký, dlouhé okraje musí být rovné, na konci přechází „do ztracena“ (alespoň 1 – 2 cm) Dif-1_nátěr Dif-2_nátěr Dif-3_nátěr Dif-4_nátěr •Provedení nátěru Barvení •Důležité: správné provedení, zaschnutí, fixování, barvení nátěrů •Zamezení vlhkosti v roztocích a na nátěru (již 1% příměs vody v metanolu může znemožnit správnou interpretaci vyšetření, zvláště morfologie erytrocytů) •Nejběžnější metoda barvení: May-Grűnwald / Giemsa-Romanowski „MGG“(Pappenheimova metoda) - nejpoužívanější metoda, ve všech směrech zcela uspokojující •Další metody např.: Wrightova (jednoduchá), Leishmanova (rychlá, orientační) •Správný immerzní olej •kontroly nabarvených nátěrů Barvení - MGG •Základní složky barvení: –fixace: metanol + barviva –barvení: metanol +glycerin + fosfátové pufry + barviva •pH 6,8 – 7,0 •Kationtové (zásadité) barvy, jako je např. azur B, se váží na aniontovou složku a dávají modrošedá zbarvení nukleových kyselin (DNA nebo RNA), nukleoproteinů, granulí bazofilů a slabě barví granula neutrofilů. •Aniontové (kyselé) barvy, jako je např. eosin Y, se váží na kationtovou složku proteinů a dávají oranžovočervená zbarvení hemoglobinu a eozinofilním granulím •Celkové barvení se skládá z řady různých kombinací těchto barev, které nakonec dávají výsledný vzhled nabarveného nátěru. • •Poznámka: preparáty lze také připravovat na nátěrových a barvících automatech. Hodnocení •komplexně celý nátěr (WBC, RBC, PLT) •v rovnoměrně rozetřeném místě •zvětšení 1000x, 200x (100x) •zbarvení nátěru •zbarvení buněk •hodnotit buňku v kontextu s celým nátěrem •hodnotit periferní nátěr v souvislosti s přístrojovým KO a přístrojovým hlášením •minimální běžný počet hodnocených buněk: –periferní krev: 100 leukocytů –kostní dřeň: 250 jaderných elementů •vydávané výsledky pro nátěr periferní krve i KD: [%] Hodnocení nátěru •☻ •☻ • Místa pro hodnocení nátěrů •špatné místo na skle !!! •správné místo na skle ☺ A00807NA9B_021 A00807NA9B_001 •☺ •X •X •X Výsledek obrázku pro smajlíky Leukocyty •Velikost buněk: malé, střední, velké •Charakteristika jádra: jaderné stíny, holá jádra, poměr jádra k cytoplazmě, jaderný chromatin, jadérka (přítomnost, nepřítomnost, počet, velikost), členitost a tvar jádra (variantní lymfocyty, reaktivní lymfocyty), velikost jádra (tyče, metamyelocyty), hypo-,hyper segmentace NE •Charakteristika cytoplazmy: granulace, bez granulace, specifická, nespecifická, toxická granulace, barevný odstín cytoplazmy (zralost buňky, reaktivní lymfocyty), vakuolizace, barevné inkluze, Auerovy tyče, okraje cytoplazmy (členité, hladké, vlasaté) Velké granulované lymfocyty – LGL (large granular lymphocytes) Poznámka •Granulocytární elementy (segmentované leukocyty): •primární granulace (nespecifická): - od promyelocytu až po segment •azurofilní •sekundární granulace (specifická): - od myelocytu až po segment •neutrofily •eozinofily •bazofily Erytrocyty •Velikost (MCV, RDW, distribuční křivka) •Barevné odchylky (MCH, MCHC) •Tvarové odchylky •Buněčné inkluze •Shluky •Rozložení •Jaderné elementy (NRBC) Trombocyty •Velikost (MPV, PDW, distribuční křivka) •Granulace •Shluky (satelitóza) •Fragmenty (RBC, WBC) •MGK, holá jádra MGK •Kontrola mikroskopicky při početních a morfologických anomáliích •Odběr do hořčíku (citrátu) •Imunologické vyšetření PLT s CD61