Biochemické vyšetření mozkomíšního moku MUDr. Zdeňka Čermáková OKB FN Brno Základní vyšetření ¡Počet elementů a erytrocytů –kvantitativní cytologie ¡Kvalitativní cytologie- trvalý cytologický preparát ¡Celková bílkovina ¡Glukóza ¡Laktát Celková bílkovina ¡Fyziologická hodnota 0,15 - 0,40 g/l (stoupá s věkem) lalbumin, prealbumin, transferin,imunoglobuliny lhaptoglobin, C-reaktivní protein, C3 a C4 složky komplementu, antitrombin III, α1-antitrypsin lorosomukoid. ¡ ¡Zvýš. CB lzáněty (porucha hematoencephal. bariéry) lporucha cirkulace likvoru lintratekální syntéza Ig ¡ Stanovení-fotometrie reakce s benzethoniumchloridem ¡ Glukóza ¡Základní energetický zdroj nervové tkáně ¡Hladina závisí na glykémii ( 60% sérové hladiny) ¡Snížení: lbakteriální meningitida lnádory lkrvácení ¡Metoda stanovení-fotometrie hexokinázová reakce Laktát ¡Fyziologická hodnota 1,2-2,1 mmol/l ¡Nezávisí na plazmatické koncentraci, prakticky neprochází přes hematoencephalickou bariéru ¡ ¡Zvýšení: lZáněty – rozlišení virové a bakteriální meningitidy (produkován hlavně bakteriemi při anaerobní glykolýze) lPoruchy zásobení mozku kyslíkem – ischemie, krvácení lZvýšení intenzity metabolismu – nádory Albumin ¡Tvorba v játrech ¡Albumin v likvoru pouze z obvodové krve ¡ ¡Referenční hodnoty: CSF-Albumin: 120–300 mg/l ¡ ¡Albuminový kvocient – Qalb = alb.CSF/ alb.S (je závislý na věku): ldo 15 let: ≤ 5×10−3 ldo 40 let: ≤ 6,5×10−3 ldo 60 let: ≤ 8×10−3 ¡ ¡Albuminový kvocient se využívá k matematickému vyjádření funkce hematolikvorové bariéry: ¡k hodnocení míry postižení hematolikvorové bariéry; ¡pro výpočet intratékální syntézy imunoglobulinů. ¡ ¡Metoda stanovení-imunoturbidimetrie,imunonefelometrie ¡ Porucha hematolikvorové bariéry ¡Mírně porušená 7.3-10x 10-3 ¡ Roztroušená skleróza, chronické neuroinfekce, serózní meningitidy,nezánětlivé polyneuropatie ¡ ¡Střední porucha 10-20x 10-3 ¡ Serózní meningitidy,CMP,diabetická neuropatie ¡ ¡Těžká porucha nad 20 x 10-3 ¡ Meningitida bakteriální,herpetická, tuberkulózní,karcinomatóza,polyradikuloneritida-Guillaina-Barrého ¡I při velmi vysokých hodnotách Qalb. je zachována určitá funkčnost bariéry Imunoglobuliny ¡Zdroj – sérum ¡Lokální syntéza(intratékální) l lCSF-IgG: 12,0–40,0 mg/l lCSF-IgM: 0,2–1,2 mg/l lCSF-IgA: 0,2–2,1 mg/l ¡ ¡ Intratékální syntéza ¡ perivaskulární infiltráty lymfocytů B, které lokálně proliferují dozrávají v plazmocyty a produkují protilátky ¡ ¡Princip měření – imunochemicky, turbidimetrie, nefelometrie ¡ ¡ ¡ Humorální imunitní reakce v CNS ¡Koncentrace albuminu v moku pozitivně koreluje s koncentrací IgG ¡IgG index ¡ ¡1. Kvantitativní-výpočet dle Reibera ¡ ¡2. Kvalitativní-izoelektrická fokuzace – průkaz oligoklonálních proužků IgG_{index} = \frac{Q_{IgG}}{Q_{alb}} IgG _{index} = \frac{IgG_{CSF}/IgG_{s\acute{e}rum}}{Alb_{CSF}/Alb_{s\acute{e}rum}} Výpočet dle Reibera Reiberův_diagram.png (780×720) •Oblast 1 – normální nález; •Oblast 2 – izolovanou poruchu hematolikvorové bariéry bez lokální syntézy Ig •Oblast 3 – poruchu hematolikvorové bariéry společně s intratékální syntézou I •Oblast 4 – izolovaná intratékální syntéza Ig bez poruchy hematolikvorové bariéry; •Oblast 5 – oblast analytických chyb. • Interpretace patologických nálezů s ohledem na funkci hematolikvorové bariéry a intratékální syntézu: ¡Porucha funkce HLB bez intratékální syntézy:polyradikuloneuritida Guillain-Barré, akutní stadium purulentní meningitidy, tumory CNS ¡ ¡Porucha funkce HLB s intratékální syntézou:purulentní meningitidy, TBC meningitidy a mozkový absces, neurolues a herpetická encefalitida,neuroborrelióza ¡ ¡Intratékální syntéza se zachováním funkce HLB:roztroušená skleróza, HIV a některé další virové encefalitidy. ¡ Výpočet dle Reibera ¡ ¡Q Lim(IgG) = 0,93 x √QAlb2 + (6x10-6) – 1,7 x 10-3 ¡ ¡QLim(IgM) = 0,67 x √QAlb2 + (120x10-6) – 7,1 x 10-3 ¡ ¡ ¡ IgGLOC = (QIgG –QlimIgG) x IgGs (mg x 1-1) ¡ ¡ IgGITH = (1-QlimIgG/QIgG) x 100% ¡ Kvalitativní-izoelektrická fokuzace – průkaz oligoklonálních proužků ¡Elektroforéza v gradientu pH – rozdělení podle izoelektrického bodu jednotlivých bílkovin ¡ ¡Současně se analyzuje i sérum ¡ ¡Významný je nález, kdy nacházíme proužky v likvoru, které nejsou v séru – znamená intratekální syntézu Ig ¡ ¡ MRZ reakce ¡specifická reakce MRZ (morbilli, rubeola a varicella zoster) ¡Jako reakce MRZ se označuje intratékální syntéza specifických protilátek třídy IgG proti neurotropním virům spalniček, zarděnek a planých neštovic. ¡ ¡Přítomnost reakce MZR je vysvětlována moderní teorií imunitní sítě, ve které každá imunologická reakce indukovaná konkrétním antigenem postihuje celou imunitní síť.Kromě specifických protilátek proti vyvolávajícímu agens je zvýšena produkce mnoha dalších protilátek a autoprotilátek Perspektivy vývoje vyšetření likvoru ¡Diagnostika degenerativních onemocnění a prionových infekcí. Dg. Creutzfeldtovy-Jakobovy choroby svědčí zvýšená koncentrace 14-3-3 proteinu v likvoru ¡Likvorová diagnostika Alzheimerovy choroby se opírá o stanovení β-amyloidu,τ-proteinu a fosfo- τ-proteinu. Protein β-amyloid je součástí amyloidových plak, které se akumulují v mozku. Protein τ se vyskytuje v cytoskeletu CNS. U Alzheimerovy choroby se nachází snížené hodnoty β-amyloidu a zvýšené hodnoty τ-proteinu.Dále se hodnotí jejich vzájemný poměr, index τ/ β-amyloid, který bývá zvýšený. ¡ ¡Strukturální protein S-100 patří do rodiny proteinů vážících vápník. Zvýšená hodnota S100 může svědčit pro poruchu hematolikvorové bariéry a často je známkou neuronového postižení. ¡β2 mikroglobulin patří k proteinům, které jsou přítomny ve všech tělních tekutinách.Vzestup jeho koncentrace v likvoru nacházíme u stavů obecně spojených s aktivací a zmnožením lymfocytárních a makrofagických elementů. Spektrofotometrie likvoru ØProvádí se při podezření na intermeningeální krvácení. ØJe přínosné v časných stadiích, kdy ještě nejsou změny v cytologickém obrazu. Ø ØSpektrofotometrie je 10x citlivější než lidské oko, pozitivní nález můžeme získat i u napohled bezbarvého likvoru. Ø ØProvádí se registrací absorbance v oblasti viditelného světla (380-700 nm), detekuje se přítomnost oxyhemoglobinu a bilirubinu. Ø Spektrofotometrie likvoru Ø Spektrofotometrie_oxy_a_bili Průkaz likvorey ØLikvorea – závažný stav s komunikací likvorových cest Detekce likvoru je možná stanovením parametru specifického pro likvor. Ø ØStanovení beta trace proteinu – enzym, který je syntetizován v buňkách chorioideálního plexu. V likvoru se nachází v koncentracích 20-30x vyšších než v séru. ØDalším parametrem je β2 transferin. Ze sérového transferinu se v likvorových prostorách odštěpí zbytky kyseliny sialové (mozkovou neuraminidázou), vzniká asialotransferin, který lze detekovat pomocí elektroforézy s imunofixací v β2 zóně. Ø Stanovení beta 2 transferinu Ø Obrázek1 Obrázek2