Etanol Miroslava Beňovská Etanol nEtanol je obsažen v alkoholických nápojích: whisky, slivovice apod. obsahují 30 – 60 %, vína 6 – 12 % a pivo 2 – 5 % etanolu n nV klinické praxi se vyskytují: nProjevy chronického zneužívání (alkoholické léčebny, psychiatrie) nAkutní otravy způsobené záměrným nebo i náhodným požitím velkého množství etanolu, často v kombinaci s požitím různých léků a drog nKlinická oddělení potřebují rychle npotvrdit či vyloučit otravu alkoholem nzvolit odpovídající terapii n nK tomu nejčastěji slouží enzymatické stanovení etanolu Etanol nPo požití se etanol rychle vstřebává již v žaludku ( rychleji na lačno) nRychle proniká prakticky všemi membránami včetně placenty n nPoměrně rychle se v organismu metabolizuje: n nejdříve působením alkohol - dehydrogenázy vznikne acetaldehyd n Etanol + NAD+ <----à Acetaldehyd + NADH + H+ n Acetaldehyd se působením aldehyd-dehydrogenázy mění na acetyl-CoA n Acetaldehyd + NAD+ <----à Acetyl-CoA + NADH + H+ n n Konečným produktem metabolizace je kyselina octová (respektive CO2 a voda) nRychlost eliminace etanolu z organismu je u konkrétního jedince prakticky konstantní ( u mužů asi 100 mg etanolu na kg tělesné hmotnosti za hodinu, u žen jen asi 85 mg/kg/hod ) nMetabolizace bývá ukončena během 6 – 8 hodin nAsi 5 % požitého etanolu se vylučuje z organismu v nezmetabolizované formě močí, potem apod. Etanol nKlinické údaje: nEtanol se vstřebává v gastrointestinálním traktu a dostává se do krve n0,6-0,8 ‰(g/l ) - počínající opilost n1-2 ‰ opilost nPřes 2 ‰ těžkou intoxikaci nSmrtelná dávka je 6-8 g/kg tělesné hmotnosti ( tedy u dospělého asi 300-500 g etanolu) nPři chronickém používání vznikají nemoci jaterní, poškození ledvin a nemoci nervové nEtanol zvyšuje citlivost organismu na otravy některými látkami (tetrachlormetan, anilin, olovo, rtuť); interakce s řadou léků Etanol nKlinické údaje: n nKoncentrační časový profil v krvi, dechu i slinách je prakticky stejný nPomocným kriteriem při stanovení etanolu je srovnání naměřené osmolality séra a vypočtené osmolality (2x Na + glukoza + urea) - Osmolární gap 23 mmol/kg odpovídá cca 1 ‰ etanolu n nReferenční rozmezí: 0 mmol/l , 0 g/kg neboli promile (o/oo) n nPoznámka: Přepočet výsledku - mmol/l / 22,32 = o/oo n n Etanol nOdběr materiálu: nOdběr pro stanovení etanolu - do běžných odběrových zkumavek (sérum, plasma) nNabrat plnou zkumavku nZabránit použití desinfekčních prostředků obsahujících alkohol nVzorky ihned po odběru dobře uzavřít (pokud se stanovení neprovádí bezprostředně, uchovávat při 2 – 8 °C) n Stanovení etanolu v krvi, séru a plasmě: nEnzymaticky: nEnzymatický test prováděný na automatických analyzátorech je založen na oxidaci alkoholu s NAD+ na acetaldehyd za katalýzy alkoholdehydrogenasy ( ADH). n ADH n C2H5OH + NAD+ <---à CH3CHO+ NADH + H+ n nVznikající NADH je přímo úměrný obsahu alkoholu ve vzorku a fotometricky se stanovuje při 340 nm n nMetoda je specifická pro etanol i v přítomnosti acetaldehydu, acetonu, butanolu, etylenglykolu, izopropanolu, metanolu a propanolu v koncentracích do 20 g/l n nStanovení není určeno pro soudně lékařské a forenzní účely n Stanovení etanolu v krvi, séru a plasmě: nHeadspace plynová chromatografie nKrev je zahřívána ve speciální uzavřené lahvičce n nZahřátím se etanol uvolní z krve do vzduchového prostoru v lahvičce ( headspace ) n nUrčitá část z tohoto prostoru je automaticky injektována do plynového chromatografu n nPřed analýzou jsou vzorky krve nebo séra naředěny roztokem chloridu sodného s obsahem n-propanolu jako vnitřního standardu. Chlorid sodný zvyšuje tlak par etanolu a eliminuje rozdíly v matrici n nPlynová chromatografie je jediná metoda použitelná pro forenzní (soudní) účely sejmout0001 Stanovení etanolu nDechová zkouška– screeningový test nČasté použití vzhledem k nebezpečnosti a protizákonnosti či limitaci požití alkoholu při řízení motorových vozidel a v zaměstnání n nPrincip: n IČ absorpční spektroskopie ( nejčastěji) n Fotometrie - etanol se při oxidačně – redukční reakci n s bichromanem v prostředí kyseliny n sírové oxiduje na kyselinu octovou n Elektrochemická oxidace n nMezi alkoholem v krvi a v dechu je ustavena rovnováha přibližně 2100:1 (krev : dech) Stanovení etanolu nVe slinách nSnadný a neinvazivní sběr nSliny absorbovány do vatového tamponu, ten vložen do testovací kartridže nReakce založena na reakci s ADH s vizuální end point detekcí (2 min inkubace) nKoncentrace odpovídá sérovým hodnotám n nV moči nKoncentrace alkoholu je přibližně 1,3x vyšší než v krvi - může být variabilní, omezený význam stanovení nPři stanovení etanolu v moči vadí obsah cukrů v moči, který může způsobit pozitivní interferenci v důsledku metabolizace cukrů na etanol