Stanovení kinetiky
vylučování inulinu
ledvinami
Cíl: Demonstrovat princip stanovení
GFR jako clearance látky vylučované jen
glomerulární filtrací
 Model
 Renální insuficience způsobená sníženým
počtem funkčních glomerulů. Vyřazení jedné
ledviny z funkce podvazem arteria renalis
sinistra.
 Přínos experimentu:
 Praktické měření ledvinné clearance. Sledování
vlivu úbytku funkčních glomerulů na clearance
inulinu. Praktické vyhodnocení naměřených
dat.
Provedení
 uspání laboratorního zvířete
 střední laparotomie, podvlečení ligatury
pod a. renalis sinistra (event. zaškrcení
této tepny)
 chirurgické zpřístupnění v. jugularis a
aplikace inulinu (15mg/1,5ml fyz.
roztoku)
 v intervalech 5, 10, 15, 20, 30 min)
otevřeme hrudník a punkcí srdce
odebereme nejméně 1,5ml srážlivé krve
 analýza vzorků , spektrofotometrické
stanovení
 výpočet koncentrací inulinu + zhodnocení
Ledvinná clearance látky x
 Objem plazmy úplně očištěný za
jednotku času od látky x.
 Rozměr: objem/čas
GFR
 Velikost GFR je dána:
 Filtračním tlakem (poměr rozdílu tlak
ve vas afferens a efferens a v BV)
 Permeabilitou glomerulární membrány
 Velikostí filtrační plochy
Stanovení GFR
 Endogenní látky s konstantní
koncentrací v plazmě.
 Plazmatická koncentrace
 Clearance
 Exogenně podané látky, jejich
koncentrace v plazmě postupně
během vyšetření klesá.
 Clearance
Odhad GFR na základě
plazmatické koncentrace látek
 Závislost mezi plazmatickou
koncentrací a GFR je hyperbolická
 „Okrajové“ části křivky jsou málo
informativní
 Lépe použít vyšetření clearance,
které je přesnější a má větší
vypovídací hodnotu
Odvození vzorce pro
výpočet GFR
 GF x P +- T = U x V
 Chceme-li vypočítat GFR musí
být T=0. Potom platí:
 GF x P = U x V
 GF = U x V/P
Inulin
 Chceme-li vypočítat GFR, musíme zvolit
látku, která:
 se bez omezení filtruje v glomerulech
 nepodléhá přitom tubulární sekreci ani
resorpci
 Látka která splňuje výše uvedené, je
INULIN
 tvořen fruktozovými jednotkami
 všechno profiltrované množství se vyloučí v
definitivní moči
Nevýhody inulinové clearance
 Nutné zajistit stabilní c inulinu
dlouhodobou infúzí
 Nepříznivý vliv reziduálního objemu
moči v močovém měchýři
 Složitější je i stanovení koncentrace
inulinu
Vztah mezi sérovou
koncentrací kreatininu a GFR
Vztah kreatininovou clearance
a GFR
Kreatinin
 vzniká ve svalech neenzymovou dehydratací
kreatinu
 při průchodu ledvinou je z 90% filtrován, z 10%
secernován do moči tubuly
 koncentrace kreatininu v séru je přímo úměrná
svalové hmotě organizmu ( a tedy nepřímo
závislá na věku a pohlaví)
 intraindividuální kolísání nepřesahuje 10-15%,
hladiny se zvyšují až při omezení GFR pod 50%
 ↑ hladiny - po fyzické námaze, při příjmu
exogenního kreatininu (maso, masné výrobky)
Hodnocení Ckr
 Ohled na správné a přesné stanovení S –
kreatininu (Jaffého reakce - Jaffé pozit.
chromogeny - i glu, aceton)
 podíl kreatininu vylučovaného tubuly (zvyšuje se
při poklesu počtu fungujících nefronů - tzn. čím
menší GFR, tím méně přesné stanovení pomocí
Ckr)
 problém s kvantitativním sběrem moči (
nedostatečná spolupráce - děti, staří nemocní..)
 velikost tělesného povrchu (korekce na stand.
1.73m2- nemusí odstranit diskrepanci
25-letý atlet x 60-letý obézní muž
Výpočet clearance
VUPc xxx

x
x
x
P
VU
c


• Aby se vyloučil vliv nestejné velikosti těla,
hmotnosti a konstituce, přepočítává se tato
hodnota na ideální povrch těla, tj 1.73 m2
• Clearance jednorázová vs. frakcionovaná
Nejčastější chyby při stanovení
clearance kreatininu
 Neúplný sběr moči
 Nepromíchaná moč
 Nesprávný výpočet povrchu těla u
obézních osob a pacientů s velkou
retencí tekutin
 Pacient sbírá moč kratší období
Stanovení GFR
 clearance látky, která se jen filtruje a není
v tubulech resobrována nebo naopak
secernována
 inulin (analog : polyfruktosan S -Inutest)
 99mTc-DTPA (diethylentriaminopentaoctová
kyselina)
 131I-Iothalamát
 kreatinin (též tubulární sekrece - 10%)
 pro muže 20-80 let (u žen x 0.85)
 
kr
kr
P
hmotnostvek
C



49
140
Cystatin C
 protein z cystatinové superrodiny
(120 AK)
 vylučován většinou buněk jako
inhibitor cysteinových proteáz
 filtrován do primární moči a poté
resorbován proximálním tubulem,
kde je degradován.
 z koncentrace v séru je přímo
odhadována GFR
Měření glomerulární filtrace
bez nutnosti sběru moči
 i.v. aplikace látky vylučované jen glomerul.
filtrací a měření plazmatické koncentrace v
odpovídajících časových intervalech
 koncentrace v plazmě klesají podle
exponenciální závislosti
 naneseme-li hodnoty na semilogaritmický
papír, dostaneme přímku, ze které můžeme
odečíst hodnotu tzv. biologického poločasu
(t1/2)
 t1/2 udává, za jakou dobu klesne koncentrace v
plazmě na polovinu výchozí hodnoty (P0)
Inulinová clearance
 klasické vyšetření na podkladě plazmatické
clearance (není-li možný přesný sběr moči)
 hodnota, kterou lze vyšetřit pouze na podkladě
kinetiky sledované látky v extracelulární
tekutině
 jestliže je látka z organizmu vylučována pouze
glomerulání filtrací, pak rychlost poklesu jejích
plazmatických koncentrací (po předchozí i.v.
aplikaci) je určována touto renální funkcí
Hodnotu GFR vypočteme
 D množství aplikované látky (g)
 P0 zjišťujeme jako extrapolovanou
hodnotu koncentrace v čase, kdy látka
byla injikována
 t1/2 vypočteme
2/10
2ln
tP
D
GFR



Lambertův-Beerův zákon
 A= cdε
 ε - molární absorpční (extinkční)
koeficient
 d - délka dráhy paprsku (délka kyvety)
 c - molární koncentrace