Adobe Systems 1 Vybraná laboratorní vyšetření významná pro zubního lékaře KZL VI. 9. Adobe Systems Krevní obraz a základní biochemické vyšetření, vyšetření hemostázy ̶Praktický zubní lékař doporučuje indikaci u podezření na některá celková onemocnění nebo před některými výkony popř. využívá výsledků získaných od PL nebo specialisty. Hodnoty se mohou od sebe lišit nevýznamně lišit podle laboratoří, je vhodné, jsou – li referenční hodnoty uvedeny u výsledků. 2 Adobe Systems Sedimentace erytrocytů ̶Sedimentace erytrocytů je běžné laboratorní vyšetření, které udává rychlost klesání erytrocytů ve vzorku nesrážlivé krve. Podle průkopníků tohoto testu se vyšetření rovněž označuje jako Fahræus Westergren (FW). 3 Adobe Systems Sedimentace erytrocytů Erytrocyty mají tendenci vytvářet válcovité shluky (tzv. penízkovatění erytrocytů), které sedimentují rychleji než samostatné erytrocyty. Tvorbu shluků podporují některé bílkoviny, hlavně fibrinogen a gama-globuliny. Díky tomu se sedimentace krve zrychluje zejména při zánětech, infekčních chorobách, těhotenství apod. 4 Adobe Systems Sedimentace erytrocytů ̶Hodnota sedimentace krve u zdravých jedinců se pohybuje v tomto rozmezí: ̶♂ 2–5 mm/hod ̶♀ 3–8 mm/hod 5 Adobe Systems Sedimentace erytrocytů ̶Vzhledem k tomu, že se sedimentace erytrocytů urychluje s věkem, byla stanovena následující rovnice zohledňující věk vyšetřované osoby: •♂ sedimentace erytrocytů (mm/hod) ≤ věk / 2, •♀ sedimentace erytrocytů (mm/hod) ≤ (věk + 10) / 2. ̶Příčinou rychlejší sedimentace erytrocytů u žen je menší počet červených krvinek a zvýšená koncentrace fibrinogenu. ̶ 6 Adobe Systems C-reaktivní protein ̶C-reaktivní protein (CRP) patří mezi reaktanty akutní fáze s rychlou odpovědí. Je produkován játry, jeho plazmatická koncentrace se zvyšuje již 6 hodin po vypuknutí zánětlivého procesu nebo jiném náhlém poškození tkání, maxima dosahuje za 24 - 48 hodin. Koncentrace vzrůstá až 1000 krát proti fyziologické hodnotě, je dominujícím proteinem akutní fáze. ̶Stanovení CRP v plazmě se používá k prokázání přítomnosti zánětlivého procesu, k diagnostice a monitorování infekčního onemocnění, na pomoc při léčbě revmatických onemocnění a při diferenciální diagnostice gastrointestinálních symptomů. ̶ 7 Adobe Systems C-reaktivní protein ̶10 - 50 mg/l indikuje mírný zánět - lokální bakteriální infekce (např. zánět močového měchýře, zánět průdušek, absces), poškození operací nebo úrazem, infarkt myokardu, hluboká žilní trombóza, klidové stádium revmatického onemocnění, malignity, většina virových infekcí ̶do 100 mg/l indikuje těžší onemocnění a vyšší stupeň zánětu, vyžadující nějaký zákrok ̶ nad 100 mg/l znamená těžký průběh onemocnění a obvykle indikuje přítomnost bakteriální infekce ̶Prognostická hodnota ̶Přetrvávající zvýšení hladiny CRP v plazmě indikuje neustávající zánět a obvykle znamená neúspěšnou terapii a špatnou prognózu (např. u maligních onemocnění, infekce a infarktu myokardu). ̶ ̶ ̶ ̶ 8 Adobe Systems C- reaktivní protein •hodnota CRP do 5 mg/l je považována za normální stav. •hodnota CRP 6-30mg/l znamená virové onemocnění a doporučuje se test za 1-2 dny opakovat. •hodnota CRP nad 30mg/l již značí velmi pravděpodobně bakteriální infekci. •hodnoty okolo 300 mg/l a více znamenají již velmi závažný bakteriální zánět v těle. ̶ 9 Adobe Systems Definujte zápatí – název prezentace nebo pracoviště 10 Obsah obrázku stůl Popis byl vytvořen automaticky Obsah obrázku stůl Popis byl vytvořen automaticky Zdroj: Bartáková V, Houba R, ZemenJ Rukověť zubního lékaře Ošetřování pacientů s komplikujícím zdravotním stavem ČSK 2005 Adobe Systems 11 Obsah obrázku stůl Popis byl vytvořen automaticky Obsah obrázku stůl Popis byl vytvořen automaticky Zdroj dtto Adobe Systems 12 Obsah obrázku stůl Popis byl vytvořen automaticky Obsah obrázku stůl Popis byl vytvořen automaticky Zdroj: Bartáková V, Houba R, ZemenJ Rukověť zubního lékaře Ošetřování pacientů s komplikujícím zdravotním stavem ČSK 2005 [USEMAP] Adobe Systems Výtěry a stěry Výtěr z dutiny ústní (před výtěrem si nemocný nesmí minimálně 30 min čistit zuby, jíst, pít a kouřit) Stěr se provádí sterilní štětičkou ve sterilním obalu, do kterého se štětička po odběru vrací a odesílá do laboratoře. Nejčastěji se stěry zasílají k mikrobiologickému a cytologickému vyšetření. ̶ ̶Nejčastěji stěr na přítomnost kvasinkové infekce ̶Správné transportní médium 13 [USEMAP] Adobe Systems Testy pro stanovení rizika rozvoje zubního kazu a onemocnění parodontu ̶ 14 [USEMAP] Adobe Systems Testy pro stanovení orálních mikrobů ̶Determinace vybraných mikroorganizmů osidlujících dutinu ústní je založena na několika základních principech, a to na kultivaci bakterií na selektivních médiích, na imunochromatografické detekci antigenu nebo na PCR. 15 [USEMAP] Adobe Systems Stanovení kariogenních mikrobů ̶Test založený na kultivaci mikrobů (CRT® bacteria Refill 6 - Ivoclar Vivadent) – 2 dny. S. mutans a Lactobacillus sp. ̶Imunochromatografický test (Saliva-Check Mutans -GC Europe), v S. mutans – 15 min ̶ 16 [USEMAP] slina2 slina1 slina3 slina5 slina6 Mikrobiologie sliny – CRT a pufrovací kapacity sliny lroubalikova@gmail.com 17 [USEMAP] Adobe Systems Stanovení parodontálních bakterií a vícero kariogenních mikrobů ̶PCR test (Protean, GenTrend - ČR, aj.) ̶Vysoká variabilita genomů ̶Správný způsob odběru Sterilni papírové čepy, sterilní nádobky. Z jednoho odběru lze stanovit i genetickou dispozici parodontitidy. Výsledky určují i vhodnou atb terpii. 18 [USEMAP] Adobe Systems 19 [USEMAP] Adobe Systems PCR - kariogenní mikroby ̶S- mutans a s. sobrinus ̶VariOr caries Stěr u dospělého a dítěte (do 7 let) U těhotných žen Ráno před čištěním zubů odběr spec. tyčinkami. 20 [USEMAP] Adobe Systems Vyšetření sliny ̶Slina: kvantitativní vyšetření Škachovou zkouškou (klidová a stimulovaná slina) Škachův test měří produkci slin za 15 minut, nejprve bez stimulace, poté pacient žvýká 15 minut parafínovou žvýkačku a opět se měří objem vyprodukovaných slin. Hodnotí se součet. Normální hodnota je 8 – 10 ml – 45 ml / 30 min. ̶Kvalitativní vyšetření: pH sliny, pufrovací kapacita sliny, rychlost toku, viskozitu a konzistenci nestimulovaných slin, pH pacientovy klidové i stimulované sliny a její množství. Např. Saliva-Check Buffer, GC Europe 21 [USEMAP] Test pufrovací kapacity sliny - příklad zelená= 4 body zelená/modrá= 3 body modrá = 2 body Modrá /červená= 1 point červená = 0 bodů Test pufrovací kapacity (kvalita sliny) Dohromady bodů Pufrovací schopnost 0-5 nízká 6-9 střední 10-12 Normální/ vysoká 22 [USEMAP] Stimulated Saliva: chewing a piece of wax will stimulate the salivary flow. After 30 sec, the patient expectorate into the cup, and continue for 5 min. Step 4 : quantity of stimulated saliva Can be measured by checking the mL markings on the side of the cup Saliva essentially comes from parotid glands, result of stimuli (eg: mastication, taste). Saliva flow is use to eliminate acid coming from food, plaque, and internal sources. Step 5: Buffering capacity of stimulated saliva (quality) Place test strip on absorbent tissue, use a pipette to draw saliva from cup and dispense it onto the test pad. Turn it 90° to remove the excess Results available after 5 min. Buffer capacity is used to neutralise acid attacks. It is mainly due to bicarbonates, which concentrations is up to 60 times higher in stimulated saliva. Adobe Systems Protokol vyšetření sliny –příklad setu k vyšetření 23 [USEMAP] Adobe Systems 24 Detekce kariogenicity plaku – motivační význam ̶ pack_124 IMG_1193 IMG_1203 5 minut Odečtení podle barevné stupnice Motivace pacienta [USEMAP] Adobe Systems cariogram.jpg Kariogram ̶ ̶ ̶Grafické znázornění rizika nových kazů pomocí PC programu ̶ ̶Po vložení dat do programu- program vyjádří „míru rizika vzniku kazu“(v %)- ZELENÝ DIAGRAM (čím větší výseč, tím je snížena míra kazivosti) ̶TMAVĚ MODROU výsečí jsou vyjádřeny dietní zvyklosti ̶ČERVENÁ znázorňuje riziko bakterií ̶ŽLUTÁ ukazuje další okolní vlivy ̶SVĚTLE MODRÁ naznačuje podezřelé faktory ̶ 25 [USEMAP] Adobe Systems Kariogram cariogram.18912554_std.png 26 [USEMAP] Adobe Systems Kariogram - zadávané faktory ̶Výskyt kazů- KPE- zaznamenáváme nynější kazy, výplně, chybějící zuby, nové aktivní léze mohou znamenat vysoké riziko, i když počet stávajícíh výplní je nízké ̶Onemocnění- medikace, onemocnění, která mohou ovlivnit tvorbu kazu( diabetes,…) ̶Výživová anamnéza- zjišťujeme kariogenitu potravin, příjem skrytého a přímého cukru, zaznamenáváme výslednou hodnotu z LB testu- vysoká hodnota LB- více než 500 000LB v 1 ml sliny- vysoké riziko kazu, častý příjem cukru ̶Častost příjmu potravy – 24 hod / 3 dny sledování- počet a častost jídel/den, výživový protokol ̶Množství plaku- plak index PI, QHI ̶Streptococcus mutans – zadáváme hodnotu testu- počet SM v 1 ml sliny- test Dentocult ̶Fluoridace- užívání F prostředků, častost ̶Slinná sekrece- test stimulované sliny ml/min ̶Pufrovací kapacita sliny – Dentobuff test ̶ ̶ ̶ 27 [USEMAP] Adobe Systems Komerční testy pro stanovení vrozené náchylnosti k onemocněním dutiny ústní ̶Dědičný předpoklad k parodontitidě - na základě analýzy genových polymorfismů. ̶Čep ze sulku nebo stěr z bukální sliznice. 28 [USEMAP] Adobe Systems Polymerázová řetězová reakce PCR Polymerázová řetězová reakce (PCR, z anglického Polymerase Chain Reaction) je metoda rychlého zmnožení (amplifikace) vybraného úseku DNA. Množený (amplifikovaný) úsek DNA je ohraničen tzv. primery (oligonukleotidy), což jsou fragmenty DNA o 20 – 25 nukleotidech, které si díky své komplementaritě přisedají právě ke koncům vybraného úseku. Od přisedlých primerů probíhá syntéza DNA. Samotnou syntézu provádí termostabilní DNA polymeráza, ̶Při PCR je využíváno podobného principu, na jakém dochází k syntéze DNA během replikace DNA v buňce: ̶• DNA polymeráza přisedá k jednořetězcovému (templátovému) úseku DNA. ̶• Podle templátového úseku DNA polymeráza syntetizuje druhý, komplementární řetězec. 29 [USEMAP] Adobe Systems pcr Denaturace – dvouřetězcová (dvouvláknová) molekula - dochází k rozrušení vodíkových můstků v dvouřetězcové molekule DNA a k rozvolnění této dvoušroubovice. Vznikají tak dvě jednořetězcové (jednovláknové) molekuly DNA, na které mohou v dalším kroku nasednout primery. Nasednutí primerů místa DNA. Na dvouvláknové úseky DNA/primer se váže DNA polymeráza. Syntéza DNA - přirůstá vlákno DNA komplementární k původní molekule DNA. Tyto kroky se cyklicky opakují. Pro dostatečnou amplifikaci původní molekuly DNA obvykle postačuje 30 cyklů. Pro dané reakce je třeba určitých teplot. 30 [USEMAP] Adobe Systems 31 PCR schema [USEMAP] Adobe Systems Další postup po amplifikaci ̶Kontrola reakce na elektroforéze (ELFO), případně purifikace reakčního produktu a sekvenování ̶ ̶Sekvenování DNA je souhrnný termín pro biochemické metody, jimiž se zjišťuje pořadí nukleotidů v DNA. 32 [USEMAP] Adobe Systems Význam PCR PCR slouží k namnožení materiálu pro další biotechnologické metody, jako je: sekvenování DNA, analýza genů, DNA fingerprinting, diagnostika infekčních nemocí, zjišťování genetických nemocí, identifikace osob. ̶ Definujte zápatí – název prezentace nebo pracoviště 33 [USEMAP] Adobe Systems Definujte zápatí – název prezentace nebo pracoviště 34 Děkuji za pozornost! [USEMAP]