Mikroskopy •Světelný •Konfokální •Fluorescenční •Elektronový Světelný mikroskop •Historie •1590-1610 - Vyrobeny první přístroje, které lze považovat za použitelný mikroskop (Hans a Zaccharis Janssenové z Middleburgu v Hollandsku). •Přelom 17. a 18. století - Antoni van Leeuwehoek brousil čočky vynikající kvality. Vyrobil asi 505 mikroskopů, které zvětšovaly až 270x. •1847 – Zahájení výroby mikroskopů firmou Carl Zeiss v Jeně. •1911 – Fluorescenční mikroskop s UV excitací (C. Reichert). •1968 – Rastrovací tandemový konfokální mikroskop (TSCM). •1978 – Laserový konfokální rastrovací mikroskop. •1931 – elektronový mikroskop (1931 TEM, 1942 SEM) Stavba světelného mikroskopu •mechanická část (podstavec, stojan a stolek s křížovým posunem) •osvětlovací části (zdroj světla, kondenzor, clona) •optické části (objektivy a okuláry) • Princip čočky •Průchod paprsků čočkou •Zobrazení předmětu čočkou http://web2.mendelu.cz/af_211_multitext/obecna_botanika/obrazky/ZM/lupa.jpg http://web2.mendelu.cz/af_211_multitext/obecna_botanika/obrazky/ZM/lupa.jpg • http://www.fotoroman.cz/glossary2/glossary_images/ohnisko1.gif https://www.google.cz/search?q=paprsky+%C4%8Do%C4%8Dkou&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0CAcQ_AUoAWoV ChMIjoez1d-HyAIVwdYUCh2BEwsz&biw=1338&bih=608#imgrc=AwM0B4fksHMBkM%3A Vznik obrazu v mikroskopu http://www.enclabmed.cz/encyklopedie/C/JVAUT_soubory/image004.jpg https://www.google.cz/search?q=mikroskop+obraz&tbm=isch&tbo=u&source=univ&sa=X&ved=0CBwQsARqFQoTCM- 6oO3eh8gCFQTWFAodRvEFTQ&biw=1338&bih=608#imgrc=X9F7dRYz1DPnpM%3A •Zákon lomu •Zákon odrazu •Optická hustota prostředí – INDEX LOMU •Vzduch N = 1 •Voda N = 1,33 •Cedrový olej (imerzní) N = 1,51 •Sklo N = 1,52 •Kanadský balsám N = 1,52 Objektivy •ACHROMÁTY – korekce některých chromatických vad •PLANACHROMÁTY – úplná korekce chromatických vad • •Suché, ponorné – vodní a imersní •Vlastnosti objektivů: • •Ohnisková vzdálenost 1.Větší než 20 mm – slabé objektivy 2.6 – 15 mm – střední objektivy 3.Méně než 5 mm – silné objektivy • •Pracovní vzdálenost •Čím silnější objektiv tím menší pracovní vzdálenost • •Světelnost objektivu •= schopnost zachytit co nejvíce světelných paprsků přicházejících z předmětů do objektivu •- o tom také rozhoduje lomivost prostředí, kterým musí paprsky projít než se dostanou do objektivu Rozlišovací schopnost mikroskopu = vzdálenost dvou bodů, které mikroskop zobrazí jako dva body ukazuje ji numerická apertura (NA) vliv na ní má přidání imerzního oleje vliv NA kondenzoru objektiv •Nejkvalitnější u imerzních objektivů (1,3 – 1,4) •Čím větší číslo – tím kvalitnější objektiv Zvětšení mikroskopu • •Je násobkem zvětšení objektivu a okuláru • •vzdálenost dvou rozlišitelných bodů srovnatelná s rozlišovací schopností oka – nemá cenu zvětšovat (prázdné zvětšení) – neuvidíme. Fluorescenční mikroskop (UV světlo – vlnová délka 136 – 380 nm) •Luminiscence •Fluorescence •Záření excitační •Záření emisní •Fluorochrom • •Zdroj světla: Rtuťová výbojka • • • • •Transmisní fluorescenční mikroskop •Epifluorescenční mikroskop • Konfokální mikroskop •Když objekt silný, neprůhledný •Zdroj světla – laser – zaměřeno do jednoho bodu objektu •Světlo emisní – emitované z tohoto bodu snímáno detektorem •Signály z detektoru – PC, program vyhodnotí – sestaví celkový obraz • • Elektronová mikroskopie •Rastrovací elektronový mikroskop Výrobce v ČR: firma TESCAN http://www.tescan.com/cz TESCAN http://www.tescan.com/cz/produkty/vega-sem/vega3-sb –Rozlišovací schopnost elektronového mikroskopu – –- úměrná délce použitého záření – –Elektrony – kratší vlnová délka (než fotony) vyšší rozlišovací schopnost elektr. mikroskopu vyšší efektivní zvětšení (až 1 000 000x) –Zdroj záření – elektronové dělo –Zobrazovací systém – elektromagnetická čočka – –Typy elektronových mikroskopů –TEM – transmisní elektronový mikroskop –SEM – rastrovací elektronový mikroskop – – Typy elektronového mikroskopu •TEM •zobrazení vnitřní struktury vzorku •(prošlé elektrony) • •Ernts Ruska 1931 (1986 Nobelova cena) • •elektrony procházejí skrz vzorek • •vysoké urychlovací napětí •tenké vzorky •vyšší dosažené rozlišení než SEM • • •SEM •zobrazení povrchu vzorku •(sekundární/odražené elektrony) • •V. K. Zworykin 1942 • • •Svazek elektr. se pohybuje po vzorku • •nízké urchlovací napětí •jednoduchá příprava vzorku •snadná interpretace obrazu STEM – skenovací elektronový mikroskop – SEM a TEM dohromady C:\Users\Brabcova\Documents\vyuka\vyuka\nizsi r\PR F\rozsivky TEM\MK37.BMP C:\Users\Brabcova\Documents\vyuka\vyuka\nizsi r\PR F\rozsivky TEM\MK56.BMP C:\Users\Brabcova\Documents\vyuka\vyuka\nizsi r\PR F\rozsivky TEM\MK47.BMP Schránky rozsivek v SEM, foto. M. Kozáková Cholera bacteria http://en.wikipedia.org/wiki/File:Cholera_bacteria_SEM.jpg http://aldousfirm.com/sem-expert-formula-the-search-engine-marketing-key/ Nákup mikroskopů (ZŠ, SŠ) mikroskopy: školní Arsenal: http://www.mikroskopy-mikroskop.cz/ LABO PROFI 3012iX-T (64. tis Kč) Olympus: http://www.mikroskopy-mikroskop.cz/ CX 31 (42 tis. Kč, bez okuláru 100x) SZ51 STEREO-MICROSCOPE (53 tis. Kč) Čištění mikroskopu Čištění mikroskopu: ETHER : ALKOHOL 8 : 2 ETHER: diethylether: lab. potřeby ALKOHOL: použít čistý líh 96% - lab. potřeby nebo lékárna – líh na pupík – je cca 60% ) Mikroskopovací pomůcky Měření objektů v mikroskopu Měřící okulár Měřící sklíčko (nebo síťové sklíčko) – vkládá se do okuláru Dodávají výrobci mikroskopů Srovnávací sklíčko = podložní sklo s nakalibrovanou stupnicí, 1 dílek = 0,01mm = 10µm slouží k nakalibrování měřícího sklíčka Počítací komůrky Cyrus, Bürkrova komůrka Slouží k počítání buněk (krevní buňky, bakterie, fytoplankton) Boxy na trvalé preparáty fy Merci, Brno: http://www.merci.cz/kategorie/laboratorni-pomucky-z-plastu/plast-pro-zdravotnictvi/zasobniky-na-pod lozni-skla/