RNA interference = RNA interferencia (RNAi) Princíp: biologický proces, v ktorom molekula ssRNA o veľkosti 20-25 nukleotidov sa zúčastňuje pri post - transkripcných génových reguláciách a v procese formovania štruktúry chromatínovej História: 1990 - skupina Richarda Jorgensena experiment za účelom zvýraznenia purpurovej farby petúnie - po vnesení extra kópií zodpovedného génu pozorovali opačný jav, ktorý nevedeli vysvetliť 1998 - Andrew Z. Fire a Craig C. Mello dsRNA injektovaná do Caenorhabditis elegans spôsobovala „umlčanie" súhlasných génov 1999 - Benitecs Graham ukázala všeobecnosť javu RNAi a vytvorila DNA konstrukty, ktoré spúšťajú proces RNAi v ľudských a živočíšnych bunkách 2006 - Andrew Z. Fire a Craig C. Mello získali Nobelovu cenu objavenie,že dsRNA vyvoláva supresiu génovej aktivity, spôsobom homologickej závislosti v procese RNA interferencie Mechanizmus procesu RNAi RISC \ Activation by ATP rn7G -AAAAAAAA Target m RNA substrata RNA interference in mammalian systems ■ i bantounas and others 549 21-base target site Targel m RNA sequence b' . . . ACAPJ^UUCAAAGUC3ü^üGCUAGÖACCyuVCrCUAinjUUCAIXi. . - 3' I Double nucleotide overhung Sense strand (21 bases) ^* 3' 5' 0-P-GUGCGÜUGOJAGUACCÄACTT-0H I 1 I I I I I I I I I I I I I I I I I HO-TTGACGCAACGAUCAUGGUÜG-PO ■v AntiSense strand (21 bas«) DoubledT overhang Essential 5* phosphate group i complementary to the beginning of the target sequence In mRWA) miRNA precursor icer double-stranded RNA miRNA function siRNA function 3-HC* IIIHIIUIIIIľ iP-5 'mGpppG- lit II target cleavage TTTTTn^5' AAA .A. perfect pairing AAA.An incomplete pairing translational repression Hairpin loop sense Antisense .ŕ-^ "V Flori 5'LTR GFP cassette 3'LTR amp K pur Puc ori SS2 I GaNTOihaS and others ■ RNA mterfaran» in mammalian systems (A) Snat Antíwnsr 3TTTf umul (B) (Worm ^liaů UCarBI snaiKi Urrr '■""I" J ' I TlllIlT J m*it i— i Grafická predstava Adenovirus carrying shRNA vector Encapsulated & modified si KÍN A Mooted ion <^£) Hydrodynamic tail vein J? ^ 0 < ^J síRNA complexcd with RISC ^vy* ¥/ Plasmid vector carrying sliR ľ^M^ Degraded mRNAs Biologické procesy ovplyvňované ssRNA