Datum:


Téma:                    Sterilní výsev a nakličování semen

Materiál:

semena různých linií tabáku Nicotiana tabacum L. SR1, Nicotiana tabacum cv. Xantha, len setý Linum
usitatissimum L., nažky mrkve seté Caucus carota L. ssp. sativus (Hoffm.) Arcang cv. Karotela, cv.
Nanteská, apod.


Pomůcky:

Postup práce:

Desinfekce semen

1.    Uzavření semen do skleněné epruvety nebo gázového váčku (podle velikosti semen)

2.    Desinfekce v 50% etanolu a 3% peroxidu vodíku                     1 minuta

3.    Oplach sterilní destilovanou vodou (SDV)

4.    Desinfekce ve 20% roztoku SAVO v SDV (v/v)                      20 minut

5.    3x po dobu 3 - 5 minut oplach SDV, poslední vodu slít a nechat uzavřeno v boxu

6.    Botnání 24 hodin

7.    Opakovaná desinfekce ve 20% roztoku SAVO v SDV (v/v)    20 minut

8.    3x po dobu 3 - 5 minut oplach SDV

9.    Desinfikovaná semena přeneseme v laminárním boxu do sterilní Petriho misky s filtračním
papírem.

Sterilní výsev

10. Provedeme sterilně výsev semen do Petriho misek na povrch agarem ztuženého média (MS médium, 2%
sacharosa, 0,65% agar). Víko misky zajistíme proti otevření proužkem fólie.

11. Označíme kultury popisem (datum, materiál), poznamenáme si počet semen vysetých na misku.

12. Nakličování provádíme ve tmě v termostatu, při teplotě 25°C nebo na světle ve fytotronu.


Hodnocení:

První kontrola kultur by měla probíhat již po několika dnech, zpravidla již 3. den             od
počátku experimentu je patrná přítomnost nežádoucích infekcí.

V následujících týdnech vyhodnotíme % klíčivosti osiva, kontrolujeme čistotu kultur a sledujeme
vývoj klíčních rostlin a případné projevy sensitivity na selekčnímu médiu. Podle dalších pokynů
pracujeme s klíčními rostlinkami v dalších úlohách.