Hierarchická struktura vývoje tkáníHierarchická struktura vývoje tkání
 kokožžnníí epitelepitel
 ststřřevnevníí epitelepitel
 krvetvornkrvetvornéé systsystéémymy
 zzáároderodeččnnéé populacepopulace
KMENOVÉ PLEOPOTENTNÍ BUŇKY?KMENOVÉ PLEOPOTENTNÍ BUŇKY? (v kostní dřeni(v kostní dřeni –– potenciál vytvářet různépotenciál vytvářet různé
buněčné typy)buněčné typy)
KMENOVKMENOVÉÉ MULTIPOTENTNMULTIPOTENTNÍÍ BUBUŇŇKYKY (schopn(schopnéé sebeobnovysebeobnovy, z, záásoba ve tksoba ve tkáánníích)ch)
PROGENITOROVPROGENITOROVÉÉ BUBUŇŇKYKY (transit(transit--amplifyingamplifying,v,vííce diferencovance diferencovanéé,, ččáástesteččnněě
schopnschopnéé dděělenleníí))
ZRALZRALÉÉ TERMINTERMINÁÁLNLNĚĚ DIFERENCOVANDIFERENCOVANÉÉ BUBUŇŇKYKY (ned(neděěllííccíí se klidovse klidovéé bubuňňky,ky,
vv GG00 ffáázi, umzi, umíírajrajíí apoptapoptóózouzou))
Je nutnJe nutnéé, aby byla dodr, aby byla dodržžovováána pna přříísnsnáá rovnovrovnovááha poha poččtu a typtu a typůů bunbuněěk vk v jednotlivýchjednotlivých
kompartmentechkompartmentech..
RovnovRovnovááha mezi proliferacha mezi proliferacíí, diferenciac, diferenciacíí aa apoptapoptóózouzou (mezibun(mezibuněčěčnnéé interakce,interakce,
stimulastimulaččnníí a inhibia inhibiččnníí signsignáály, diferencialy, diferenciaččnníí faktory,faktory, viabilitnviabilitníí faktory atd.)faktory atd.)
OBNOVNÉ BUNĚČNÉ POPULACEOBNOVNÉ BUNĚČNÉ POPULACE
Linie kmenových buněk v dospělé tkáni a normální obnova tkáníLinie kmenových buněk v dospělé tkáni a normální obnova tkání
Definice kmenové buňky
SYMETRICKÉ A ASYMETRICKÉ DĚLENÍSYMETRICKÉ A ASYMETRICKÉ DĚLENÍ
Předpokládaná diferenciační dráha kmenové buňky kostní dřeněPředpokládaná diferenciační dráha kmenové buňky kostní dřeně
Multi/pluripotentní nejprimitivnější hematopoetická buňka je klidová kmenová buňka
reagující na stres. Z ní vzniká většina proliferujících buněk v kostní dřeni (progenitory)
ZraléZralé difdif. buňky. buňky –– erytrocyty (erytrocyty (rbcrbc)) –– bez jádra,bez jádra, polymorfonukleárnípolymorfonukleární b.b. –– inaktivované jádroinaktivované jádro
Figure 12.1 The Biology of Cancer (© Garland Science 2007)
Figure 12.4 The Biology of Cancer (© Garland Science 2007)
Normální a narušená kontrola produkce z kmenové buňky
Figure 12.5a The Biology of Cancer (© Garland Science 2007)
Změny v počtu buněk je třeba interpretovat jako změnyZměny v počtu buněk je třeba interpretovat jako změny
buněčné kinetikybuněčné kinetiky ––sledování změn v čase.sledování změn v čase.
Tvorba terminálně diferencovaných buněk z časných buněčnýchTvorba terminálně diferencovaných buněk z časných buněčných prekurzorůprekurzorů –– 44--88
dnů (3dnů (3--6 mitotických dělení)6 mitotických dělení)
Setrvání v periferní krviSetrvání v periferní krvi –– 10 h (neutrofilní leukocyty), 10 dnů (trombocyty), více10 h (neutrofilní leukocyty), 10 dnů (trombocyty), více
než 100 dnů (erytrocyty).než 100 dnů (erytrocyty).
Schopnost produkce kmenových buněkSchopnost produkce kmenových buněk –– každý den vzniká asi 3x 10každý den vzniká asi 3x 101111 funkčníchfunkčních
buněkbuněk –– může se zvýšit až 10x.může se zvýšit až 10x.
AnemieAnemie -- snížená produkce erytrocytůsnížená produkce erytrocytů
PolycytemiePolycytemie –– zvýšená produkce erytrocytůzvýšená produkce erytrocytů
Kvantitativní poruchy se mohou týkat různých úrovní diferenciaceKvantitativní poruchy se mohou týkat různých úrovní diferenciace erytrocytůerytrocytů
Trombocytopenie aTrombocytopenie a trombocytemietrombocytemie –– poruchy produkce trombocytů jsou následkemporuchy produkce trombocytů jsou následkem
poruchy tvorby nebo ploidie megakaryocytůporuchy tvorby nebo ploidie megakaryocytů
NeutropenieNeutropenie –– poruchyporuchy granulocytárníhogranulocytárního systému. Perifernísystému. Periferní neutropenieneutropenie mohou býtmohou být
způsobeny zrychleným odbouráváním buněk, poruchou v jejich produzpůsobeny zrychleným odbouráváním buněk, poruchou v jejich produkci nebokci nebo
změnou jejich distribuce.změnou jejich distribuce.
Neutrofilní leukocytózyNeutrofilní leukocytózy –– podmíněny nadprodukcí nebo přesunem mezipodmíněny nadprodukcí nebo přesunem mezi
kompartmentykompartmenty (CML(CML –– příkladpříklad klonálněklonálně podmíněné leukocytózy).podmíněné leukocytózy).
Lymfopenie a lymfocytózyLymfopenie a lymfocytózy ––poruchy lymfocytů (CLL).poruchy lymfocytů (CLL).
PancytopeniePancytopenie –– kvantitativní porucha několika bun. systémůkvantitativní porucha několika bun. systémů
Aplastická anemieAplastická anemie –– sníženísnížení hemopoetickýchhemopoetických buněk v kostní dřenibuněk v kostní dřeni
VytvořeníVytvoření kultivačních systémů pro klonální vývojkultivačních systémů pro klonální vývoj hemopoetickýchhemopoetických buněkbuněk
umožnilo odhalitumožnilo odhalit proteiny, které regulují buněčnouproteiny, které regulují buněčnou viabilituviabilitu, růst a diferenciaci, růst a diferenciaci
různýchrůzných hemopoetickýchhemopoetických líniílínií a také odhalovat molekulární základy normálního aa také odhalovat molekulární základy normálního a
abnormálního vývoje krvetvorných tkání.abnormálního vývoje krvetvorných tkání.
Tyto regulátory zahrnujíTyto regulátory zahrnují cytokinycytokiny zvanézvané faktory stimulující růst kolonií (CSF)faktory stimulující růst kolonií (CSF) aa
interleukinyinterleukiny. Různé. Různé cytokinycytokiny indukujíindukují viabilituviabilitu, množení a diferenciaci a, množení a diferenciaci a
hemopoézahemopoéza je kontrolovánaje kontrolována sítí interakcísítí interakcí cytokinůcytokinů..
TatoTato multigenovámultigenová síť zahrnujesíť zahrnuje pozitivní regulátorypozitivní regulátory jako jsou CSF a ILjako jsou CSF a IL aa
negativní regulátorynegativní regulátory jako TGF beta a TNFjako TGF beta a TNF--alfa.alfa.
SíťSíť cytokinůcytokinů, která vznikla během evoluce umožňuje značnou flexibilitu, která vznikla během evoluce umožňuje značnou flexibilitu
závisející na tom, která část sítě je aktivována a na okamžitémzávisející na tom, která část sítě je aktivována a na okamžitém zesílení odpovědizesílení odpovědi
na příslušný stimul.na příslušný stimul.
CSF a IL indukují buněčnouCSF a IL indukují buněčnou viabilituviabilitu inhibicí programované buněčné smrtiinhibicí programované buněčné smrti --
apoptózyapoptózy.. Ta je též regulovánaTa je též regulována geny jako p53, cgeny jako p53, c--mycmyc aa bclbcl--22 aa supresesuprese nebonebo
indukce tohoto programu může vyústit v podporu neboindukce tohoto programu může vyústit v podporu nebo supresisupresi nádoru.nádoru.
CytokinyCytokiny, které regulují normální, které regulují normální hemopoézuhemopoézu mohou kontrolovat abnormální růstmohou kontrolovat abnormální růst
jistých typů leukemických buněk a potlačovat malignitu indukcí djistých typů leukemických buněk a potlačovat malignitu indukcí diferenciace.iferenciace.
Genetické abnormality, z nichž vzniká malignita jsou tak obcházeGenetické abnormality, z nichž vzniká malignita jsou tak obcházeny a jejichny a jejich
účinek anulován indukcí diferenciace aúčinek anulován indukcí diferenciace a apoptózyapoptózy..
HemopoetickéHemopoetické cytokinycytokiny objevenéobjevené in vitroin vitro jsou aktivníjsou aktivní inin vivovivo a jsou klinickya jsou klinicky
využíványvyužívány..
nekontrolovaná klonální proliferace a expanzenekontrolovaná klonální proliferace a expanze hemopoetickýchhemopoetických buněk, které ztratilybuněk, které ztratily
schopnost normálně diferencovat do zralých krevních buněkschopnost normálně diferencovat do zralých krevních buněk..
Mechanismy iniciace a progrese leukémií souvisejí se změnami v nMechanismy iniciace a progrese leukémií souvisejí se změnami v normálnímormálním
homeostatickém mechanismu, který reguluje produkci krevních buněhomeostatickém mechanismu, který reguluje produkci krevních buněk.k.
Vzniká naVzniká na různých úrovních vývojerůzných úrovních vývoje hemopoetickýchhemopoetických buněkbuněk..
Základní typy:Základní typy: lymfoidní a myeloidnílymfoidní a myeloidní, mnohdy těžko definovatelné, mnohdy těžko definovatelné
PreleukemickéPreleukemické stavystavy
vyjadřují jen část plnéhovyjadřují jen část plného leukleuk. fenotypu" buď. fenotypu" buď expanzi růstuexpanzi růstu ((myeloproliferačnímyeloproliferační
syndromy) nebosyndromy) nebo diferenciační blokdiferenciační blok ((myelodysplasiemyelodysplasie).).
►► MYELOPROLIFERAČNÍ SYNDROMMYELOPROLIFERAČNÍ SYNDROM -- expanze růstuexpanze růstu
Chronické leukemie (CLL, CML)Chronické leukemie (CLL, CML)
►► MYELODYSPLASIEMYELODYSPLASIE -- porucha diferenciaceporucha diferenciace
MyelodysplastickýMyelodysplastický syndromsyndrom
malé počty cirkulujících zralých buněk,malé počty cirkulujících zralých buněk, asynchronieasynchronie zrání jádra a cytoplasmy.zrání jádra a cytoplasmy.
ChromosomálníChromosomální abnormality: delece dlouhých ramen 5 a 7 chromosomuabnormality: delece dlouhých ramen 5 a 7 chromosomu
Progrese do
►► AKUTNÍ LEUKEMIEAKUTNÍ LEUKEMIE -- porucha proliferace i diferenciaceporucha proliferace i diferenciace
cirkulující nediferencované lymfoidní (ALL) nebo myeloidnícirkulující nediferencované lymfoidní (ALL) nebo myeloidní blastovéblastové buňky (AML)buňky (AML)
LEUKEMIE A LYMFOMYLEUKEMIE A LYMFOMY
Heterogenní onemocněníHeterogenní onemocnění s odlišnými epidemiologickými, histologickými,s odlišnými epidemiologickými, histologickými,
cytologickými, imunologickými a genetickými charakteristikami.cytologickými, imunologickými a genetickými charakteristikami.
Liší se projevy, stupněm malignity a odpovědí na léčbu.Liší se projevy, stupněm malignity a odpovědí na léčbu.
Vyskytují v dětském i dospělém věkuVyskytují v dětském i dospělém věku
Je nutná klasifikaceJe nutná klasifikace –– různé systémy, důležité pro prognózu a léčburůzné systémy, důležité pro prognózu a léčbu
Nejdůležitější vyšetření, tzv.Nejdůležitější vyšetření, tzv. imunofenotypizaceimunofenotypizace
ImunofenotypImunofenotyp je soubor povrchových znakůje soubor povrchových znaků –– CD antigenů charakteristickýCD antigenů charakteristický
pro určitý typ buněk periferní krve a kostní dřeně.pro určitý typ buněk periferní krve a kostní dřeně.
StanoveníStanovení imunohistochemickéimunohistochemické aa imunocytochemickéimunocytochemické –– řezy tkání, nátěryřezy tkání, nátěry ––
antigeny se znázorňují protilátkou vizualizovanou zpravidla enzyantigeny se znázorňují protilátkou vizualizovanou zpravidla enzymatickoumatickou
reakcí. Umožňuje současné stanovení morfologie buněk a vyšetřeníreakcí. Umožňuje současné stanovení morfologie buněk a vyšetření tkánítkání
ImunofluorescenceImunofluorescence -- v buněčných suspenzíchv buněčných suspenzích –– krev, kostní dřeň, výpotky,krev, kostní dřeň, výpotky,
mozkomíšní mok, suspenze ze solidních tkání.mozkomíšní mok, suspenze ze solidních tkání.
Umožňuje detekovat zkoumané antigeny pomocí specifických fluoresUmožňuje detekovat zkoumané antigeny pomocí specifických fluorescenčněcenčně
značených protilátek (značených protilátek (fluorochromyfluorochromy,, imunofluerescenceimunofluerescence, přímé nebo nepřímé, přímé nebo nepřímé
značení). Rychlá metoda, široké spektrum protilátek.značení). Rychlá metoda, široké spektrum protilátek.
Tzv.Tzv. kokteilykokteily protilátekprotilátek –– jednímjedním fluorochromemfluorochromem značeno více protilátek,značeno více protilátek,
Kombinace více protilátek proti různýmKombinace více protilátek proti různým epitopůmepitopům jednoho antigenujednoho antigenu
StanoveníStanovení -- fluorescenční mikroskopie a průtokováfluorescenční mikroskopie a průtoková cytometriecytometrie
P. Klener:
Klinická onkologie
HighHigh performance,performance, highhigh speed cellspeed cell sortersorter
FACSDiVaFACSDiVa ((VantageVantage))
FlowFlow sortingsorting instrumentinstrument
forfor thethe researchresearch laboratorylaboratory
FACSCaliburFACSCalibur
TheThe FACSCaliburFACSCalibur isis thethe firstfirst a 4a 4--colourcolour,, dualdual laser,laser,
benchtopbenchtop systemsystem capablecapable ofof bothboth cellcell analysisanalysis
andand sortingsorting fullyfully integratedintegrated multiparametermultiparameter systemsystem,,
widewide rangerange ofof researchresearch andand clinicalclinical applicationsapplications
ItIt hashas combinedcombined benchtopbenchtop
easyeasy--ofof--useuse
withwith thethe flexibilityflexibility andand performanceperformance
ofof highhigh--endend flowflow cytometerscytometers
BuildingBuilding onon thethe easyeasy--ofof--use standard set byuse standard set by thethe
FACSCaliburFACSCalibur,, thethe BD LSRBD LSR offersoffers
software instrumentsoftware instrument ControlControl,,
pushpush buttonbutton fluidsfluids,,
andand finefine--adjustadjust
samplesample flowflow--raterate controlcontrol3
BectonBecton DickinsonDickinson Instruments (BD)Instruments (BD) –– sincesince 1974 BD has1974 BD has beenbeen thethe leadingleading providerprovider
--recentrecent modelsmodels ofof innovativeinnovative technology intechnology in flowflow cytometrycytometry
BD LSRBD LSR -- thethe firstfirst 66--ColorColor BenchtopBenchtop
ResearchResearch FlowFlow CytometerCytometer
FACSCaliburFACSCalibur
5
BASICSBASICS ofof FLOW CYTOMETRYFLOW CYTOMETRY
RepresentRepresent::
ELECTRONICSELECTRONICS
OPTICSOPTICS
FLUIDSFLUIDS
Flow Cell
Injector
Tip
FluorescenceFluorescence
signalssignals
Focused laserFocused laser
beambeam
Sheath
fluid
Purdue University Cytometry Laboratories
7
Flow Cell - Mechanism
Injector
Tip
FluorescenceFluorescence
signalssignals
FocusedFocused laserlaser
beambeam
Sheath
fluid
Purdue University Cytometry Laboratories
FlowFlow ChamberChamber
Cells in single file
flow through
anan illuminatedilluminated volumevolume
where they scatter light
and emit fluorescence
convertedconverted
toto digitaldigital valuesvalues
as it pass through a small
50-300 micrometers orrifice
In most
instruments
this ((laminarlaminar flowflow))
is accomplished
by injecting
sample
into a sheathsheath fluidfluid
thatthat areare storedstored
on aon a computercomputer
areare collectedcollected,, filteredfiltered
1
2
The speed of flowing cells
Optimum for immunophenotyping: 1000 cells/s
Optimum for DNA analysis: 200-300 cells/s
8
…need to have cells in suspension !!!
CELL
INTERACTION OF LIGHT WITH THE CELLINTERACTION OF LIGHT WITH THE CELL
Fluorescence is emitted, and light scattered, in all directions.
THE AMOUNT OF LIGHT SCATTEREDTHE AMOUNT OF LIGHT SCATTERED
AT LARGE ANGLESAT LARGE ANGLES (15 - 150°)
INCREASES WITH CELLS’
INTERNAL GRANULARITY
AND SURFACE ROUGHNESS
IS GENERALLY PROPORTIONAL
TO THE AMOUNT(S) OF INTRINSIC AND/OR
EXTRINSIC FLUORESCENT MATERIAL(S) IN
OR ON A CELL
EXTINCTION, I. E.,EXTINCTION, I. E., THE LIGHT LOSS
FROM THE INCIDENT BEAMINCIDENT BEAM,
REPRESENTS THE SUM
OF LIGHT ABSORBED AND LIGH
SCATTERED
BY THE CELL
THE AMOUNT OF LIGHTTHE AMOUNT OF LIGHT
SCATTEREDSCATTERED AT SMALL ANGLESAT SMALL ANGLES
(0.5 - 5°) GIVES A ROUGH MEASURE
OF CELL SIZE
but is affected by other factors,
such as refractive index
INCIDENT LIGHT BEAMINCIDENT LIGHT BEAM
11
THE AMOUNT OF FLUORESCENCETHE AMOUNT OF FLUORESCENCE
EMITTED MUST BE LESS THANEMITTED MUST BE LESS THAN
THE AMOUNT OF LIGHT ABSORBED,THE AMOUNT OF LIGHT ABSORBED,
ANDAND
How Forward Angle Light Scatter is collected
FALS Sensor
Laser
Purdue University Cytometry
Laboratories
9
The amount of light scattered in the Forward direction
(along the same axis
That the laser light is traveling)
is detected
in the forward scatter channel
The intensity of forward scatter is proportional to the
Size
Shape
Optical homogenity
of cells (or other particles)
When a laser light source is used
90 Degree (side) Light Scatter
FALS Sensor
90LS Sensor
Laser
Purdue University Cytometry Laboratories
10
How
is collected The intensity of side scatter is proportional to the
Size
Shape
Optical homogenity
of cells (or other particles)
When a laser light source is used
the amount of light scattered to the side
(perpendicular to the axis
that the laser light is traveling)
is detected
in the side or 90°
scatter channel
1
Side Scatter
0 200 400 600 800 1000
ForwardScatter
02004006008001000
8
15
20
30
40
50
100
200
1000
Lymphocytes
Monocytes
Neutrophils
Side Scatter Projection
ForwardScatterProjection
Light Scatter Gating
Scale
Purdue University Cytometry Laboratories
Control ATRA DMSO
NaBt vit. D3
0.02% 0.17%
0.14%
0.02% 0.37%
11.9%
0.14% 0.8%0.8%
12.2%
49.3%
1.7%0.04%
16.6%
57.9%4.8%
FITC
FITC
FITC
FITC
CELLULAR ANTIGENS
© Karel Souček 2000
TwoTwo--parametricparametric analysisanalysis
ofof cellcell surfacesurface antigensantigens
(HL(HL--6060 humanhuman leukemicleukemic cellscells
treatedtreated withwith agentsagents ofof differentiationdifferentiation))
CD11b (granulocyte/ monocyteCD11b (granulocyte/ monocyte markermarker))
CD14 (CD14 (monocyticmonocytic markermarker))
34
CD 14
CD 11b
CHRONICKÁ LYMFATICKÁ LEUKEMIE (CLL)CHRONICKÁ LYMFATICKÁ LEUKEMIE (CLL)
LymfoproliferativníLymfoproliferativní onemocněníonemocnění –– klonální proliferace lymfocytů na určitéklonální proliferace lymfocytů na určité
úrovni maturačního procesu s postupnou akumulací nefunkčních lymúrovni maturačního procesu s postupnou akumulací nefunkčních lymfocytů vfocytů v
lymfatické tkáni (slezina, uzliny, játra, kostní dřeň) i periferlymfatické tkáni (slezina, uzliny, játra, kostní dřeň) i periferní krviní krvi
BB--CLLCLL -- nejčastější forma, zástava mezinejčastější forma, zástava mezi prepre--B a zralými BB a zralými B--lymfocytylymfocyty
TT--CLLCLL –– méně častá, v etiologii infekce retrovirem HTVLméně častá, v etiologii infekce retrovirem HTVL--1, horší prognóza a1, horší prognóza a
odpověď na léčbuodpověď na léčbu
PROLYMFOCYTÁRNÍ LEUKEMIE (PLL)PROLYMFOCYTÁRNÍ LEUKEMIE (PLL)
CHRONICKÁ MYELOIDNÍ LEUKEMIE (CML)CHRONICKÁ MYELOIDNÍ LEUKEMIE (CML)
je klonálníje klonální myeloproliferativnímyeloproliferativní onemocněníonemocnění pluripotentnípluripotentní progenitorovéprogenitorové buňky.buňky.
Zahrnuje myeloidní,Zahrnuje myeloidní, erytroidníerytroidní, megakaryocyt, B, megakaryocyt, B-- někdy Tněkdy T--lymfoidní elementy,lymfoidní elementy,
ale ne fibroblasty kostní dřeně (KD). Nemoc je silně heterogenníale ne fibroblasty kostní dřeně (KD). Nemoc je silně heterogenní, má 2 až 3, má 2 až 3
fázový průběh, nejčastěji u osob nad 50 let.fázový průběh, nejčastěji u osob nad 50 let.
Specifická cytogenetická abnormalitaSpecifická cytogenetická abnormalita -- PhiladelphiaPhiladelphia ((PhPh) chromozom.) chromozom.
MolekulárníMolekulární markermarker bcrbcr--ablabl zfúzovanýzfúzovaný gen, translokace t(9;22)gen, translokace t(9;22)
V minulosti byla prognóza pacientů s CML velmi špatná (V minulosti byla prognóza pacientů s CML velmi špatná (střstř. doba přežití 3. doba přežití 3
roky). Nyní se prognóza zlepšila díky včasné diagnóze, zlepšujícroky). Nyní se prognóza zlepšila díky včasné diagnóze, zlepšující se terapii aí se terapii a
podpůrné léčbě.podpůrné léčbě.
LéčbaLéčba hydroxyureouhydroxyureou aa busulfanembusulfanem podporovaná IFN a autolognípodporovaná IFN a autologní transpltranspl. KD. Nyní je. KD. Nyní je
střstř. doba přežití asi 60. doba přežití asi 60--65 měsíců.65 měsíců.
SS IFNalfaIFNalfa 2020--25% pacientů přežívá.25% pacientů přežívá. Vedlejší účinkyVedlejší účinky -- horečka, nechutenství, svalovéhorečka, nechutenství, svalové
bolesti, dlouhodobějšíbolesti, dlouhodobější -- ztráta váhy, deprese, nespavost atd.ztráta váhy, deprese, nespavost atd.
CharakterikyCharakteriky různých typů leukemiírůzných typů leukemií ilustrují vztah ke stadiuilustrují vztah ke stadiu
zástavy diferenciace.zástavy diferenciace.
Typické genetické změnyTypické genetické změny ovlivňující jak proliferaci (aktivovanéovlivňující jak proliferaci (aktivované
kinázy) takkinázy) tak apoptózuapoptózu ((BclBcl--2)2)
Z. Adam, J. Vorlíček, J. Koptíková:
Obecná onkologie a podpůrná léčba
P. Klener:
Klinická onkologie
CHRONICKÁ MYELOIDNÍ LEUKEMIECHRONICKÁ MYELOIDNÍ LEUKEMIE
P. Klener:
Klinická onkologie
CHRONICKÁ LYMFATICKÁ LEUKEMIE (CLL)CHRONICKÁ LYMFATICKÁ LEUKEMIE (CLL)
AKUTNÍ LEUKEMIEAKUTNÍ LEUKEMIE
AkutníAkutní lymfoblastickélymfoblastické leukemie (ALL)leukemie (ALL) –– akumulace nezralýchakumulace nezralých
lymfoidních buněk v KDlymfoidních buněk v KD
převážně u dětípřevážně u dětí –– asi 80% všech leukemií dětského věku a asi 25% všechasi 80% všech leukemií dětského věku a asi 25% všech
dětských nádorů. Prognóza je relativně příznivá.dětských nádorů. Prognóza je relativně příznivá.
U dospělých staršího věku asi 20% všech akutních leukemiíU dospělých staršího věku asi 20% všech akutních leukemií –– méně přízniváméně příznivá
prognóza.prognóza.
Dva základní typyDva základní typy –– BB--ALL nebo TALL nebo T--ALLALL
Akutní myeloidní leukemie (AML)Akutní myeloidní leukemie (AML) –– nejčastější leukemickénejčastější leukemické
onemocnění dospělýchonemocnění dospělých –– až 85% AL u osob starších 20 let. Prognóza se važ 85% AL u osob starších 20 let. Prognóza se v
posledních letech zlepšila.posledních letech zlepšila.
NONNON--HODGKINSKÉ LYMFOMY (maligní lymfomy, NHL)HODGKINSKÉ LYMFOMY (maligní lymfomy, NHL)
Vznikají nádorovou transformací buněk lymfoidních tkání.Vznikají nádorovou transformací buněk lymfoidních tkání.
Klasifikace obtížná, někdy není rozdíl mezi leukemií a lymfomemKlasifikace obtížná, někdy není rozdíl mezi leukemií a lymfomem jasný.jasný.
U dětí asi 12% u dospělých 3U dětí asi 12% u dospělých 3--4% všech zhoubných nádorů4% všech zhoubných nádorů
ALLALL –– řadařada subtypůsubtypů lišících se vlišících se v
odpovědi k terapii a rizikuodpovědi k terapii a riziku relapsurelapsu vv
závislosti nazávislosti na diagnostickémdiagnostickém karyotypukaryotypu..
POLYSOMIEPOLYSOMIE
2525--30%30% -- více než 50 chromozomůvíce než 50 chromozomů
((hyperdiploidiehyperdiploidie) bez dalších struktur.) bez dalších struktur.
karyotypovýchkaryotypových abnormalitabnormalit
AML – gen. změny vedoucí ke konstitutivní aktivaci receptoru pro IL-3 – aktivace
tyrosin kináz a proliferace.
Aktivace IL-3 receptoru podporuje růst všech typů myeloidní řady
BB--lymfomy,lymfomy, BurkittůvBurkittův lymfomlymfom
Translokace a aktivace imunoglobulinového (Translokace a aktivace imunoglobulinového (IgIg) promotoru spojená s aktivací genů) promotoru spojená s aktivací genů
cc--mycmyc (podpora proliferace) a(podpora proliferace) a BclBcl--2 (blok2 (blok apoptózyapoptózy))
Rychlý nárůst nezralých B buněk, které neumírajíRychlý nárůst nezralých B buněk, které neumírají
Genetická změna v kmenovéGenetická změna v kmenové bunňcebunňce, ale růst nádoru je určen stadiem maturace, kde, ale růst nádoru je určen stadiem maturace, kde
dojde k aktivacidojde k aktivaci IgIg promotoru.promotoru.
Z. Adam, J. Vorlíček, J. Koptíková:
Obecná onkologie a podpůrná léčba
P. Klener:
Klinická onkologie
P. Klener:
Klinická onkologie
Z. Adam, J. Vorlíček, J. Koptíková:
Obecná onkologie a podpůrná léčba
P. Klener:
Klinická onkologie
Všechny elementy krve a lymfy jsou odvozeny během fetálního a doVšechny elementy krve a lymfy jsou odvozeny během fetálního a dospělého života odspělého života od
pluripotentnípluripotentní hemopoetickéhemopoetické kmenové buňkykmenové buňky. Nachází se v malém počtu v kostní dřeni a. Nachází se v malém počtu v kostní dřeni a
většina z nich se aktivně nedělí.většina z nich se aktivně nedělí.
Pokrok vPokrok v izolaci a charakterizaciizolaci a charakterizaci pluripotentnípluripotentní kmenové buňky pomáhá kkmenové buňky pomáhá k poznání spoznání s níní
souvisejících malignit.souvisejících malignit.
LidskéLidské kmenové buňky nesou povrchový znak CD34kmenové buňky nesou povrchový znak CD34 a jsou schopny tvořit řadu kolonií va jsou schopny tvořit řadu kolonií v
semisolidnímsemisolidním prostředí v odpověď na různé specifické růstové faktory. Jistéprostředí v odpověď na různé specifické růstové faktory. Jisté lidskélidské
leukemické buňky jako chronická myeloidní leukémie (CML) nebo akleukemické buňky jako chronická myeloidní leukémie (CML) nebo akutní myeloidníutní myeloidní
leukémie (AML), které představují velmi nezralé kmenové buňky neleukémie (AML), které představují velmi nezralé kmenové buňky nebobo prekursoryprekursory
jednotlivýchjednotlivých líniílínií, se jen velmi obtížně kultivují, se jen velmi obtížně kultivují in vitroin vitro, přesto, že v pacientech rostou velmi, přesto, že v pacientech rostou velmi
rychle. Chybí asi specifické faktory dodávané mikroprostředím korychle. Chybí asi specifické faktory dodávané mikroprostředím kostní dřeně.stní dřeně.
V současné době byl objeven nový tzv.V současné době byl objeven nový tzv. steelsteel faktorfaktor produkovanýprodukovaný stromálnímistromálními buňkami abuňkami a
jehojeho receptorreceptor cc--kitkit přítomný na řaděpřítomný na řadě hemopoetickýchhemopoetických buněk. U myší byly definoványbuněk. U myší byly definovány dvadva
genetickégenetické lokusylokusy regulující vývoj kmenové buňkyregulující vývoj kmenové buňky -- steelsteel (SL) a(SL) a whitewhite--spottingspotting (W)(W)..
WW lokuslokus kóduje ckóduje c--kitkit onkogenonkogen, což je člen třídy, což je člen třídy onkogenůonkogenů propro tyrosintyrosin kinázové receptory. Jekinázové receptory. Je
to receptor pro produkt genuto receptor pro produkt genu SlSl majicímajicí růstově promoční aktivitu pro mnohorůstově promoční aktivitu pro mnoho hemopoetickýchhemopoetických
líniílínií a vykazující synergii s dalšími růstovými aa vykazující synergii s dalšími růstovými a diferencdiferenc. faktory jako GM. faktory jako GM--CSF,CSF, EpoEpo a ILa IL--7.7.
SlSl faktor je považován za kritický pozitivní efektor růstu a vývojfaktor je považován za kritický pozitivní efektor růstu a vývoje kmenových buněk.e kmenových buněk. ProtoProto
je věnována pozornost jeho roli vje věnována pozornost jeho roli v růstovérůstové rsgulacirsgulaci u leukemií, které představují primitivníu leukemií, které představují primitivní
typy kmenových buněk.typy kmenových buněk.
Poměrně dobře je objasněnaPoměrně dobře je objasněna úlohaúloha stromatustromatu kostní dřeně vkostní dřeně v regulaci normálníregulaci normální
krvetvorbykrvetvorby..
Byly vytvořeny dlouhodobé kultury proByly vytvořeny dlouhodobé kultury pro myeloerytroidnímyeloerytroidní a lymfoidní vývoj.a lymfoidní vývoj.
Řada údajů předpokládá, žeŘada údajů předpokládá, že vzájemné kontakty buněk a specifické účinkyvzájemné kontakty buněk a specifické účinky
extracelulární matrix pomáhají regulovat vývoj kmenové buňky.extracelulární matrix pomáhají regulovat vývoj kmenové buňky.
Různé typy leukémií se mohou lišit od normálních protějšků tím,Různé typy leukémií se mohou lišit od normálních protějšků tím, že nevyžadujíže nevyžadují
dále blízký buněčný kontakt pro růstovou expanzi a cirkulaci v kdále blízký buněčný kontakt pro růstovou expanzi a cirkulaci v krvi.rvi.
Při vývoji buněk kostní dřeně existuje kontrola a rovnováha, ktePři vývoji buněk kostní dřeně existuje kontrola a rovnováha, která limitujerá limituje
celkovoucelkovou buněčnostbuněčnost a odpověď na stresy jako záření, krvácení a pod. Existujía odpověď na stresy jako záření, krvácení a pod. Existují
údaje oúdaje o negativních regulátorech kmenových inegativních regulátorech kmenových i líniovělíniově specifických buněkspecifických buněk, např., např.
TGF beta produkovanýTGF beta produkovaný stromálnímistromálními buňkami.buňkami.
Pozornost věnována tomu jak kmenové buňky a různé leukemie unikaPozornost věnována tomu jak kmenové buňky a různé leukemie unikají tétojí této
negativní kontrole.negativní kontrole.
Proliferation
RECEPTOR
pro růstový
faktor
Model prostorové organizaceModel prostorové organizace hemopoetickýchhemopoetických kmenových buněk a růstových faktorůkmenových buněk a růstových faktorů
v mikroprostředí kostní dřeněv mikroprostředí kostní dřeně
PROGENITOROVÁPROGENITOROVÁ
BUŇKABUŇKA
ProliferaceProliferace
MÍSTOMÍSTO
BUNĚČNÉBUNĚČNÉ
ADHEZEADHEZE
STROMÁLNÍ BUŇKASTROMÁLNÍ BUŇKA
Růstový faktorRůstový faktor
(indukovaný)(indukovaný)
MembránaMembrána
Proteiny matrixProteiny matrix
Růstový faktorRůstový faktor
(vnější)(vnější)
IFNIFN--, interferon, interferon gammagamma
LPS,LPS, lipopolysacharidelipopolysacharide
TNF, tumorTNF, tumor necrosisnecrosis factorfactor
GM - CSF
T buňkaT buňka B buňkaB buňka
makrofágmakrofág
Kostní dřeňKostní dřeň
IL - 3
IL - 1
IFN - 
IL - 2
IL - 4
IL - 1
LPS
TNF
(-)TNF
G - CSF
ProtilátkaProtilátka
Síť interakceSíť interakce cytokinůcytokinů, positivní a negativní zpětná vazba, positivní a negativní zpětná vazba
LínieLínie výzkumů mechanismů působenívýzkumů mechanismů působení retroviru indukujícíhoretroviru indukujícího erytroleukémiierytroleukémii
vedlo k odhalení, ževedlo k odhalení, že virové proteinyvirové proteiny mohou stimulovat růst hostitelskýchmohou stimulovat růst hostitelských
buněk tím, že působí jakobuněk tím, že působí jako pseudoligandypseudoligandy pro receptory růst. faktorů.pro receptory růst. faktorů.
U lidských i živočišných leukémií byly identifikoványU lidských i živočišných leukémií byly identifikovány genygeny homologníhomologní sese
známými transkripčními aktivátoryznámými transkripčními aktivátory. Některé hrají roli v diferenciaci. Některé hrají roli v diferenciaci hemophemop..
buněk, protože jsoubuněk, protože jsou homologníhomologní nebo identické s geny dříve identifikovanýminebo identické s geny dříve identifikovanými
v jinýchv jiných experimexperim. systémech jako geny ovlivňující vývoj a diferenciaci.. systémech jako geny ovlivňující vývoj a diferenciaci.
Existuje tedy vazba mezi onkogenezí a transkripční deregulací.Existuje tedy vazba mezi onkogenezí a transkripční deregulací.
Model indukce hematopoetické diferenciace specifickými transkriModel indukce hematopoetické diferenciace specifickými transkripčními faktory.pčními faktory.
Transkripční faktory jsou máloTranskripční faktory jsou málo exprimoványexprimovány u kmenových buněk CD34. Působením blížeu kmenových buněk CD34. Působením blíže
nedefinovaných signálů, jako je vliv interakce venedefinovaných signálů, jako je vliv interakce ve stromatustromatu nebo signály růstových faktorů, dochází knebo signály růstových faktorů, dochází k
upregulaciupregulaci specifickýchspecifických trtr. faktorů např. GATA. faktorů např. GATA--11 oror PU.1. To vede k jejich autoregulaci aPU.1. To vede k jejich autoregulaci a upregulaciupregulaci
specifických receptorů pro růstové faktory, což má za následek vspecifických receptorů pro růstové faktory, což má za následek vzestup proliferace, diferenciace azestup proliferace, diferenciace a
supresisupresi apoptózyapoptózy specifických linií.specifických linií. DownregulaceDownregulace specifických faktorů (jako je GATAspecifických faktorů (jako je GATA--1 během1 během
myeloidního vývoje) může také hrát důležitou úlohu.myeloidního vývoje) může také hrát důležitou úlohu.
11
AktivaceAktivace
transkripčníchtranskripčních
faktorůfaktorů
22
Zvýšená expreseZvýšená exprese
specifickýchspecifických
CSF receptorůCSF receptorů
33
Maturace indukovanáMaturace indukovaná
transkripčními faktorytranskripčními faktory
a CSFa CSF
Neutrofil
myeloidní
prekursor
GM-CSF R
erytroidní
prekursor
Monocytární
prekursor
myeloidní
prekursor
G-CSF R
M-CSF R
EpoR EpoR
Epo
M-CSF
G-CSF
Gata-1
PU.1
PU.1
C/EBP
CD34 Monocyt
Erytrocyt
VV normální buňce jenormální buňce je rovnováha stimulačních a inhibičních signálů pečlivěrovnováha stimulačních a inhibičních signálů pečlivě
regulována, protože to souvisí sregulována, protože to souvisí s regulací buněčného cykluregulací buněčného cyklu,, který je rozhodujícíkterý je rozhodující
pro buněčnou proliferaci a diferenciaci.pro buněčnou proliferaci a diferenciaci.
VV nádorové buňce je v důsledku změn vnádorové buňce je v důsledku změn v signálních drahách organizace buněčnéhosignálních drahách organizace buněčného
cyklu narušena.cyklu narušena.
Buňka je vybavena takéBuňka je vybavena také zpětnovazebnými mechanismyzpětnovazebnými mechanismy, které mohou působit, které mohou působit
proti neobvyklým změnám vproti neobvyklým změnám v procesu bun. dělení.procesu bun. dělení.
Patří kPatří k nim např.nim např. programovaná buněčná smrtprogramovaná buněčná smrt -- apoptózaapoptóza, schopnost buňky, schopnost buňky
spáchat za určitých podmínek sebevraždu, tj. jestliže její záklaspáchat za určitých podmínek sebevraždu, tj. jestliže její základní komponentydní komponenty
jsou porušeny nebo jestliže je její kontrolní systém deregulovánjsou porušeny nebo jestliže je její kontrolní systém deregulován..
Tak působí např. poškození chromozomální DNA. VTak působí např. poškození chromozomální DNA. V tomto procesu se účastní takétomto procesu se účastní také
specifické geny např. p53 nebospecifické geny např. p53 nebo bclbcl--22. Mutace těchto genů pak způsobují poruchy. Mutace těchto genů pak způsobují poruchy
apoptózyapoptózy..
NeschopnostNeschopnost apoptózyapoptózy přispívá ke vzniku nádorů a kpřispívá ke vzniku nádorů a k jejich rezistenci kjejich rezistenci k terapii.terapii.
Exprese genů kontrolujících buněčný cyklus v jednotlivých stádiíExprese genů kontrolujících buněčný cyklus v jednotlivých stádiíchch
hematopoetické diferenciace a její vztah k funkčnímu stavu.hematopoetické diferenciace a její vztah k funkčnímu stavu.
Cell Cycle Control Genes in Haematopoiesis
Cell type:Cell type:
FunctionFunction::
Committed progenitorsStem cells Morphologically-identifiable cells
Self renewal Blood pool expansion
DifferentiationDifferentiation
WBCp15
G0/G1 arrest
(slow cycling)
cyclin D1
Terminal differentiation
CellCell cyclecycle
status:status:
S-phase entry
(active cycling)
G0/G1 arrest
(differentiated)
RBC
MGK
cdc2
p21
cyclin D3
cyclins
cdk2
cdc2
p16
cyclins
cdk2
cdc2
p16
p21
XXXXX
Identifikace řadyIdentifikace řady protoonkogenůprotoonkogenů jako růst. faktorů nebo jejich receptorů ajako růst. faktorů nebo jejich receptorů a
důležité účinky těchto proteinů nadůležité účinky těchto proteinů na hemopoetickéhemopoetické buňky vedly k hledáníbuňky vedly k hledání
dysregulacedysregulace růst. faktorů a jejich receptorů u leukémiírůst. faktorů a jejich receptorů u leukémií..
Biologická terapie s využitímBiologická terapie s využitím cytokinůcytokinů a růstových faktorůa růstových faktorů představujepředstavuje
zcela nový přístup.zcela nový přístup.
HemopoézaHemopoéza může být ovlivňována buďmůže být ovlivňována buď hemopoetickýmihemopoetickými růstovými faktoryrůstovými faktory
nebonebo negativními regulátorynegativními regulátory, které mohou zabránit poškození kmenové, které mohou zabránit poškození kmenové
buňky během chemoterapie. Na základě poznatků obuňky během chemoterapie. Na základě poznatků o autokrinníchautokrinních
mechanismech růstumechanismech růstu mohou býtmohou být klidové maligní buňkyklidové maligní buňky uvedeny douvedeny do
buněčného cyklu svými růstovými faktory, čímž se stanoubuněčného cyklu svými růstovými faktory, čímž se stanou citlivější kcitlivější k
chemoterapii.chemoterapii.
Vědomosti oVědomosti o biologické terapiibiologické terapii jsou teprve na počátku, zvláště pokud sejsou teprve na počátku, zvláště pokud se
týče všech aspektůtýče všech aspektů propojené sítěpropojené sítě cytokinůcytokinů..
CytokinyCytokiny a růstové faktory přenášejí signály mezia růstové faktory přenášejí signály mezi hemopoetickýmhemopoetickým aa
imunitním systémem buď samotné nebo indukcí uvolňování dalšíchimunitním systémem buď samotné nebo indukcí uvolňování dalších
cytokinůcytokinů..
TERAPEUTICKÉTERAPEUTICKÉ ASPEKTYASPEKTY VYUŽITÍ CYTOKINVYUŽITÍ CYTOKINŮŮ
►► pozitivní regulacepozitivní regulace -- využitívyužití hemopoetickýchhemopoetických tzvtzv.. koloniekolonie stimulujícíchstimulujících
růstovýchrůstových faktorůfaktorů (CSF)(CSF):: erytropoetinerytropoetin, G, G--CSFCSF -- granulocytárnígranulocytární růstrůst..
faktorfaktor, M, M--CSFCSF -- monocytárnímonocytární růstrůst.. faktorfaktor, GM, GM--CSFCSF -- granulocytárnígranulocytární--
makrofágovýmakrofágový růstrůst.. faktorfaktor, interleukin3 (IL, interleukin3 (IL--3)3)
►► negativní regulacenegativní regulace hemopoézyhemopoézy -- prevenceprevence poškozenípoškození kmenovýchkmenových buněkbuněk připři
chemoterapiichemoterapii -- TGFTGF 
►► autokrinníautokrinní růstrůst -- blokádablokáda přenosupřenosu růstovýchrůstových signálůsignálů antagonistyantagonisty růstovýchrůstových
faktorůfaktorů,, receptorůreceptorů a inhibitorya inhibitory dalšíchdalších stupňůstupňů přenosupřenosu signálůsignálů (inhibitory(inhibitory
PKC,PKC, lipidovéholipidového metabolismumetabolismu, “antisense”, “antisense” látkylátky,, atdatd.).)
►► imunomodulačníimunomodulační látkylátky -- ovlivněníovlivnění imunitníhoimunitního systémusystému hostitelehostitele (IL(IL--2,2,
interferoninterferon alfaalfa aa gamagama
KONTROLA HEMOPOÉZY A LÉČBAKONTROLA HEMOPOÉZY A LÉČBA
HemopoézaHemopoéza je regulována více než 20 dobře charakterizovanými faktoryje regulována více než 20 dobře charakterizovanými faktory
definovanými jakodefinovanými jako kolonie stimulující faktory,kolonie stimulující faktory, interleukinyinterleukiny aa cytokinycytokiny..
Některé z těchto faktorů jsou běžně používány, ale potenciální kNěkteré z těchto faktorů jsou běžně používány, ale potenciální klinické využitílinické využití
není úplně objasněno. První byl využitnení úplně objasněno. První byl využit erytropoetinerytropoetin..
Ovlivňování pacientůOvlivňování pacientů cytokinycytokiny podléhá zcela jiným pravidlům, nežli působenípodléhá zcela jiným pravidlům, nežli působení
cytotoxickými látkami.cytotoxickými látkami.
CytokinyCytokiny mají široké spektrum účinkůmají široké spektrum účinků inin vivovivo jako je modulace imunitníjako je modulace imunitní
odpovědi, stimulaceodpovědi, stimulace hemopoézyhemopoézy, přímá regulace buněčného růstu a, přímá regulace buněčného růstu a
diferenciace, toxicita pro nádorové buňky, účinky na vaskularizadiferenciace, toxicita pro nádorové buňky, účinky na vaskularizaci nádorůci nádorů
apod.apod.
NavícNavíc nevykazují jen primární účinky, ale spouštějí kaskádu sekundárnínevykazují jen primární účinky, ale spouštějí kaskádu sekundárníchch
účinků.účinků.
Erytropoetin
► stimulace erytropoézy po chemoterapii a transplantaci KD
► u některých lymfoproliferačních poruch jako jsou mnohočetné myelomy a chronická
lymfocytární leukémie
► u anémií spojených s chronickým onemocněním (nádory, AIDS)
► v programech autologního odběru krve
CSF (colony stimulating factors, GM-CSF, G-CSF)
► prevence a ovlivnění myelosuprese
► intenzifikace chemoterapeutických programů s nebo bez autologní podpory
progenitorů z kostní dřeně (KD) nebo periferní krve
► rekonstituce krvetvorby po chemo- a radioterapii a autogenní nebo allogenní
transplantace KD
► podpora a expanze progenitorů periferní krve
► stimulace hemopoézy u syndromů poruch v KD jako je cyklická neutropenie,
aplastická anémie
► aktivace efektorových buněčných funkcí (AIDS, poruchy funkce leukocytů)
► zvýšení účinnosti cytotoxických léčiv vybuzením klidových leukemických buněk
Kostní dřeň obsahuje asi 0.001% pravých kmenových buněk, 10x vícKostní dřeň obsahuje asi 0.001% pravých kmenových buněk, 10x víc
““multilineagemultilineage”” progenitorůprogenitorů a 100x víca 100x víc líniovělíniově specifickýchspecifických progenitorůprogenitorů..
U dospělců cirkuluje vU dospělců cirkuluje v perifperif. krvi asi 5. krvi asi 5--10% počtu10% počtu progenitorovýchprogenitorových buněk vbuněk v
KD. Představují asi 0.1% mononukleární frakceKD. Představují asi 0.1% mononukleární frakce perifperif. krve. Vyvinuty metody. krve. Vyvinuty metody
zvýšení cirkulujícíchzvýšení cirkulujících progenitorůprogenitorů aplikacíaplikací specifspecif.. cytokinůcytokinů..
CD34+ jeCD34+ je glykosylovanýglykosylovaný povrchový antigenpovrchový antigen exprimovanýexprimovaný předevšímpředevším
kmenovými a méněkmenovými a méně progenitorovýmiprogenitorovými buňkami.buňkami.
Byla vyvinuta řada metod pro selekci buněk s tímto znakem. S vývByla vyvinuta řada metod pro selekci buněk s tímto znakem. S vývojem metodojem metod
in vitroin vitro kultivace lze tyto buňky namnožit s pomocíkultivace lze tyto buňky namnožit s pomocí synergického působenísynergického působení
kombinacekombinace cytokinůcytokinů ((steelsteel faktor + další), pakfaktor + další), pak reinfuzereinfuze..
VyužitíVyužití vysokých dávek chemoterapeutikvysokých dávek chemoterapeutik, které účinně působí na citlivé nádory, které účinně působí na citlivé nádory
je omezeno vedlejšími účinky sje omezeno vedlejšími účinky s hematologickou toxicitouhematologickou toxicitou..
Jednou z cest jak překonat tyto obtíže jeJednou z cest jak překonat tyto obtíže je
metoda transplantace kmenových buněk z perifernímetoda transplantace kmenových buněk z periferní krve (PBSC)krve (PBSC),,
která jekterá je alternativou k transplantaci kostní dřeně (KD)alternativou k transplantaci kostní dřeně (KD) a je stále více využívána.a je stále více využívána.
Výhody:Výhody:
►► sběr PBSCsběr PBSC leukaferézouleukaferézou probíhá mimo pacienta bez potřeby anestézie aprobíhá mimo pacienta bez potřeby anestézie a
možnostímožností autograftuautograftu v případě ovlivnění KD infiltrací nádoru, fibrózou nebov případě ovlivnění KD infiltrací nádoru, fibrózou nebo
hypoplasií pohypoplasií po chemochemo-- a radioterapiia radioterapii
►► dochází k rychlejšímu obnovení granulocytopoézy adochází k rychlejšímu obnovení granulocytopoézy a megakaryocytopoézymegakaryocytopoézy
►►redukována možná kontaminaceredukována možná kontaminace transplantantutransplantantu maligními buňkami.maligními buňkami.
MYELODYSPLASTICKÝ SYNDROM (MDS)MYELODYSPLASTICKÝ SYNDROM (MDS)
je získaná klonální porucha kostní dřeně charakterizovaná kvantije získaná klonální porucha kostní dřeně charakterizovaná kvantitativnímitativními
i kvalitativními poruchami vi kvalitativními poruchami v hemopoézehemopoéze ((hodně u starších lidíhodně u starších lidí -- není možnánení možná
drastická terapie)drastická terapie)
Řada léčebných protokolů je zaměřena naŘada léčebných protokolů je zaměřena na využití diferenciačních látekvyužití diferenciačních látek kk
podpoře zrání blokovaných buněk.podpoře zrání blokovaných buněk.
ExistujíExistují in vitroin vitro modelymodely, kde je možno pomocí, kde je možno pomocí retinovéretinové kyseliny, DMSO nebokyseliny, DMSO nebo
vit D3 příp. Gvit D3 příp. G--CSF, GMCSF, GM--CSF navodit diferenciaci. Avšak v praxi u pacientůCSF navodit diferenciaci. Avšak v praxi u pacientů
nepřinášejí žádoucí výsledky.nepřinášejí žádoucí výsledky.
KyselinaKyselina allall--transtrans retinováretinová (ATRA)(ATRA) je nyní efektivním lékem při léčběje nyní efektivním lékem při léčbě
akutníakutní promyelocytárnípromyelocytární leukémie (APL).leukémie (APL).
Na MDS má však malý účinek (genetický důvodNa MDS má však malý účinek (genetický důvod -- absence translokace 15,17absence translokace 15,17
důležitédůležité pravděppravděp. pro klinický účinek ATRA).. pro klinický účinek ATRA).
RekombinantníRekombinantní růst. faktory jako GMrůst. faktory jako GM--CSF a ILCSF a IL--3 jsou u MDS pacientů úspěšně3 jsou u MDS pacientů úspěšně
využívány ke zvýšení počtu cirkulujících bílých krvinek a destičvyužívány ke zvýšení počtu cirkulujících bílých krvinek a destiček.ek.
Diferenciace myeloidních leukemických buněk do nemaligníchDiferenciace myeloidních leukemických buněk do nemaligních
zralých makrofágů nebo granulocytůzralých makrofágů nebo granulocytů