HARMONOGRAM PRAKTIK Z GENOVÉHO INŽENÝRSTVÍ 2010											
DEN	ČAS	Úloha I. Izolace restrikčních endonukleáz	Úloha II. Klonování v pBluescript	Úloha III. Klonování v pSP72							
pondělí 17.5.10	9:00-10:00	"teorie, seznámení se s jednotlivými experimenty"									
	10:00-10:30		založení PCR-HSP60 (modifikace konců inzertu)								
	10:30-11:00	Zahájení centrifugace buněk									
	11:00-11:30		založení štěpení vektorové DNA	založení štěpení vektorové DNA							
			 - prázdný pBluescript (EcoRI+BamHI)	 - pBluescript s endolyzinem (KpnI+SacI)							
		Zvážení výtěžku buněk		 - expresní vektor pSP72  (KpnI+SacI)							
	11:30-13:00	Částečné štěpení buněčné stěny									
		Sonikace									
	13:00-14:00	centrifugace restriktáz									
		srážení DNA streptomycinem									
		příprava dialyzační hadice	příprava standardního agarózového gelu	příprava preparativního agarózového gelu							
		OBĚD									
	14:00-15:00		přečištění a štěpení produktu PCR (EcoRI+BamHI)								
		centrifugace vysrážené DNA		defosforylace pSP72							
	15:00-16:00		přečištění naštěpeného plazmidu a produktu PCR								
		přenesení restriktáz do dialyzační hadice		preparativní elektroforéza inzertu a vektoru							
	16:30-17:30		elektroforéza přečištěné DNA	izolace vektoru (pSP72) a inzertu z gelu							
úterý 18.5.10	8:00-9:00		příprava ligačních směsí úloha II	příprava ligačních směsí úloha III							
		výměna dialyzačního roztoku									
	8:45-9:15	dokončení izolace restrikčních endonukleáz									
	9:15-10:45	rozplnění do alikvot	transformace do buněk TOP10F'	transformace do buněk JM109(DE3)							
			nalití misek LBA+Amp+IPTG+xGal	nalití misek LBA+Amp							
			teplotní šok a inkubace	teplotní šok a inkubace							
	10:15-10:30		nanesení kontrolních gelů								
	10:45-11:00		výsev na selekční médium	výsev na selekční médium							
	11:00-12:00	založení restrikčního štěpení fágové DNA									
čtvrtek 20.5.10	8:00-8:30	příprava agarózového gelu									
	8:30-9:40		přečárkování transformant na selekční půdu								
				založení funkčního testu=přerazítkování 							
	9:40-10:00	elektroforéza naštěpené fágové DNA		transformant na půdu LBA+Amp+IPTG							
pátek 21.5.10	8:00-8:30		izolace metodou lyze varem	založení inkubace s chloroformem							
	8:30-10:00		Vyštěpení inzertu EcoRI a BamHI	přelití ploten usmrcenými buňkami S.aureus							
		vyhodnocení gelu a úspěšnosti izolace restriktáz	"elektroforéza DNA, výsledek bude k dispozici v Po"	vyhodnocení funkčního testu