Figure 4-23 (part 1 of 2) Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008) figure 4-23 part 1 MNase Figure 4-23 (part 2 of 2) Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008) figure 4-23 part 2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Na SDS polyakrylamidové gelové elektroforéze jsou patrné 3-4 výrazné proužky odpovídající 11,5 kDa (histon H4), 15,2-15,9 kDa (odpovídá histonům H2A, H2B, H3) a proužky odpovídající ostatním variantám histonových proteinů. jamka 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 vzorek marker vzorek 1 vzorek 1 vzorek 1 vzorek 1 vzorek 2 vzorek 2 vzorek 2 vzorek 2 marker koncentrace (ug/ul) ---------- 15 15 15 15 19 19 19 19 ----------- objem (ul) 7 0,33 0,66 1,33 2 0,26 0,52 1,05 1,58 7 množství (ug) ---------- 5 10 20 30 5 10 20 30 ----------- chromatin fragmentation Pufr 1xA 10mM NaCl 10mM MES pH 6.0 5mM EDTA 250mM sacharóza 0,6% Triton X-100 150mM spermidin těsně před použitím (po naředění pufru 1xA ze zásobního 5xA) se přidá: PMSF do koncentrace 100mM (zásobní roztok 0,1M) merkaptoetanol do koncentrace 20mM (zásobní roztok 14,3M) chci 0,25M HCl, 10ml 1l…..1,18kg 35% Mr=36,46 mám 1M………36,46g…....…1 l chci 0,25M…..9,115g…...….1l 0,09115g.....0,01l V=m / ρ =0,09115 / 1 180 = 0,000 077 2 l =0,077 2 ml .......100% =0,220 ml .......35% (g / mol) Vypracované protokoly posílejte e – mailem na fojtova@sci.muni.cz nebo schpetra@centrum.cz