Abnormal Development of Mouse Embryoid Bodies Lacking p27Kip1 Cell Cycle Regulator
Vítězslav Bryja, Lukáš Cajánek, Jiří Pacherník, Anita C. Hall, Viktor Horváth, Petr Dvořák, Aleš Hampla
Center for Cell Therapy and Tissue Repair, Charles University, Prague, Czech Republic; bDepartment of Molecular
Embryology, Institute of Experimental Medicine, Academy of Sciences of the Czech Republic, Prague, Czech Republic;
Laboratory of Molecular Embryology, Mendel University Brno, Brno, Czech Republic; dLaboratory of Molecular
Neurobiology, Department of Medical Biochemistry and Biophysics, Karolinska Institutet, Stockholm, Sweden;
Laboratory of Cytokinetics, Institute of Biophysics, Academy of Sciences of the Czech Republic, Brno, Czech Republic
- Jak ovlivňuje absence p27 (fenotyp p27-/-) diferenciaci ES buněk?
- Jaký má absence p27 vliv na skladbu a activitu cdk komplexů?
Úloha p27 - rodina p21, p27, p57
- regulátor buněčného cyklu
- propojení s regulací diferenciace, ale nejasné
- deplece => větší myši, možno revertovat deplecí cD1 (samotný cD1 -/- => menší myši)
=> p27-/- neplodné samice
Cell Cycle
Ep ib last
Blastocysts
■>- Hypoblast
Zárodečný epiblast
Primitivní
proužek
Alantoieký ektoderm
Zárodečný entoderm
Extraembryonální entoderm
Ž loutkový vak
>- Trofoblast
->■    Cyto trofoblast
Syncytiotrofob last
Extraembryonální tkáně
Gilbert 1997 / Bílek 2004
Immunoprecipitace
>
>
/
o o o A
7,
tt-.il.
7,
Oí-Iľ»
ŕ&siar bis?: analyals   'ihs ]nmi> srilise^ 'ilľacfcsi s«a]rsÄ ilia
<
ÄŕíLTjJ. ■ífipíSSÍ|:Ujff-JSl
Kinase assay
Band ür Long Pass Filter
Photo Multiplier Tubs
48B NM , 3Ilc Laser	cl-^iii	
		
9Df10 Beam Splitifli
DM 56DSP DM 640LP
Fluorescence Collection Lens
Red Diode Laser
Focusing Lens
453:10
F5C Die de
B
E
p27+y^ p27
	
	—1-
—
E
a
5
		
		
		
		
		
1 í ^	1   1      ■ 1 ť -L	
T
IT1CIÍÍJ3I!
min
n =241  n = 247 n = 241    *i = 247
K Si p = 0.02 p = 1 j \ 1U-*   KS: ŕ = 0.49 p = 0.07
Mes*:p=S.Äx H)'b
pli
VÍT
m   iií  nm dm   na   us  nit iim
kirirt><
IPCDK2
p27 WBCDK2
plT"
[P cyclin A
[Hl     M    DIO   DIO     |: li     US    L) t H 1)10
Pi'
DO     ĽS    DIO   UJO     DO     Di   OK D20
.1 n.EM
LP ciclin E
W B cyclin £
IP CDK4
kinas*
pi.' pir -
DO     D5   Dll   M)    DO     Dfl   DIU flU
P27 WB CDK4
WBcvcIin Dt WBcvcIin D2
W B cyclin M WE P27
pi?
Pil'
jm   i»s inn i>io   im   ijí i>ío D»
e 11
1 m
»     B    BI DM
lopff* jp»*1
C|'-e Im A i Lin* ■
íl
h..
m    os    m* dm
□ pif .rľí
p27-
DO    D5   DIO    D20    DO     D5    DIU D2G
Oct-3/4
TKOMA-l
B
p27+/+
T ROMA-1 W PI
10Ü ]
at
£ 80
I 70
g 60
* 50
< 40 O
t 20 ° 10 0
30
p27v+ (n = 84)
p27v-(n = 18)