Jméno:
Datum:

Téma 04:              Nácvik práce ve sterilních podmínkách –

                            Pasážování axenických kultur („subculture“)


Materiál: in vitro kultury Drosera capillaris Poir., Drosera rotundifolia L., Dionaea muscipula
Soland. ex Ellis., Saintpaulia ionantha Wendl., Streptocarpus wendlandii Spreng., Nephrolepis
exaltata (L.) Schott apod.


Média: M-S základní soli (plná koncentrace, ½ , 1/3 + aktivní uhlí), B5 vitamíny, sacharóza 20
g.l^-1, agar 7 g.l^-1, pH 5,5

Pomůcky: (vypsat)

Postup práce:

1.    Kultivační nádoby s kulturami přeneseme z kultivační místnosti do boxu.

2.    Připravíme si kultivační nádoby s čerstvým médiem a ostatní pomůcky.

3.    Opatrně ožíháme okraj kultivační nádoby.

4.    Sterilní pinzetou vyjmeme explantáty na sterilní Petriho misku. Rosnatky ponecháváme
v otevřených nádobách co nejkratší dobu. Jsou náchylné na přeschnutí.

5.     Odřízneme nekrotizované bazální části explantátů, izolované apikální části vsadíme do
čerstvého média.

6.    Znovu opatrně ožíháme okraj kultivační nádoby a uzavřeme ji uzávěrem.

7.    Zapíšeme datum a číslo kultury a svou značku.

8.    Kultivujeme v kultivační místnosti na světle (studené bílé zářivky, fotoperioda 16/8,  PAR
30μmol.m^-2.sec^-1) při 22ºC po dobu 4 týdnů.

Hodnocení

V následujících týdnech kontrolujeme čistotu kultur a vývoj explantátů.


Poznámka:

V případě, že chceme převádět kultury do nesterilních podmínek, je vhodné nechat je několik týdnů
zakořenit na médiu s nižší koncentrací minerálních látek (např. 1/3 MS+U).

Reference:  http://www.darwiniana.cz