Jméno:
Datum:

Téma 07:           Izolace stonkových meristémů

Izolace meristémů se provádějí především při ozdravování rostlin od virových infekcí, protože
koncentrace virů v rychle rostoucích pletivech je nižší než v diferencovaných orgánech. Kultury
izolovaných meristémů pak lze navíc podrobit termoterapii. Dalším možným využitím izolovaných
meristémů je mikropropagace.

Materiál: in vitro kultura tyrolského hvozdíku Dianthus sp.


Médium: MS základní soli, vitamíny B5, sacharóza 20 g.l^-1, agar 8 g.l^-1, pH 5,5

Pomůcky: preparační mikroskop, …


Postup práce:

1.    Kultivační nádoby s kulturami hvozdíku přeneseme z kultivační místnosti do laminárního boxu.

2.    Připravíme si kultivační nádoby s čerstvým médiem a ostatní pomůcky.

3.    Opatrně ožíháme okraj kultivační nádoby a otevřeme ji.

4.    Sterilní pinzetou vyjmeme prýty na sterilní Petriho misku.

5.    Oddělené apikální části prýtů s 2 nody vsadíme do čerstvého média.

6.    Opatrně ožíháme okraj kultivační nádoby a uzavřeme ji kovovým uzávěrem s ventilací.

7.    Bazální část prýtu použijeme pro izolaci axilárních meristémů. Rozdělíme si prýt na
jednonodální segmenty. Listy odtrhneme tahem směrem shora dolů a v jejich úžlabí najdeme axilární
meristém, který odpreparujeme dvěma řezy vedenými kolem meristému abaxiálně a adaxiálně.

8.    Izolovaný meristém inokulujeme do MS média.

9.    Zapíšeme datum a číslo kultury.

10.Kultivujeme v kultivační místnosti na světle (bílé zářivky, fotoperioda 16/8, PAR
30μmol.m^-2.sec^-1) při 22ºC.


Hodnocení

V následujících týdnech kontrolujeme čistotu kultur a vývoj izolovaných meristémů.