Jméno:                                                                      Datum:

Téma 10:                               Mikrotuberizace brambor

Metoda mikrotuberizace je využívána při množení, skladování a distribuci šlechtitelského materiálu
vegetativně rozmnožovaných rostlin. Bramborové hlízky se v podmínkách in vitro vytvářejí z
axilárních meristémů prýtu. Mikrohlízky jsou modifikované stonky, které na apexu obsahují množství
dormantních meristémů (“bramborová očka”). Dormanci lze přerušit skladováním mikrohlízek při
nižších teplotách po dobu několika týdnů.


Materiál:        in vitro kultura prýtů různých kultivarů brambor (Solanum tuberosum L.)

Médium          1. tuberizační: makro a mikroelementy MS médium, vitamíny B5 (Gamborg et al. 1969),
8% sacharosa, 0,7% agar, pH 5,7 (MS-8)

2. udržovací: makro a mikroelementy MS médium, vitamíny B5, 2% sacharosa, 0,7% agar, pH 5,7 (MS)

Pomůcky:


Postup:

1.       Přenes kultury brambor z kultivační místnosti do sterilního laminárního boxu.

2.       Připrav sterilní nástroje a kultivační nádoby s čerstvým médiem (MS, MS-8).

3.       Kultivační nádoby otevři a ožehni hrdlo nádob plamenem.

4.       Přenes kultury do sterilní Petri misky.

5.       Odřízni vrcholovou část prýtu (asi 2 cm) s neporušeným vrcholovým meristémem a inokuluj ji
do udržovacího MS média pro další kultivaci.

6.       Zbylou část prýtu rozděl na jednonodální segmenty a podle pořadí na prýtu je inokuluj do
MS-8 média.

7.       Stejným způsobem založ kontrolní inkubaci jednonodálních segmentů na MS médiu.

8.       Opatrně ožehni hrdlo otevřené kultivační láhve, láhev uzavři a popiš.

9.       Kultivuj v kultivační místnosti na světle (bílé zářivky, 50 μmol.m^-2.sec^-1, krátký den
fotoperioda 8 hod/16 hod tma) při 21ºC po 2 - 4 týdnů.


Hodnocení:

V průběhu kultivace kontroluj kontaminace kultur.

Zaznamenej počet mikrohlízek u každého kultivaru.

Všimni si rozdílů při tvorbě mikrohlízek v závislosti na obsahu sacharosy v médiu, poloze nodálního
segmentu na prýtu (topofýza), délce fotoperiody a vysvětli jejich podstatu.

Vyhodnoť rozdíly mezi kultivary ve velikosti a zbarvení mikrohlízek.


Literatura:

1.       McCown, B.H. and P.J.Joyce. 1991 Automated propagation of microtubers of potato. In:
I.K.Vasil /Ed./, Scale – Up and Automation in Plant Propagation, pp.95 – 109. Academic Press, San
Diego.

2.       Jackson S.D. (1999): Multiple Signaling Pathways Control Tuber Induction in Potato. –
Plant Physiol., 119: 1-8.