A B EC KM AN COULTER: COMPANY CZECH ■ i K i certified IN VITRO RADIOIMUNOÄNALYTICKÉ STANOVENÍ CELKOVÉHO TYROXÍNU (TT4) V LIDSKÉM SÉRU A PLAZMĚ 1 PRINCIP METODY" Radloimiinoanaiytfcke stanoven [celkového tyroxinu (H4)^e:Ťkompeiílivm:stanoVeni. Neznámé vzorky a kalibrátory sé mkubuji-spolu se <%tyroxinetri:jaíía;radta!nd|katorem ve zkumavkách potaženych:prolilatkou:Po-"^^ a navázaná: a Kťiviia se zrně rí •=g am a^Ěi taěení s. ■ S e s troj i- - se; ka II braĚň í - k nvka a z ni se odečtou koncentrace TT4 v neznámych vzorcích _ ľ 2 REAGENCIE" Vá e c h ny: r e ag a n qie ■ v-sou pra v&. jspu - sta bi I d i dodala exspirace, uvedeného na štítku krabice, jestliže jsouskíadoványprř2r8 °C. Skladovací podmínky pro rekonstituovane reagencie jsou uvedeny v kapitole 6. Poslup stanoveni. 2.1 Souprava pro stanoveni TT4,100 zkumavek (Kat. č. 14280 kmitů/min.). Opatrně odsajte obsah každé zkumavky (s výjimkou 2 zkumavek pro „total"). Měřte po dobu 1 min. vázanou aktivitu (B) a celkovou aktivitu (T). * Napipetujte po 500 fjL radioindikátoru do 2 nepotažených zkumavek pro zjištění celkové aktivity (T). IMMUNOTECH a.s. - Radiová 1 -102 27 Prague 10 - Czech Republic - Phone. +420-272017444 - Fax: +420-272017385 PI-1447-2008-07-17 A BECKMANCOUL7ER COMPANY i a voo u. po um certified TOTAL ! ó :ilA KIT IN ViTRO RADIOIMUNOANALYTICKÉ STANOVENÍ CELKOVÉHO TRIJODTYRONINU V LIDSKÉM SÉRU A PLAZMĚ CZECH IM1699 - ÍM3287 1. PRINCIP METODY- :.. ....... Radioimunoanalylicke stanoveni celkového..trijodotyromnu (TT3) je kompelitivni slanovem..Neznámé-vzorky akalibralory.seinkubujispoíuse ,!sl-lrfjadtyroninem jako radíomdikalorem VezkumavkäGh-.poiaženyeh_.protilátkou.. Po inkubact se obsah zkumavek odsa|e a navázaná akfiVfla sezmě^gama-čilacem.-Sestfo|(--So kalibrační krivka a z nl se odečtou koncentrace. TT3 v neznámych vzorcích: -. 2. -REAGENCIE ■ ' Všechny reagencia v soupravě jsou stabilní do data^exsplrace, uvedeného na štítku krabice, jestliže Jsou skiadoVan/:pft^2-8-"S.-Skladovací podmínky pro rekonstruované reagencie jsou uvedeny v kapitole 6. Posiup stanoveni. 2.1 Souprava pro stanovení TT3,100 zkumavek {Kat. č. 1699) 2.1.1 Zkumavky potažené protilátkou proti trijodtyroninu: 2x 50 kusů; připraveny k použiti, 2.1.2 1!5l-trljodtyronln: 1 lahvička (22 mL); připraven k použili. Lahvička obsahuje ke dní výroby 165 kBq l2Sl značeného T3 v tlumlvém roztoku s proteiny, azidem sodným (<0,i%, viz kap. Upozorněni) a barvivem. Poznámka: Přfpadný výskyt sraženiny v radioindikátoru nemá vliv na kvalitu stanoveni. 2.1.3 Kalíbrátory: 6 lahviček (po 0,5 mL); připraveny k použití. Lahvičky obsahuji od 0 do 12nmol/L trijodtyroninu, v lidském séru s azidem sodným (<0,1%, viz kap. Upozornění). Přesné koncentrace jsou uvedeny na štítcích lahviček. Lahvičky se kaiibrátory musí být vždy po napipetovánl příslušných roztoků ihned uzavřeny a uloženy při 2-8 "C. V opačném případě může dojit k odpařeni roztoků a následně při příštím stanoveni ke zkreslení výsledků. Kaiibrátory jsou kalibrovaný na standard IRMM-469. 2.1.4 Kontrolní vzorky: 2 lahvičky; lyoňiizáty. Lahvičky obsahují írfodtyronin, lyofilizovaný v lidském séru (viz kap. Upozorněni). Koncentrační rozsah očekávaných hodnot je uveden v přiloze návodu. Lahvičky musl být vždy po napipetováni příslušných roztoků Ihned uzavřeny a uloženy podíe bodu 6,1, V opačném případě může dojit k odpařeni roztoků a následně při piištim stanoveni ke zkresleni výsledků. 2.2 Souprava pro stanovení TT3,400 zkumavek (Kat. č. 3237) 2.2.1 Zkumavky potažené protilátkou proti trijodtyroninu: 8x 50 kusů; připraveny k použiti. 2.2.2 '"l-irijodtyronln: 4 lahvičky (po 22 mL); připraveny k použiti, 2.2.3 Kaiibrátory: 6 lahviček (po 0,5 mL); připraveny k použití. 2.2.4 Kontrolní vzorky; 2 lahvičky; lyoíillzáty, Upozornění: Teplota a data exspirace uvedené na lahvičkách se týkaj! pouze dlouhodobého skladováni komponent u výrobce, před jejich vložením do soupravy. Neberie na ně tedy, prosím, ohled. 3. ZAŘÍZENI A POTŘEBNÝ MATERIÁL Kromě obvyklého laboratorního zařízeni je pro analýzu potřebné následující vybaveni: - přesná míkropipela (25 uL), - poloautomatická pipeta (200 ut), - vibrační mtehadlo, - horizontálni nebo orbitálni třepačka, - vývěva, - gama-Čitač kalibrovaný na 13SI. 4. UPOZORNENÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ 4.1 Obecné poznámky: - nechejte reagencie před pipetací vytemperovat na lab. teplotu, - nemíchejte substance ze souprav různých šarži, - ke každé řadě stanoven! je třeba vždy stanovit novou kalibrační závislost, - přesné nssíaveni třepačky je důležité reprodukovatelnost stanoveni, - doporučuje se provádět stanovení v duplikátech. - Zkumavky jsou pouze na jedno použití. - veškerý odpad je třeba likvidovat v souladu s příslušným zákonem. 4.2 Základní pravidla radiační bezpečnosti Tato souprava obsahuje méně než 165 kBq (4x 165 kBq) l!Sí ke dní výroby. Tento radioaktivní materiál mohou přijímat, skladovat a použival pouze pracoviště, která splňují platné zákonné předpisy upravující podmínky pra bezpečné nakládáni s otevřenými radionuklidovými zářiči. Při práci s radioaktivními látkami dodržujte následující pravidla: - všechny radioaktivní látky musí být skladovány v původním baleni a jen na místech k tomu určených, - příjem a spotřeba radioaktivních látek musí být evidována, - práce s radioaktivními Šálkami musl být prováděny pouze ve vyhrazených prostorách, - pipetovánl nesmi být prováděno ústy, - v laboratořích určených k práci s radioaktivními látkami je zakázáno jisí, pil, kouřit, líčit se a pod,, - zabraňte přímému styku radioaktivních látek s pokožkou a používejte ochranných oděvů a rukavic. Po skončeni práce s lěmilo látkami sí vždy umyjte ruce, - obalový maleriál, klerý není kontaminován, Je možno odložil do běžného odpadu pouze po odstraněni varovných nápisů a značek, - povrch pracovních stolů, který by mohl být kontaminován, je třeba pravidelně kontrolovat, - v případě kontaminace nebo úniku radioaktivního materiálu postupujte podie stanovených předpisů - všechno laboratorní sklo, které bylo použito pro práci s radioaktivními látkami musi být řádně dekontaminováno a proměřeno před dalším použitím. 4.3 Azid sodný Některé substance jsou konzervovány azidem sodným, Azid sodný může reagovat s olovem, mědí nebo mosazi za vzniku příslušných výbušných azidů. Proto likvidované reagencie splachujte velkým množstvím vody. 4.4 Lidské sérum Materiál lidského původu obsažený v reagenciích této soupravy měl negativní test na přilomnost protilátek proti viru HIV 1 a 2, vim hepatitídy C a proti povrchovému antigénu hepatitídy B (HBsAg). Žádná z dostupných melod nemůže dát stoprocentní jistotu neíníekčnosti. Je tedy nutné pracovat s těmito leagenciemi Jako s potenciálně infekčními. Se všemi vzorky séra a plazmy musl být manipulováno, jako s potenciálně infekčními (hepatitis, nebo AIDS). Veškerý vznlkiý odpad je třeba likvidovat podíe platných předpisů, 5. SBĚR A PŘÍPRAVA, SKLADOVÁNÍ A ŘEDĚNÍ VZORKŮ - Odebírejte vzorky krve do zkumavek bez aditiv nebo s EDTA nebo nepadnem. - Odstředěním oddělte sérum nebo plazmu, - Vzorky séra a plazmy ize skladovat při 2-6 "C, jestliže bude stanoveni provedeno do 24 hodin. Při delším skladováni je nutno vzorky zamrazit při <-18°C, nejlépe v alikvotech, aby se předešlo opakovanému rozmrazováni a zmrazováni, 6. POSTUP STANOVENI 6,1. Příprava konlrolních vzorků Po vylemperovánl na laboratorní teplotu se. obsah lahviček rozpustí v destilované vodě, jejiž objem je uveden na štítku'lahvičky. Po přidáni vody nechejte kontrolní vzorky volně rozpouštět 10 minut a potom lehce bez napěněni promíchejte. Rozpuštěné kontrolní vzorky je možno skladovat 1 týden při 2-8 "C nebo v alikvotech zamrazené při <-18°C do data exspirace soupravy. 6,2 Schéma postupu (viz tabulka uvedená na další straně) 7. VÝSLEDKY Výsledky jsou získány proložením z kalibrační křivky, Křivka slouží k určení koncentrace TT3 pouze ve vzorcích měřených současné s kaiibrátory. 7.1 Kalibrační křivka Výsledky uvedené v návodu byiy získány v logit-log zobrazeni (splíne). Na vertikální osu bylo vyneseno B/T{%) nebo B/Bo (%) a na horizontální osu byly vyneseny koncentrace TT3 v kallbrátorech (nmoi/L). Jiné metody zpracování mohou dávat mírně rozdílné výsledky. pi-1699-2009-03-25 Tolal cpm: 55 739 cpm Kalibrátor TT3 (nmol/L) cpm (n=3)' BÍT (%) B/Ba (%} 0 0 41 993 75,3 100,0 1 0,75 33 375 59,9 79,5 2 1,5 24 922 44,7 59,3 3 3,0 15 480 27,8 36,9 4 6,0 8 930 16,0 21,3 5 12,0 5128 9,2 12,2 (Přiklaď typického stanovení, nepoužívejte pro výpočet) 7.2 Vzorky Na vertikální ose lokalizujte pra každý vzorek hodnoty B/T nebo B/Bo {%) a na horizontální ose odečtěte odpovídající koncentrace TT3 v nM, Přepočet koncentraci z nM na ng/dL se provede vynásobením výsledků faktorem 65. 8. KONTROLA KVALITY Správná laboratorní praxe předpokládá, že se kontrolní vzorek používá v každé kalibraci, aby se zajistila kontrola kvality získaných výsledků. Kontrolní vzorky musl být zpracovány stejným způsobem jako neznámé vzorky a k vyhodnoceni výsledků sa maji použil vhodné statistické metody. V případě závažného poškození obalu, nebo jestliže zfskané výsledky nejsou ve shodě s analytickými paramely stanovení (viz kap. 10}, kontaktujte prosím naše odborné pracovníky. Tel.:+420 272 017 391; fax:+420 272 017 385; Ě-mail: imunochem@beckman.com 9. OČEKÁVANĚ HODNOTY Každá laboratoř by si měla stanovit vlastní rozmez! referenčních hodnot, U netečených eutyreoidních osob byla touto soupravou stanovena normálni oblast koncentrace celkového tríjodtyroninu v rozmezí 1,2-2,8 nmoi/L, 10. ANALYTICKÉ PARAMETRY STANOVENI (podrobnosti jsou uvedeny v pň'íoze "APPENDIX") 10.1 Citlivost 10.1.1 Analytická citlivost: 0,3 nmoi/L 10.1.2 Funkční citlivost: 0,5 nmol/L 10.2 Speclllta Protiíálka použitá v systému je vysoce specifická pro trijodtyronin, Ostatní přirozeně se vyskytující hormony (reverspl-T3, L-T4, D-T4 aj.) dávají extrémně nízkou zkříženou reakci. 10.3 Přesnost 10.3.1 Intra-assay Přesnost infra-assay byla stanovena 10krát opakovanou analýzou. Hodnota variačního koeficientu byla menší nebo rovna 6,3%. 10.3.2 Inter-assay Vzorky byiy analyzovány duplikátech v 10 nezávislých analýzách. Hodnota va-' riačního koeficientu byla menší nebo rovna 7,7%. 10.4 Správnost 10.4.1 Test ředění Vzorky s vysokou koncentraci byly postupně ředěny a analyzovány. Naměřené hodnoty „recovery" se pohybovaly v rozmezí 90% až 110%. 10.4.2 Recovery test Ke vzorkům s nízkou hladinou TT3 byla přidána různá známá množství TT3 a vzorky byly analyzovány. Naměřené hodnoty „recovery" se pohybovaly v rozmezí 93% až 106%. 10.5 Rozsah stanovení (od analytické citlivosti do nejvyššiho kalibrátoru); 0,3-12 nmol/L. 11, OMEZENI POUŽITÍ SOUPRAVY Nedodrženi instrukcí uvedených v tomto návodu může vést k nesprávným výsledkům, Výsledky stanovení by měly být interpretovány ve světle celkového klinického obrazu pacienta včetně anamnézy, údajů z dalších testů a jiných vhodných informací. U stanoveni využívajících protilátky existuje možnost Interference heterofilnich protilátek přítomných v pacientském vzorku. Pacienti, kteří byli pravidelně ve styku se zvířaty nebo podstoupili ímunoterapii nebo diagnostické procedury využívající imunoglobuliny nebo fragmenty imunoglobulinú, mohou produkoval protilátky jako například HAMA (Human Anti-Mouse Antibodies - lidské protilátky proti myším proteinům), které interferují při imunologických stanoveních. Takové inlerferující protilátky mohou vést k chybným výsledkům. Výsledky pacientů, u nichž existuje podezření na přítomnost takovýchto protilátek, posuzujte s opatrnosti. 6. SHÉMA POSTUPU STANOVENÍ Krok 1 Pipetace* Krok2 Inkubace Krok 3 Měření Do potažených zkumavek postupně přidejte: -25 jxL kaíibrátoru, kontroly nebo vzorku a -200 ul radioindikátoru. Promíchejte. Inkubujte 1 hod. při 18-25 °C, za stálého třepání (>280 kmitů/min). Opatrně odsajte obsah každé zkumavky {s výjimkou 2 zkumavek pro „total"). Měřte po dobu 1 min. vázanou aktivitu (B) a celkovou aktivitu (T). *Napipetujte po 200 uL radioindikátoru do 2 nepotažených zkumavek pro zjištěni celkové aktivity (T). IMMUNQTECH a.s. - Radiová 1 -102 27 Prague 10 - Czech Republic - Phone. +420-272017444 - Fax ; +420-272017385 Pt-1699-2009-03-25 A íiECKřMtí COULTER COMPANY CZECH c e rti f i e d IMViTRO RAD 10IMUN0 ANALYTICKÉ STANOVENÍ VOLNÉHO TYROXINU V LIDSKÉM SÉRU A PLAZMĚ t. PRINCIP METODY _ _ Radioimunoanaiylicko stanoveni volného tyroxinu (FT4) je kompetitivnl stanovení, založené na použití proliláltyfroti^roxínuiznac^^^ °e spolu s touto značenou protilátkou a biotmylovanym analogem tyroximf (ligandem) nkubují ve zkumavkách potažoných avidinem. Probíhá tak kompetice nwi vo'nýtn tyroxinemTveiyzorku^;l!gandem oj/azebna mistaíOaiproWátcei^iásfepretjíálky, která -jevazána na l!ganaVmnaváže»njrsí^ Po inkubaci se obsah zkumavek-ôdšaie^a :zfflěřbse:v.ázaná:í3dioaktiVffa: Množství radioaktivity, váhané po mk'ibaci na stěny, je pak nepřímo umérnó množství volného íyroxinuvě vzorko^ Sesíro j I: se. kä líbraĚnP kTi vka: a ^ n f se odečtou koncentrace FT4 v neznámých vzorcích. 2, REAGENCIE . Všechny reagencie v souprava jsou stabilní do dáfa exspirace, uvedeného na štítku krabice, jestliže jsou skladovány při 2-8 "C. Skladovad podmínky pro rekonstruované reagencie jsou uvedeny v kapitole 6. Postup stanoveni. 2.1 Souprava pro stanovení FT4,100 zkumavek (Kat. č. 1363) 2.1.1 Zkumavky potažené avidinem: 2x 50 kusů; připraveny k použití. 2.1.2 Monoklonáln! protilátka proti tyroxinu, značená ,!5I: 1 lahvička (45 mLJ; připravena k použití. Lahvička obsahuje ke dni výroby 310 kBq ,36l značeného iniunoglobullnu v puf-ru s ochrannými hovězími proteiny, azidem sodným (<0,1%, viz kap. Upozornění) a barvivem. 2.1.3 Kalibrátory: 5 lahviček (po 0,5 mL); připraveny k použití. Lahvičky obsahují od 0 do 75 pmol/L volného tyroxinu, v lidském séru s azidem sodným (<0,1%, viz kap. Upozornění). Přesné koncentrace jsou uvedeny na štítcích lahviček. Lahvičky s kalibrátory musl být vždy po napipetování příslušných roztoků ihned uzavřeny a Uloženy při 2-8 °C. V opačném případě může dojít k odpařeni roztoků a následné při příštím stanovení ke zkresleni výsledků. Hodnoty kalibrátorů byly nastaveny pomoci vnitřního referenčního materiálu, 2.1.4 Lfgand: 1 lahvička (12 mL); připraven k použití. Lahvička obsahuje roztok biotinylovaného analogu T4 s ochrannými proteiny a azidem sodným (5 mg/den), musl být krev odebírána nejdříve 3 hodiny po poslední dávce biolinu. Souprava nebyla ověřována na neonatálních vzorcích. Zvláštní pozornost věnujte interpretaci výsledků získaných analýzou hemolyzovaných nebo íklerických sér, protože metoda nebyla testována pro tenlo typ vzorků. U stanovení využívajících protilátky existuje možnost interference heterofiínich protilátek přítomných v pacientském vzorku. Pacienti, kteří byli pravidelně ve styku se zvířaty nebo podstoupili imunoterapii nebo diagnostické procedury využívající ímunoglobuliny nebo fragmenty imunoglobulinú, mohou produkovat protilátky jako například HAMA (Human Anti-Mouse Antibodies - lidské protilátky proti myším proteinům), které interferuji při imunologických stanoveních. Takové Interferujíc! protilátky mohou vést k chybným výsledkům. Výsledky pacientu, u nichž existuje podezřeni na přítomnost lakovýchto protilátok, posuzujte s opatrností. 6.2 Schéma postupu stanovení Krok 1 Pipetace* Krok 2 ;JV-:v Inkubace Křók.3 ■.: Měření ( Do potažených zkumavek postupně přidejte: -25 uL kalibrátoru, kontrolního nebo neznámého vzorku,. -400 uL radioindíkátoru a -100 uL ligandu. Promíchejte. Inkubujte 60 Min. při 18-25 °C, za stáiého třepání (>350 kmitů/min.). Opatrně odsajte obsah každé zkumavky (s výjimkou 2 zkumavek pro „total"). Měřte po dobu 1 min. vázanou aktivitu (B) a celkovou aktivitu (T). * Napipetujte po 400 jjL radioindíkátoru do 2 nepotažených zkumavek pro zjištění celkové aktivity (T), ÍMMUNOTECH a.s. - Radiová 1 -102 27 Prague 10 - Czech Republic - Phone. +420-272017444 - Fax: +420-272017385 pi-1363-2008-01-08 j< i ---- IM1579 - IM3320 IN VITRO-RADIOIIVIUNOANALY-TICKE V LIDSKÉM certified 1. PRINCIP METODY : Metoda'stanovení- volného T3 je založena na použití pro tnjodtyronin.1 specifické monoklonáim prolilálky: značené!^ Vzore*, jespolečně stouto.protilátkou inkubovan ve zkumavce potažená analogem T3 (ligand). Dochází ke kompetic! mezr voinym Irijodtyronlnem ve vzorku a ligandem. Po jnkúbaci_se obsah zkumavek odsaje a navázaná aktivita se.změří, gama-čltačem.. Sestrojl.se kalibrační křivka a z ni se odečtou koncentrace volného T3 v neznámýčhvžořcEčh. 2. REAGENCIE • Všechny reagencie v soupravě jsou stabilní, do data exápirace, uvedeného na Štítku krabice, jestliže jsou skladovány při 2-8 6C. 2.1 Souprava pro stanovení volného frífôdlyronlnu, 100 zkumavek (Kat, c.1579) 2.1.1 Ligandem potažené zkumavky: 2x 50 kusů (připraveny k použití} 2.1.2 Monoklonální protilátka značená 1ÍSI: 1 lahvička 45 ml; připravena k použití, Lahvička obsahuje ke dni výroby méně než 225 kBq ,!6I značeného imunoglobulinu v roztoku s hovězím sérovým albuminem, azidem sodným (<0,1%, vfz kap. Upozorněni) a barvivem. 2.1.3 Kalibrátory; 5 lahviček po 1 mL; připraveny k použití Lahvičky obsahují volný T3 o koncentracích od O do 44 pM v lidském séru (viz kap. Upozorněni). Přesné koncentrace jsou uvedeny na štítcích lahviček, Hodnoty kailbrálorú byly nastaveny pomocí vnitřního referenčního maleriálu. 2.1.4 Kontrolní vzorek: 1 lahvička po1 mL; připraven k použití. Vzorek obsahuje voíný T3 v lidském séru (vfz kap. Upozornění). Očekávané hodnoty jsou uvedeny na šlílcich lahviček. 2.2 Souprava pro stanovení volného trijodtyroninu, 400 zkumavek {Kat. č.3320) 2.2.1 Ligandem potažené zkumavky: B x 50 kusů (připraveny k použiti) 2.2.2 Monoklonální protilátka značená "sl: 4 lahvičky po 45 mL; připraveno k použili. 2.2.3 Kalibrátory: 5 lahviček po 1 mL; připraveny k použiti 2.2.4 Kontrolní vzorek: 1 lahvička po 1 mL; připraven k použití. Upozorněni: Teplota a data exspirace uvedené na lahvičkách se týkají pouze dlouhodobého skladováni komponent u výrobce, před jejich vložením do soupravy. Neberte na ně tedy, prosím, ohled. 3. ZAŘÍZENÍ A POTŘEBNÝ MATERIÁL Kromě obvyklého laboratorního zařízeni je pro analýzu potřebné následující vybavení: - přesná mlkroplpeta (100 uL) - poloautomatická pipeta (400 |JL) -vibrační michadío - horizonlální třepačka ■ vývěva - gama-Čítač kalibrovaný na í35l 4. UPOZORNĚNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ 4.1 Obecné poznámky: - Nechejte reagencie před pipetaci vytemperovat na lab. teplotu, - Nemíchejle subslance ze souprav různých šarží, - Ke každé řadě stanoveni je třeba vždy stanovit novou kalibrační závislost, - Přesné nastaveni třepačky je důležité reprodukovatetnost stanoveni, - Doporučuje se provádět stanoveni v duplikátech. - Veškerý odpad je třeba likvidovat v souladu s příslušným zákonem. - Zkumavky jsou pouze na jedno použiti. 4.2 Základní pravidla radiační bezpečnosti' Talo souprava obsahuje méně než 225 kBq ,!5I ko dni výroby. Tenlo radioaktivní materiál mohou přijímat, skladovat a používat pouze pracoviště, která splňují platné zákonné předpisy upravující podmínky pro bezpečné nakládání s otevřenými radlonuklídovými zářiči. - Při práci s radioaktivními látkami dodržujte následující pravidla: - všechny radioaktivní látky musí být skladovány v původním baleni a jen na místech k lomu určených, - příjem a spotřeba radioaktivních látek musí být evidována, STANOVENI VOLNÉHO TRIJODTYRONINU SERU A PLAZMĚ ■ práce s radioaktivními látkami musí být prováděny pouze ve vyhrazených prostorách. - pipetován! nesmí být prováděno ústy, - v laboratořích určených k práci s radioaktivními látkami je zakázáno jíst, pit, kouřil, lícit se a pod., • zabraňte pífmému styku radioaktivních látek s pokožkou s používejle ochranných oděvů a rukavic, - po skončen! práce s těmito látkami si vždy umyjte ruce, - obalový materiál, který není kontaminován, je možno odložit do běžného odpadu pouze po odstranění varovných nápisů a značek, - povrch pracovních stolů, který by mohl být kontaminován, je třeba pravidelně kontrolovat, - v případě kontaminace nebo úniku radioaktivního materiálu postupujte podle stanovených předpisů - všechno íaboratornl sklo, které bylo použito pro práci s radioaktivními látkami musí být řádně dekontaminováno a proměřeno před dalším použitím. 4.3 Azid sodný Některé substance jsou konzervovány azidem sodným. Azid sodný může reagovat s olovem, mědí nebo mosazi za vzniku příslušných výbušných azidů. Proto likvidované reagencie splachujte velkým množstvím vody. 4.4 Lidské sérum Materiál lidského původu obsažený v reagenciích této soupravy měl negatívni test na přítomnost protilátek proti viru HIV 1 a 2, viru hepaljfidy C a proti povrchovému antigénu hepatitídy B (HBsAg). Žádná z dostupných metod nemůže dát stoprocentní jistotu neinfekčnosti. Je tedy nutné pracovat s těmito reagenciemi jako s potenciálně infekčními. Se všemi vzorky séra a plazmy musl být manipulováno, jako s potenciálně infekčními (hepatitis, nebo AIDS). Veškerý vzniklý odpad je třeba likvidovat podle platných předpisů. 5. SBÉR A PŘÍPRAVA, SKLADOVÁNÍ A ŘEDĚNÍ VZORKŮ - Odebírejte vzorky krve, pokud možno nalačno, do zkumavek bez adiíiv nebo s EDTA. - Odstředěním oddělte sérum nebo plazmu. - Vzorky séra s plazmy lze uchovávat při 2-8 °C, jestliže bude stanoveni provedeno do 48 hodin. Při delším uchovávání Je nutno vzorky zamrazit při (<-18C), nejlépe v alikvotech, aby se předešlo opakovanému rozmrazován! a zmrazování. 6. POSTUP STANOVENÍ (viz tabulka na další straně) 7. VÝSLEDKY Výsledky jsou získány proložením z kalibrační křivky. Křivka slouží k určení koncentrace volného T3 pouze ve vzorcích měřených současné se kalibrátory. 7,1 Kalibrační křivka Výsledky uvedené v návodu byly vypočteny proložením křivky v serni-logarílmických souřadnicích metodou „splíne". Na vertikálni osu bylo vyneseno B/T(%) nebo B/Ba (%) a na horizonlální osu byly vyneseny koncentrace volného T3 ve kalibrátorech (pM). Jiné metody zpracován! mohou dávat mírně rozdílné výsledky. Celková aktivita: 85959 cpm Kalibrátory Volný T3 Ípq/mL) cpm (n=3) BÍT (%) B/Bo (%) 0 0 82116 , ,95,5 100 1 2,1 68939 '80,2 84,0 ''2 5,1 52225 60,8 63,6 3 10,4 . ■ 34354 40,0 41,8 4 44 8890 10,3 10,8 7,2 (Přiklad typického stanovení, nepoužívejte pro výpočet.) Vzorky Na vertikální ose lokalizujte pro každý vzorek hodnoty BIJ nebo B/B