Zdroj: http://whatcom.wsu.edu/ag/compost/redwormsedit.htm OSNOVA • Princip metody • Testovaný organismus • Substrát • Zkušební podmínky • Zkušební postup • Vyhodnocení • Protokol o zkoušce PRINCIP • Zkoušená látka se přidá do půdy, do které se na 14 dní přidají žížaly • Druh Eisenia foetida • Zjišťujeme LC50 Zdroj: http://en.wikipedia.org/wiki/File:Redwiggler1.jpg PODMÍNKY CHOVU A MNOŽENÍ MODELOVÝCH ORGANISMŮ • Dospělé žížaly druhu Eisenia foetida (preferujeme Eisenia foetida andrei), alespoň 2 měsíce staré, váha 300 – 600 mg (ve vlhkém stavu) • Substrát : 50 % rašeliny a 50 % hovězího (koňského) hnoje, musí být vlhký (ne mokrý) • Vhodné jsou mělké nádoby o objemu 10 – 20 l ZKUŠEBNÍ SUBSTRÁT = Základní substrát + zkoušená látka + deionizovaná voda Zákl. substrát: 10 % sfagnové rašeliny + 20 % kaolinitického jílu + 69 % průmyslového křemenného písku + 1 % chemicky čistého CaCO3 Kontrolní substrát = základní substrát + voda ZKUŠEBNÍ PODMÍNKY • Nádoba asi 1 l s 500 g zkušební půdy (suchý stav) • t = 20 ± 2°C • Intenzita světla 400 – 800 lx • Doba trvání : 14 dní (vyhodnocení i po 7 dnech) ZKUŠEBNÍ POSTUP Orientační zkouška • c = 1000 – 100 – 10 – 1 – 0,1 mg.kg-1 • 10 žížal Hlavní zkouška • Nejméně pět koncentrací, min. čtyři zkušební skupiny na každou (+ 4 kontroly) po 10 žížalách • Úhyn v kontrolách nesmí přesáhnout 10 % ZPRACOVÁNÍ A VYHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ • Koncentrace zkoušené látky a odpovídající podíl mrtvých žížal • Hodnota LC50 [mg.kg-1] • Interval spolehlivosti (p = 0,05) • Vyvolají-li dvě po sobě jdoucí koncentrace lišící se faktorem 1,8 úhyn 0 a 100 %, jsou tyto dvě hodnoty dostatečné pro identifikaci oblasti, ve které se nachází hodnota LC50 . PROTOKOL O ZKOUŠCE I • Prohlášení, že zkouška byla provedena dle standardních pokynů • Provedené zkoušky • Přesný popis zkušebních podmínek, nebo prohlášení, že zkouška byla provedena podle této metody (musí být uvedeny všechny odchylky) PROTOKOL O ZKOUŠCE II • Přesný popis mísení zkoušené látky se substrátem • Informace o zkušebních organismech • Metoda použitá pro stanovení LC50 • Výsledky zkoušky včetně všech použitých údajů • Popis pozorovaných symptomů • Úhyn v kontrolách PROTOKOL O ZKOUŠCE III • Hodnota LC50 nebo nejvyšší zkoušená koncentrace nevyvolávající úhyn a nejnižší zkoušená koncentrace vyvolávající 100 % úhyn 14 dní od začátku zkoušky • Graf závislosti koncentrace / odezva • Výsledky získané s referenční látkou Děkuji za pozornost CITACE Nařízení komise (ES) č. 440/2008. In: Úřední věstník Evropské unie. 2008.