BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie FERTILIZACE A EMBRYOGENÉZE RNDr. Jakub Neradil, Ph.D. Ústav experimentální biologie PřF MU evropská unie ministerstvo školství. MLÁDEŽE A TĚLOVÝCHOVY 0» WdMMnf INVESTICE DO ROZVOJE VZDĚLÁVÁNI Tato prezentace je spolufinancována Evropským sociálním fondem a stálnim rozpočlem České republiky Program přednášky: • meióza a gametogeneze • mechanismy fertilizace • časná embryogeneze • hybridi a chiméry BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 2 Způsoby rozmnožování eukaryot Nepohlavní rozmnožování • potomstvo geneticky identické s rodičovským organismem Pohlavní rozmnožování • původní kombinace genů zanikají a vznikají nové -> každý organismus je geneticky jedinečný • kompetitivní selekční výhoda pro organismy v nepředvídatelně variabilním prostředí BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 3 MEIOZA DIPLOIDIE HAPLOIDIE FUZE GAMET BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. MEIÓZA BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 5 MEIÓZA • dvě po sobě jdoucí dělení: I. meiotické (heterotypickéf redukční) II. meiotické (homeotypickéf ekvační) Geneticky význam meiózy: • redukce počtu chromozomů při tvorbě pohlavních buněk • náhodná segregace chromozomů - v gametách 2n (223 = 8.388.608) možných kombinací chromosomů • párování homologických chromosomů, které umožňuje crossing-over a tím i rekombinaci genů BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 6 BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. Schéma kombinace chromozomů v gametách počet kombinací 2n tri páry homologních chromosomů l-1 mateřské - otcovské duplikace 3 nezávislé uspořádání mateřských a otcovských homologů během meíozy možná gamety BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 8 9 Stádia meiotického dělení • Premeiotická interfáze • Meióza I: profáze I: leptotene zygotene pachytene diplotene diakineze metafáze I, anafáze I, telofáze I • Meióza II: profáze II, metafáze II, anafáze II, telofáze II BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 10 11 Tvorba bivalentů a crossing-over replicated paternal chromosome 1 replicated maternal chromosome 1 BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. Chromatidy v průběhu l.profáze paternal sister chromatids maternal sister chromatids chromatid tv_ chromatid 2 chromatid chromatid 4 INTERPHASE assembling central region of synaptonemal complex y protein axes S (lateral elements) DIPLOTENE FOLLOWED BY DIAKINESIS BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. Synaptonemälni komplex Transverse Transverse filament _ filament SYCP (synaptonemal complex protein ) 1 - 3 Bi8120 Aplikovanä bunecnä biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. Synaptonemälni komplex MEIOSIS NOVIAL CELL DIVISION BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. Poruchy meiózy a jejich genetické důsledky a) Nerovnoměrný crossing-over • v profázi I • důsledek: ztráta (delece) v jedné a zdvojení (duplikace) ve druhé zúčastněné Chromatide 3 4 A B C D E F 2 i 3 4 A B C D E f BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 17 Poruchy meiózy a jejich genetické důsledky b) Neoddělení (nondisjunkce) • chromozomy vanafázi I nebo chromatidy v anafázi II • porucha centromer nebo porucha mitotického aparátu • důsledek: aneuploidie NONDISJUNCTION AI HKST DIVISION f ■•it a •..í'on Second Oiv*ůrt j0—^ „ . ■ NONDISJLNCTION AT SECOND DIVISION n 1 BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 18 GAMETOGENEZE BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 19 f int pcteir bod> < } < t ^ ^ %0 0 00 fecund ptf^r tocl« Porovnäni spermatogeneze a oogeneze Bi8120 Aplikovanä bunecnä biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. GAMETOGENEZE: SPERMATOGENEZE • primordiální zárodečná buňka -> spermatogonie (46, soustavně se mitoticky dělí) • spermatocyt I. řádu (46, probíhá meióza I.) • spermatocyt II. řádu (23, probíhá meióza II.) • spermatida (23, dozrává bez dalšího dělení) • spermie (23, uvolňují se do lumina semenných kanálků) 1 spermatogonie -► -► 4 haploidní rovnocenné spermie BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 21 Seminiferous tubule (cross section) Epididymis Primordial germ cell Spermatogonium (diploid) , Mitotic division Primary spermatocyte (diploid) (in prophase of meiosis I) First meiotic division jCf Secondary spermatocyte (haploid) / \ ^ ^ | Second meiotic division 2 (0 £* Spermatids Spermatids Mil (haploid) Sperm cells aploid) (at two stages of differentiation) Průběh spermatogeneze BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 22 Syncytia v průběhu spermatogeneze • spojení cytoplasmatickými můstky • synchronizované dělení • spermatogonia typu A = kmenové b. • další typy jsou „committed" • vznik spermatocytů- regulace GDNF (glial derived neurotrofic factor), sekrece Sertoliho b. vJ/C = diferenciace ^c= self-renewal clones of human 975J spermatogonia Type Aj spermatogonia Type A3 spermatogonia v—v More type A j "*-or-»-C*J spermatogonia Type AH spermatogonia Intermediate spentifilogonia Type B spermatogonia Pn rnary spermatocytes (1 si meiotk division) *\^fA^i Secondary spermatocytes (2nd meiotic division] Spermatids Residual bodies BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3 Morfologie spermie BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. GAMETOGENEZE: OOGENEZE primordiální zárodečná buňka (46, mitotické dělení) oogonium (46, mitóza, ve 3.měsíci po oplození vývoj v oocyty) x a počet oogonií v ovariu během života E 9 I 1 L V liniím.] p—— 0 3 ó £ .b: Moriths before conception 10 20 30 40 50 Years after birth BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 25 GAMETOGENEZE: OOGENEZE • oocyt I. řádu (46, začne meióza I, zastavení v profázi ještě před narozením, při dozrávání se dělící vřeténko přesunuje k periferii buňky-nerovnoměrné dělení) • oocyt II. řádu (+ pólocyt) (23, vstupuje do meiózy II, zastavení v metafázi II.) • ovum (+ pólocyt) (23, meióza dokončena v případě oplození) 26 Průběh oogeneze Oogenesis (Figuře 42.14) Primordial germ «LS- í Co rpus lu teu m Primary oocyte Ruptured follicle Oogonium (diploid) Primary oocyte Resting state----f---- Secondary I if r-\-) First d i vidian First polar body Primary follicle Ovary M a tu re follicle (b) Secondary oocyte /'—r i second \ meiotic ©\ J division (^^^ Ootid (haploid) 1 oogonium -► 1 zralé vajíčko Ovum (haploid) + 2-3 pólocyty BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 27 Stádia folikulu jednovrstevný Thfica interna Theca, Antrum ■ Late primary k'l li Cit: Figure 5.6 Schematic diagram of stages in rollick1 development. mnohovrstevný Cumulus • ^ oophorus jip Corona r^diiitii Zona "ss pellucid a BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. REGULACE OOGENEZE 1. regulační bod = diplotene meiózy I • dlouhodobé zablokování buněčného cyklu (u člověka až 50 let); u některých živočišných druhů až do fertilizace • dekondenzace chromosomů, počet = 4n • transkripční aktivita -> akumulace materiálu pro časnou embryogenezi, růst oocytu Diplotrnc * Horninu al siinnilatinn róiVípléliúti út Hélfdl51 Met.qphase II atrest BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. REGULACE OOGENEZE 1. regulační bod = diplotene meiózy I • hormonální stimulace (LH) -> Cdkl/cyklin B (MPF = maturation promoting factor) -> kondenzace chromosomů, rozpad jaderné membrány, formování spindlu • pouze částečná deaktivace Cdkl, přetrvávající M-fáze (kondenzovaný chromatin, bez jaderné membrány) • anaphase - promoting complex -> spouští anafázi Hormone «Ii m u 1.11 inn BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 30 REGULACE OOGENEZE 2. regulační bod = metafáze meiózy II • u většiny obratlovců až do fertilizace • po cytokinezi I.meiózy - zvýšení aktivity MPF • anaphase-promoting komplex syntetizován až po fertilizaci (do té doby blokován) mate and femals 2r<í pobr body proructei Cannploton Ěrvtry into Wlcioss II FertíHzatwn Comrdchon Miťogée MitcsiE Imm ati ira °ľ MSKEB I Oľ MSÍOSiS I ^Jte Maturecocyte Diptoid zygote BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. MECHANISMY FERTILIZACE BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. Kapacitace • 5-6 hodin (člověk) • změny lipidů a glykoproteinů plazmatické membrány (ztráta cholesterou -> zvýšení fluidity) • změna membránového potenciálu (efflux K+) • influx Ca+ a HC03~ -> aktivace adenylátcyklázy -> syntéza cAMP -> indukce kapacitace • zvýšení metabolismu a pohyblivosti spermie Kontakt spermie a oocytu • 300 miliónů spermií v ejakulátu -> 200 spermií v místě fertilizace ve vejcovodu • termotaxe, změna teploty až o +2°C • chemoatraktanty uvolňované folikulárními buňkami BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 34 Zona pellucida • extracelulární matrix oocytu (specifické složení) • 3 typy glykoproteinů (ZP2+ZP3, ZP1) • bariéra mezidruhové fertilizace • ZP3 - receptor druhově specifické vazby, na něj se váže GalT (galaktosyl transferáza) spermie 7ona pellucida (A) --£--3 (B) 35 Akrosomální reakce • obsah akrosomu uvolněn exocytózou • vazba na ZP3 - indukuje zvýšení koncentrace Ca2+ v cytoplazmě spermií -> exocytóza • hydrolytické enzymy -> průchod zónou pellucidou • vazba proteinů vnitřní akrozomální membrány spermie na ZP2 Zona pellucida - Egg plasma membrane GalT ZP3 Cortical granule —-O 0 ° ° ° ° 0 (a) Hyaluronidase helps sperm penetrate the matrix o o o o O O (b) Binding of sperm to zona a°Acrosin°°z ■ • o o o o ° o o (c) Acrosome reaction BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. Mechanismus fúze spermie a oocytu • u většiny druhů nejasný • u myši: vazba proteinů ADAM na intergriny oocytu • Fertiliny (a, P) - patří do skupiny ADAM, transmembránové proteiny spermií s vazebnou doménou pro integriny oocytu • CD9 nutný pro fúzi plazmatických membrán (CD9 KO- nefúzuje) • po fúzi exocytóza kortikálních granulí 38 Průběh fertilizace vznik polárního tělíska zmena kone. Ca2+ BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 39 Fúze prvojader • u nižších živočichů ihned po fúzi gamet • u savců pouze prostorové přiblížení prvojader • dekondenzace chromatinu, replikace DNA • přiblížení prvojader pomocí MT z centriolu spermie • rozpad jaderných membrán až při prvním mitotickém dělení zygoty • navázání chromozomů na spindl tvořený z centriolu spermie pronuclei zona'pellucida BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 40 Mechanismy blokující polyspermii • primární blok: depolarizace plazmatické membrány oocytu po fúzi s první spermií • sekundární blok - kortikální reakce oocytu: uvolnění obsahu kortikálních granulí -> enzymy měnící vlastnosti zony pellucidy (štěpení ZP2, hydrolýza cukerných zbytků na ZP3) • intracelulární zvýšení koncentrace Ca2+ (vede k dokončení II. meiotického dělení) Důsledky Polyspermie: více centriolů -> multipolární spindl -> porucha segregace chromosomů -> nondisjunkce -> aneuploidie -> zástava vývoje BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 41 ČASNÁ EMBRYOGENÉZE BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. Časná embryogeneze u obojživelníků: • velmi krátký buněčný cyklus (30 min) • zmenšování objemu dceřinných buněk 43 Časná embryogenéze u obojživelníků: 3 fáze vývoje: rýhování, gastrulace, neurulace celkem 24h 1. a 2. dělení vertikálně, 3. ekvatoriálně 5. dělení = 32 buněk = blastula 12. dělení = ±4000 buněk = midblastula dělení už nejsou synchronizována, zpomalují se Animal pole Uiiqatal pala (aj Nomenclatura ot blattůmor« Unterlihzed e-gg Fartiized egg MidblíBtuli KOM ťíiUS, 7 hůvríl E rif fy gas tru li 120,000 Cf!ls.9 hour*! Lflte g «tr ulil 412 hOiifS) Animal Pigmented Sperm riffmiaprwirť!' conical / entry cytoplasm fllastocoel cavliy Ectoderm Ľfipigm»nt*d hup of blastopore hrlModorm Blastopore BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. Časná embryogeneze u savců: • zygota - 1. dělení po 24h, 2. a 3. po dalších 12h • vznik blastomer • morula - do 32 buněk • blastocysta - od 64 buněk, trofoektoderm (3/4), inner cell mass = ICM (1/4), blastocoel, zona pelucida Pronuclei Zona Polar bodies Polar body (a) Fertilized egg (b} 2 cell* (e) 8 cells (d) Compaction Blastocoel Inner cell mass Trophectoderm (e) Blastocyst BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. Gustav Klimt - Danae (1908) 46 Časná embryogenéze u savců: • diferenciace trofoektodermu a) polární část - přiléhá k ECM, proliferuje b) murální část - kolem blastocoelu, velké polyploidní b. • diferenciace ECM a) epiblast - základ pro 3 zárodečné vrstvy b) hypoblast - extraembryonální tkáň blastocyst • Hatching - opuštění zony pelucidy, v děloze, proteolytické enzymy produkované trofoblastem BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. zona pellucida t r o phobias t 20Ď [im 47 Průběh časné embryogenéze u myši Průběh časné embryogenéze u člověka Skr, CrH of Neuron Pigmcni EpKJenrw ol Bram CA Spann EOS Ectoörfni - T_Germ_J Zygote (External Layer) Blastocyst Olli Endoderm Ci'3'*C Skeletal Tubule Red Blood Smooth Muiťfe Mute») C** Of Cite Mujcwj _Cefa the Kidney_(m Out) I (intemď Layer) | Lung Cell Tnyiwd Cel} Parwreatc Cell Inner tell mass Blastocyst Trophoblast Tvorba a umístění zárodečných listů u lidského embrya ĽMRRYON1C TISSUES Embryonic ectoderm Embryonic epiblast r Epiblast I Hypoblast Amnionic Extraheterozygot • z taxonomického pohledu potomek vzniklý z křížení mezi 2 jedinci odlišného taxonu ■ v rámci druhu (poddruhy)-tygr bengálsky x sibiřský ■ mezi druhy - tygr x lev (Panthera tigris x P. leo) ■ mezi rody - ovce x koza (Ovis x Capra) ■ mezi čeleděmi - výjimečně ■ mezi řády - u živočichů není známo BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. MEZIDRUHOVY HYBRID • křížení v rámci rodu • potomek fenotypově podobný rodičům • často infertilní (různý počet chromosomů) • odlišnosti v námluvních rituálech, páření a chování • jiná sezóna páření • antigenní reakce na spermie BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 54 mul, mezek (63 chr.) osel (62 chr.) x kůň (64 chr.) klisna x osel oslice x hřebec BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. zeedonk, zonkey osel (62 ehr.) x zebra (32- 46 ehr.) liger, tigon lev (38 chr.) x tygr (38 chr.) MEZIRODOVY HYBRID • knzeni odlišných rodu • přirozeně výjimečný výskyt (Toast of Botswana) • možnost (nutnost) asistované inseminace (cama) BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. „Toast of Botswana" (57 ehr.), popsán r.2000 ovce (54 ehr.) x koza (60 ehr.) odliš Geep = chiméra 59 cama velbloud (74 chr.) x lama (74 chr.) CHIMERA řecky Xíuaipa (Chímaira); latinsky Chimaera CHIMÉRA organismus obsahující alespoň 2 geneticky odlišné buněčné populace původem z odlišných zygot Vznik: • ze 4 buněk- dvě zygoty (tetragametická ch.) • ze 3 buněk-(partenogenetická ch.) • transplantací kostní dřeně (přenos kmenových buněk) • spojením cévních oběhů (anastomózy) u dvojvaječných dvojčat • z časného embrya a diploidních buněk (fůzí, injekcí) BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 62 Tetragametický chimerismus • vrozený chimerismus - u lidí výjimečně (běžné u primátů) • spojením dvou zygot (časných embryí) • riziko i při asistované reprodukci • organismus obsahuje dvě odlišné sady chomozomů • orgány a tkáně mají jiný původ • viditelné rozdíly: barva očí, vlasů, „Hitchhiker's thumb,, (AR), Blaschkovy linie, pohlaví může být hermafroditní (46,XX/46,XY), 2 populace krvinek (imunologická tolerance obou skupin) BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 63 Hitchhiker's thumb Blaschkovy linie ^^^^^^^^^^^^^^^^^ IJ BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 ■ -04/13.3. ^335^ 64 Tetragametický chimerismus Partenogenetický chimerismus • oocyt podléhá partenogenezi a rozdělí se • vznik 2 haploidních buněk • oplozeny 2 spermiemi Androgenetický chimerismus • standardní fertilizace oocytu spermií (23,X) • vznik sekundárního polárního tělíska • endoreplikace parentálního prvojádra • vznik 1 diploidní buňky (46,XX) a lhaploidní (23,X) • haploidní buňka podléhá endoreplikaci ->androgenetická linie VYUŽITI CHIMÉR VE VÝZKUMU • studium vývoje savčího embryogenéze • ověření podílu kmenových buněk na vývoji embrya • tvorba „nových druhů • medicínský význam • příprava - agregacne - mjikacne v v BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. 68 e-ntwO-Erntw es wB»w Mouse embryonic chimeras: tools for studying mammalian (I) development Pn trick P. L T.im1 and JaneT Rmsant2 FmhryjiTgy Unit, GhMnens Medical Research rnslilule, University of Sydney, Westmead, New Ftarth Wales, Australia 3Sa'iwl LwrcrifeW Rewsrvli 'rfirtituiü, MuunlS-rw Hus*fl!iJ.TvfVMltf. Qftoiw. Cdirab !sruil' r.Ljirri~cmr .afdaiinu mi mn««Trgrrsliri of donor (human) hepatocytes 11 months after transplantation. A direct correlation was found henunrn hopatoryrtrt afrlvlry and phenotype of transplanted cells, cell dose administered, source of cells used on a cell-per-cell basis [bone marrow, curd blood, mobilised puiiplrcrul uloud), and time after transplantation. Human hepatocytes generated in this model retained functional properties of normal hepatocytes, constituted hepatic functional units wilh the presence of human endothelial and biliary duct cells, and secreted human albumin that was detected in circulation. Transplanting popu- lations of h/tinarn|inlr>iln strtm colls run efficiently generate significant numbers of functional hepatic cells in this noninjury large animal model and thus could be a means of amuliur a tiny 01 cui iuy yuncfic diseases in which a deficiency of liver cells or their products threatens the life of the fetus or newborn. (Blood. 20Q4;1Q4: 2532-2590) § 2004 by The American Society of Hematology Figure 1. Adult human HSCs generate significant numbers of hepatocytes in a noninjury fetal model. (A] Control sheep liver section (nc-ntransplanted) stained wrrh an antibody ant hurran nepatocyte (clone OCH1E5) as described in 'Materials and methods." (B-C] Liver sections obtained at 3 weeks (B)and4morrtbs |C) aftEr transplantation from sheep that received transplanted human BM CD34~Lin~ eel s. stanec wth tie sane ant body showing a higher number of luman hepatocytes in the latter (C |. (D) Liver section obtained at 11 months aftertranapterntatton tot sheep tha: received transplanted CB-deriVedCC34~l_in~ cells, stained wflrianti human hepatocyle antibody. Human hepatocytes in all sections can be identffled by the dark brown coloration. * BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 -04/13.3. Nature Medicine 9, 53 - 60 (2002) Published online: 23 December 2002; | doi: 10.1038/nrnB12 Human and porcine early kidney precursors as a new source for transplantation Benjamin Dekel1, Tatyana Burakova1, Fabian D, Arditti1, Shlomit Reich-Zeliger1, Oren Milstein j Sarit Aviel-Ronen , Gideon Rechavi ' , Nir Friedman , Naftali Kaminski , Justen H, Passwell2 &Yair Reisner1 Náhrada orgánů • prekurzorové ledvinové b. z lidské fetální tkáně • transplantace do myšího embrya • diferenciace ve funkční nefrony a podpůrné tkáně • tvorba miniaturního funkčního orgánu - produkce moči BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. Human mesenchymal stem cells in rodent whole-embryo culture are reprogrammed to contribute to kidney tissues Takashi Yokoo***, Toya Otiashi'5, Iki Song Slien^ Ken Sakurai'5, Yokhi Miyazaki**', Yasunori LrtsinomryaV Masanorl Takaiiaíhí11, Yoihio Ter a da, Yoihikatsu Eto'ä, Tetouya Kawamura", Noriko Osumi11, and Tatsuo Hraoya* Departments of "Internal MedKlne and Sere Therapy and spedlatrlíí., ^Institute of DNA Medicine, Jlkel University School cf Medicine, >2S-e, Nfehl^hlmbastil, Mlnato-kj, Tokyo tÖ5-Ädi 1, Japan; 'ftlvlilon of Developmental Neurosdence, Tohoku University Graduate School of Medicine, selryo-nriacfu Aaba-ltu, sendal 960-6575, Japan: and Department of Homeostasis Medicine and Nephrology, Tokyo Medical and Dental university, 5-45 Yushlrna 1-chonie, Bunkyo-ku, Tokyo 113-6519, Japan Edited by Ertrkl Ruo;ljfrtl, The Bum ham Institute, La Jail a, CA, and approved January 4, «l-1M Develofmemtal BlOlOGY Contribution of human embryonic stem cells to mouse blastocysts Dayton James Scott A. Noggle lomasz Swigut, Ali H. Brivanlou * lubtrakiry 0/Ujasilar hmhirn!iify, Tin KotimfrZer (jWoilp, W Jmnr, JVew tori, MY }M2i, USA Rttidvtal In puhlcaiiun 1 S Jaiuary 3006: KvEdd 13 rdHuay 200S: s_fqjl.jd IA March JMI« AvftiltihL-uiiliiL- I2Jlui^200£ c On 3/4 Merge - G oct3M ft -ŮFP hESC - H Merge - - 2 dny po injekci BÍ8120 Aplikovaná buněčná biologie - jaro 2012 - 04 / 13.3. Generation of Chimeric Rhesus Monkeys Masahito Tachibana,1 Michelle Sparman,1 Cathy Ramsey,1 Hong Ma,1 Hyo-Sang Lee,1 Maria Cecilia T. Penedo,3 and Shoukhrat Mitalipov1'2'* c*ii 148,2b5-295, January 20,2012 • 2012 - první primáti uměle vytvořená chiméra • model: Makak rhesus U