1
Bi8120 A lik á b ěč á bi l i 20 3 2013Bi8120 A lik á b ěč á bi l i 20 3 2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie – 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie – 20.3.2013
Asistovaná reprodukce
ži či hů kl á í
Asistovaná reprodukce
ži či hů kl á íživočichů a klonováníživočichů a klonování
doc. RNDr. Renata Veselská, Ph.D., M.Sc.
Ústav experimentální biologie
doc. RNDr. Renata Veselská, Ph.D., M.Sc.
Ústav experimentální biologie
Přírodovědecká fakulta MUPřírodovědecká fakulta MU
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
2
3
Program přednášky:Program přednášky:
• asistovaná reprodukce u živočichů• asistovaná reprodukce u živočichů
Program přednášky:Program přednášky:
p
přehled a praktické aplikace
kl á í ži či hů
p
přehled a praktické aplikace
kl á í ži či hů• klonování živočichů
partenogeneze
splitting techniky
• klonování živočichů
partenogeneze
splitting technikysplitting techniky
klonování pomocí tvorby chimér
metoda transferu jader (SCNT)
splitting techniky
klonování pomocí tvorby chimér
metoda transferu jader (SCNT)
tvorba cybridůtvorba cybridů
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
4
ASISTOVANÁ REPRODUKCE
U ŽIVOČICHŮ
ASISTOVANÁ REPRODUKCE
U ŽIVOČICHŮU ŽIVOČICHŮU ŽIVOČICHŮ
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
5
Inseminace u hospodářských zvířat:Inseminace u hospodářských zvířat:
• možnost kryokonzervace spermií (40. léta 20.
stol.)
i i li čt h ý h býků
• možnost kryokonzervace spermií (40. léta 20.
stol.)
i i li čt h ý h býků• minimalizace počtu chovných býků
• experimenty s transplantací
• minimalizace počtu chovných býků
• experimenty s transplantací
spermatogonií: umělá
produkce vynikajících
plemeníků
spermatogonií: umělá
produkce vynikajících
plemeníkůplemeníků
• třídění spermií
(uplatnění v cíleném chovu skotu
plemeníků
• třídění spermií
(uplatnění v cíleném chovu skotu(uplatnění v cíleném chovu skotu
na mléko nebo na maso)
úspěšnost ~90%
(uplatnění v cíleném chovu skotu
na mléko nebo na maso)
úspěšnost ~90%
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
úspěšnost ~90%úspěšnost ~90%
6
Asistovaná reprodukce u hospodářských zvířat:Asistovaná reprodukce u hospodářských zvířat:
• hormonální stimulace  superovulace 
inseminace  výplach embryí  transfer embryí
(ET) / kryokonzervace embryí
• hormonální stimulace  superovulace 
inseminace  výplach embryí  transfer embryí
(ET) / kryokonzervace embryí(ET) / kryokonzervace embryí
• úspěšnost: 60-75% po transferu čerstvých embryí
35-45% po kryoembryotransferu
(ET) / kryokonzervace embryí
• úspěšnost: 60-75% po transferu čerstvých embryí
35-45% po kryoembryotransferu35-45% po kryoembryotransferu
Ryuzo Yanagimachi (1998)
35-45% po kryoembryotransferu
Ryuzo Yanagimachi (1998)Ryuzo Yanagimachi (1998)
• experimenty s lyofilizací spermií
• nutnost ICSI
Ryuzo Yanagimachi (1998)
• experimenty s lyofilizací spermií
• nutnost ICSI• nutnost ICSI• nutnost ICSI
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
7
In vitro fertilizace u hospodářských zvířat:In vitro fertilizace u hospodářských zvířat:
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
8
Obchodování s embryi skotuObchodování s embryi skotuy
• rychlé zkvalitnění chovu zvířat (aukce embryí)
• superovulace inseminace výplach embryí
y
• rychlé zkvalitnění chovu zvířat (aukce embryí)
• superovulace inseminace výplach embryí• superovulace , inseminace , výplach embryí
(od 1 krávy 5-6 embryí, max. kolem 20)
• produkce embryí pomocí IVF
• superovulace , inseminace , výplach embryí
(od 1 krávy 5-6 embryí, max. kolem 20)
• produkce embryí pomocí IVFprodukce embryí pomocí IVF
(odběr oocytů z těl krav na jatkách nebo živých
zvířat - opakovaně i během březosti)
produkce embryí pomocí IVF
(odběr oocytů z těl krav na jatkách nebo živých
zvířat - opakovaně i během březosti)
Problémy u ostatních hospodářských zvířat:
• ovce, kozy - neekonomické
Problémy u ostatních hospodářských zvířat:
• ovce, kozy - neekonomickéovce, kozy neekonomické
• prasata - problémy s polyspermií při IVF
• koně nutnost ICSI
ovce, kozy neekonomické
• prasata - problémy s polyspermií při IVF
• koně nutnost ICSI
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
• koně - nutnost ICSI• koně - nutnost ICSI
9
Teruhiko Wakayama aTeruhiko Wakayama ay
Ryuzo Yanagimachi
(1998)
y
Ryuzo Yanagimachi
(1998)
• vytváření funkčních
oocytů transferem
jádra z pólocytu u
• vytváření funkčních
oocytů transferem
jádra z pólocytu ujádra z pólocytu u
myší (úspěšnost
metody 30-57%)
jádra z pólocytu u
myší (úspěšnost
metody 30-57%)
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
10
Snaha získat potomstvo od zvířat v co nejnižším věkuSnaha získat potomstvo od zvířat v co nejnižším věkup j
• hormonální stimulace nedospělých zvířat
(jehničky: 6 týdnů, jalovice: 2-6 měsíců)
p j
• hormonální stimulace nedospělých zvířat
(jehničky: 6 týdnů, jalovice: 2-6 měsíců)(j y ý , j )
• odběr oocytů z nenarozených samičích plodů
John Eppig (Jackson Lab)
(j y ý , j )
• odběr oocytů z nenarozených samičích plodů
John Eppig (Jackson Lab)John Eppig (Jackson Lab)
živé potomstvo z primordiálních
oocytů kompletně kultivovaných in
John Eppig (Jackson Lab)
živé potomstvo z primordiálních
oocytů kompletně kultivovaných iny p ý
vitro
(myšák Egbert)
y p ý
vitro
(myšák Egbert)
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
11
KLONOVÁNÍ ŽIVOČICHŮKLONOVÁNÍ ŽIVOČICHŮKLONOVÁNÍ ŽIVOČICHŮKLONOVÁNÍ ŽIVOČICHŮ
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
12
Metody klonování živočichůMetody klonování živočichůMetody klonování živočichů
• partenogeneze
• splitting techniky
Metody klonování živočichů
• partenogeneze
• splitting techniky• splitting techniky
• tvorba chimér
• přenos jádra somatické buňky
• splitting techniky
• tvorba chimér
• přenos jádra somatické buňky• přenos jádra somatické buňky
(SCNT, Somatic Cell Nucleus Transfer)
• přenos jádra somatické buňky
(SCNT, Somatic Cell Nucleus Transfer)
• vnitrodruhové klonování
• mezidruhové klonování = tvorba cybridů
• vnitrodruhové klonování
• mezidruhové klonování = tvorba cybridůmezidruhové klonování tvorba cybridů
(= cytoplazmatických hybridů)
mezidruhové klonování tvorba cybridů
(= cytoplazmatických hybridů)
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
13
(1) PARTENOGENEZE(1) PARTENOGENEZE(1) PARTENOGENEZE
• přirozeně u bezobratlých (hmyz) i obratlovců
(ještěrky, hadi, ryby, obojživelníci)
(1) PARTENOGENEZE
• přirozeně u bezobratlých (hmyz) i obratlovců
(ještěrky, hadi, ryby, obojživelníci)(ještěrky, hadi, ryby, obojživelníci)
Savci - aktivace partenogeneze in vitro:
• myš (forelimb bud stage) ovce kráva prase králík
(ještěrky, hadi, ryby, obojživelníci)
Savci - aktivace partenogeneze in vitro:
• myš (forelimb bud stage) ovce kráva prase králík• myš (forelimb bud stage), ovce, kráva, prase, králík
(11 dní), opice, primáti (implantační stádium)
• poruchy v regulaci diferenciace (extraembryonální
• myš (forelimb bud stage), ovce, kráva, prase, králík
(11 dní), opice, primáti (implantační stádium)
• poruchy v regulaci diferenciace (extraembryonálníporuchy v regulaci diferenciace (extraembryonální
tkáně a mesoderm) – genetický imprinting
• životaschopné myši (partenoti) – rekonstruovaná
poruchy v regulaci diferenciace (extraembryonální
tkáně a mesoderm) – genetický imprinting
• životaschopné myši (partenoti) – rekonstruovanáo as op yš (pa o ) o s uo a á
embrya ze dvou maternálních genomů
(Kono et al., Nature 428, 860-864, 2004)
o as op yš (pa o ) o s uo a á
embrya ze dvou maternálních genomů
(Kono et al., Nature 428, 860-864, 2004)
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
14
Partenogeneze u člověkaPartenogeneze u člověkag
• spontánně in vivo u některých typů germinálních
tumorů (teratomy ovarií)
g
• spontánně in vivo u některých typů germinálních
tumorů (teratomy ovarií)( y )
• partenogenetický chimerismus u pacientů s
vývojovými nebo sexuálními poruchami
( y )
• partenogenetický chimerismus u pacientů s
vývojovými nebo sexuálními poruchami
• indukovaná partenogeneze in vitro (stádium
blastocysty: 5-6 dní vývoje)
• indukovaná partenogeneze in vitro (stádium
blastocysty: 5-6 dní vývoje)
Cibelli et al., 2001
Advanced Cell Technology
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
15
(2) SPLITTING TECHNIKY(2) SPLITTING TECHNIKY
• rozdělení embrya během časných stádií vývoje
mikromanipulačními technikami
• rozdělení embrya během časných stádií vývoje
mikromanipulačními technikami
• 1892 – Hans Driesch (mořská ježovka)
1902 – Hans Spemann (žába)
• 1892 – Hans Driesch (mořská ježovka)
1902 – Hans Spemann (žába)
• praktické aplikace v chovu skotu (v kombinaci s
dalšími metodami AR)
• praktické aplikace v chovu skotu (v kombinaci s
dalšími metodami AR)
• úspěšnost při dělení na max. 4 části• úspěšnost při dělení na max. 4 části
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
16
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
17
2000 - Gerald Schatten2000 - Gerald Schatten
• klonování makaka splitting technikou
• rozdělení embrya na 4 části:
• klonování makaka splitting technikou
• rozdělení embrya na 4 části:y
1 živé mládě - samička Tetra
y
1 živé mládě - samička Tetra
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
18
(3) KLONOVÁNÍ METODOU TVORBY CHIMÉR(3) KLONOVÁNÍ METODOU TVORBY CHIMÉR
• fúze embryonálních kmenových buněk = ESCs
(somatické buňky) s tetraploidním embryem:
• fúze embryonálních kmenových buněk = ESCs
(somatické buňky) s tetraploidním embryem:
tetraploidní buňky  trofoblast
diplodní ESCs  embryoblast
tetraploidní buňky  trofoblast
diplodní ESCs  embryoblast
• Janet Rossant et al. (PNAS 1993): klony myší• Janet Rossant et al. (PNAS 1993): klony myší
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
19
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
20
(4) PŘENOS JÁDRA SOMATICKÉ BUŇKY (SCNT)(4) PŘENOS JÁDRA SOMATICKÉ BUŇKY (SCNT)
• jádro somatické buňky vneseno do enukleovaného
oocytu:
• jádro somatické buňky vneseno do enukleovaného
oocytu:
a) elektrofúze
b) intracytoplazmatická injekce diploidního jádra
a) elektrofúze
b) intracytoplazmatická injekce diploidního jádra
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
21
tzv. dvojitá metoda klonování
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
tzv. dvojitá metoda klonování
22
• 50. a 60. léta 20.stol.:• 50. a 60. léta 20.stol.:
experimenty na obojživelnících, rybách
• později SCNT embryonální buňky savců
experimenty na obojživelnících, rybách
• později SCNT embryonální buňky savcůp j y y
• Dolly: poprvé SCNT buňky dospělého savce
(Ian Wilmuth et al 1997 Roslin Institute UK)
p j y y
• Dolly: poprvé SCNT buňky dospělého savce
(Ian Wilmuth et al 1997 Roslin Institute UK)(Ian Wilmuth et al. 1997, Roslin Institute, UK)
• dosud metodou SCNT naklonováno 19 druhů savců:
ovce kráva myš koza gaur (tur) prase jelen
(Ian Wilmuth et al. 1997, Roslin Institute, UK)
• dosud metodou SCNT naklonováno 19 druhů savců:
ovce kráva myš koza gaur (tur) prase jelenovce, kráva, myš, koza, gaur (tur), prase, jelen,
muflon, mula, kůň, kočka, králík, potkan, fretka, pes,
bizon, vlk, pyrenejský kozorožec, velbloud
ovce, kráva, myš, koza, gaur (tur), prase, jelen,
muflon, mula, kůň, kočka, králík, potkan, fretka, pes,
bizon, vlk, pyrenejský kozorožec, velbloud, , py j ý ,
• neúspěchy při klonování primátů (poruchy
mitotického aparátu v důsledku enukleace)
, , py j ý ,
• neúspěchy při klonování primátů (poruchy
mitotického aparátu v důsledku enukleace)
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
mitotického aparátu v důsledku enukleace)mitotického aparátu v důsledku enukleace)
23
1952 – SCNT u obojživelníků (žáby)1952 – SCNT u obojživelníků (žáby)
Robert Briggs (A ; 1911-1983)
Thomas J. King (B ; 1921-2000)
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
24
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
25
1970: John Gurdon
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
26
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
27
1984 (1986) – Steen Willadsen
• poprvé klonování ovcí metodou SCNT
1984 (1986) – Steen Willadsen
• poprvé klonování ovcí metodou SCNTpoprvé klonování ovcí metodou SCNT
• jádro z buněk rýhujícího se embrya, enukleovaný
oocyt
poprvé klonování ovcí metodou SCNT
• jádro z buněk rýhujícího se embrya, enukleovaný
oocyt
???
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
28
Dolly
1996 - 2003
Dolly
1996 - 2003
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
29
DollyDolly
B iB iBonnieBonnie
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
30
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
31
1998, Japonsko (Ishikawa):
2 kl á l
1998, Japonsko (Ishikawa):
2 kl á l• 2 klonovaná telata
• "Roslin method", druhé klonování dospělého savce
• 2 klonovaná telata
• "Roslin method", druhé klonování dospělého savce
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
32
1998, USA (Honolulu, Hawai):
• myšák Fibro
1998, USA (Honolulu, Hawai):
• myšák Fibromyšák Fibro
• první samčí klon (fibroblasty ze špičky ocásku
dospělého samce)
myšák Fibro
• první samčí klon (fibroblasty ze špičky ocásku
dospělého samce)
Ryuzo Yanagimachi
Teruhiko Wakayama
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
y
33
2000, USA (Virginia) – PPL Therapeutics:
5 klonovaných selat
2000, USA (Virginia) – PPL Therapeutics:
5 klonovaných selat• 5 klonovaných selat
• modifikovaná metoda (tzv. dvojitá)
• 5 klonovaných selat
• modifikovaná metoda (tzv. dvojitá)
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
34
2001, USA (Texas):
kočka Cc (Copy cat Carbon copy)
2001, USA (Texas):
kočka Cc (Copy cat Carbon copy)• kočka Cc (Copy cat, Carbon copy)
• "Roslin method"
• kočka Cc (Copy cat, Carbon copy)
• "Roslin method"
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
35
2003, USA (University of Idaho):
mula hřebeček Idaho Gem
2003, USA (University of Idaho):
mula hřebeček Idaho Gem• mula – hřebeček Idaho Gem
• fetální fibroblasty muly, enukleované oocyty koně
• mula – hřebeček Idaho Gem
• fetální fibroblasty muly, enukleované oocyty koně
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
36
2005, Korea (Seoul National University):
• štěně SNUPPY (= Seoul National University Puppy)
2005, Korea (Seoul National University):
• štěně SNUPPY (= Seoul National University Puppy)• štěně SNUPPY (= Seoul National University Puppy)• štěně SNUPPY (= Seoul National University Puppy)
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
37
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
38
2008 - první komerční klonování zvířat
• RNL Bio (South Korea) - zaváděcí cena 50 000 USD
2008 - první komerční klonování zvířat
• RNL Bio (South Korea) - zaváděcí cena 50 000 USD( )
• pitbull Booger → 5 klonovaných štěňat
( )
• pitbull Booger → 5 klonovaných štěňat
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
39
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
40
2008 – myš klonovaná z buňky mrtvé myši, která
byla zamražena 16 let při teplotě -20oC
2008 – myš klonovaná z buňky mrtvé myši, která
byla zamražena 16 let při teplotě -20oCbyla zamražena 16 let při teplotě 20 C
• Wakayama et al. 2008, PNAS
• metoda: ntESCs + tetraploidní embryo
byla zamražena 16 let při teplotě 20 C
• Wakayama et al. 2008, PNAS
• metoda: ntESCs + tetraploidní embryo
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
metoda: ntESCs + tetraploidní embryometoda: ntESCs + tetraploidní embryo
41
2009, Spojené arabské emiráty:2009, Spojené arabské emiráty:
• velbloudice Injaz• velbloudice Injaz
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
42
2009, Jižní Korea: Ruppy (Ruby Puppy)2009, Jižní Korea: Ruppy (Ruby Puppy)
První klonovaný transgenní pes na světě:
• příprava transgenní linie psích fibroblastů (gen
První klonovaný transgenní pes na světě:
• příprava transgenní linie psích fibroblastů (genp p g p (g
pro RFP z mořské sasanky)
• reprodukční klonování s využitím této linie (SCNT)
p p g p (g
pro RFP z mořské sasanky)
• reprodukční klonování s využitím této linie (SCNT)
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
43
2009, Jižní Korea:
š ě ě
2009, Jižní Korea:
š ě ě• štěně Ruppy (Ruby Puppy)• štěně Ruppy (Ruby Puppy)
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
44
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
45
J G Ki MK L BCJang G, Kim MK, Lee BC:
Current status and applications of somatic cell nuclear
transfer in dogs.g
Theriogenology 74: 1311-1320, 2010
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
46
Březen 2013: Sériové "reklonování" myšiBřezen 2013: Sériové "reklonování" myši
Wakayama et al.:Cell Stem Cell 12, 293-297, 2013
• ve 25 generacích celkem 598 klonovaných myší
Wakayama et al.:Cell Stem Cell 12, 293-297, 2013
• ve 25 generacích celkem 598 klonovaných myšíg ý y
• stejná efektivita klonování s využitím inhibitoru
histonových deacetyláz (TSA)
g ý y
• stejná efektivita klonování s využitím inhibitoru
histonových deacetyláz (TSA)
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
47
Klonování metodou tvorby cybridů
Cybrid (cytoplazmatický hybrid)
• organismus / embryo vznikající vnesením jádrag / y j j
somatické buňky jednoho živočišného druhu do
enukleovaného oocytu jiného druhu (SCNT)
• 2000 muflon (→ ovce) gaur (→ kráva)• 2000 – muflon (→ ovce), gaur (→ kráva)
září 2007: v UK povoleno experimentování s cybridyzáří 2007: v UK povoleno experimentování s cybridy
• vkládání jádra lidské somatické buňky do zvířecího
enukleovaného oocytu (kráva, králík)
í• cílem izolace hESCs
• cybridy budou udržovány max. 14 dní in vitro
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
48
Postup při tvorbě cybridůPostup při tvorbě cybridů
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
49
Klonování metodou tvorby cybridů
• plejtvák sejval (Balaenoptera borealis) → prase
• krysa → prasey p
• makak → kráva
• šimpanz → kráva
• panda červená (Ailurus fulgens) → králík
• člověk → kráva králík koza
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013
• člověk → kráva, králík, koza
50
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 5 / 20.3.2013