Elektromigrační metody



Historie elektromigračních metod
u1975  O´Farrell
u2D-elektroforéza
u
u1976 Everaerts, Mikkers
uisotachoforéza
u
u2003 Karger
uMultikapilární CE – lidský genom

Podstata
u
u
u„Pohyb elektricky nabitých částic
uv elektrickém poli“

Teoretické aspekty elektromigračních metod



Mobilita



E = intenzita elektrického pole [V/m]
Q = náboj částice = zi ´ e []
Elektrická síla Fe
Frikční  síla Ff
v = rychlost částice
f(frikční koeficient) = 6p.h.r

 [m-2 V-1 s-1]
Ustálený stav
mobilita

Podle druhé

Iontová mobilita
(limitní zředění, teplota 298 K)
KATIONTY
|m0|.109
ANIONTY
|m0|.109
H3O+
Li+
Na+
K+
Tris+
b-alanin
ethanolamin
imidazol
362.5
40.1
51.9
76.2
29.5
36.7
44.3
52.0
OH-
F-
Cl-
NO3-
SO4-
k.mléčná
k.octová
MES
205.5
57.4
79.1
74.1
82.9
36.5
42.4
28.0

Izotachoforéza
u
u„Vzorek je umístěn mezi dva elektrolyty : vedoucí L (leading) s nejvyšší mobilitou a - uzavírající
T (terminating) s nejmenší mobilitou“

Izotachoforéza
T
A+B
L
T
A+B
L
Světlý svislý
B
Světlý vodorovný
A
Světlý svislý
B
T
AB
L
A
Světlý svislý
B
T
L
A
Světlý svislý
B
T
AB
L
A
t0
t1
t2
t3
+
+
+
-
-
-

Izotachoforéza



Izotachoforéza
I
v
m
E
L
B
A
T
mL > mA > mB > mT

Kohlrauschova regulační funkce



Analytická ITP
+ -
Dávkování
Detekce
Zapisovač
Napájení

Analytická ITP
instrumentace
uNapájení - stejnosměrné 3 kV 0,2 – 0,5 mA
uKapilára 0,1 – 2 mm
uDávkování - dávkovací ventil
uDetekce - universální – konduktometrická
u         – potencialně
u                                     gradientová
u    - selektivní – UV-VIS

Analytická ITP
Metoda spojování kapilár
Předseparační kapilára – 2 mm
Analytická kapilára – 0.1 mm

Analytická ITP
Villa Labeco


Izotachoforetický záznam
kvantita
A
T
L
B

Izotachoforetický záznam
kvalita
A
T
L
B

Preparativní ITP
V gelech - Sephadex
+
-

Preparativní ITP
-
L
A+B
T
A
B
+
Kontinuální plošná