Jméno:
Datum:

Téma 07:           Izolace stonkových axilárních meristémů


Izolace meristémů se provádějí především při ozdravování rostlin od virových infekcí, protože
koncentrace virů v rychle rostoucích pletivech je nižší než v diferencovaných orgánech. Kultury
izolovaných meristémů pak lze navíc podrobit termoterapii. Dalším možným využitím izolovaných
meristémů je mikropropagace.

Materiál: in vitro kultura tyrolského hvozdíku Dianthus sp.


Médium:

Kontrola: MS základní soli, vitamíny B5, sacharóza 20 g.l^-1, agar 8 g.l^-1, pH 5,5

F1 médium: : MS základní soli, vitamíny B5, sacharóza 20 g.l^-1, agar 8 g.l^-1, pH 5,5 s přídavkem
auxinu a cytokininu (NAA, BAP)

Pomůcky: preparační mikroskop, …


Postup práce:

1.    Kultivační nádoby s kulturami hvozdíku přeneseme z kultivační místnosti do laminárního boxu.

2.    Připravíme si kultivační nádoby s čerstvým médiem a ostatní pomůcky.

3.    Opatrně ožíháme okraj kultivační nádoby a otevřeme ji.

4.    Sterilní pinzetou vyjmeme prýty na sterilní Petriho misku.

5.    Oddělené apikální části prýtů s 2 nody vsadíme do čerstvého média (udržovací kultura).

6.    Opatrně ožíháme okraj kultivační nádoby a uzavřeme ji kovovým uzávěrem s ventilací a
popíšeme.

7.    Bazální část prýtu použijeme pro izolaci axilárních meristémů. Rozdělíme si jej na
jednonodální segmenty. Listy odtrhneme tahem směrem shora dolů a v jejich úžlabí najdeme axilární
meristém, který odpreparujeme dvěma řezy vedenými kolem meristému abaxiálně a adaxiálně.Všimněte si
velikostí axilárních meristémů na stonku.

8.    Izolovaný meristém inokulujeme do MS nebo 1F média.

9.    Zapíšeme datum a číslo kultury.

10.Kultivujeme v kultivační místnosti na světle (bílé zářivky, fotoperioda 16/8, PAR 30 – 80
μmol.m^-2.sec^-1) při 22ºC.


Hodnocení

V následujících týdnech kontrolujeme čistotu kultur a vývoj izolovaných meristémů. Pokud použijeme
médium s přídavkem cytokininu a auxinu, lze odvodit kulturu mnohonásobných prýtů.

Popište o jaký druh regeneračního procesu se jedná.


Literatura:

Crouch N.R. and van Staden J. (1993): In vitro culture of Dianthus zeyheri subsp. natalensis, a
South African carnation. - Plant Cell, Tiss. Org. Cult. 35:81-85.

Kováč J. (1992): Explantátové kultury rostlin. – Skriptum Pedagogická fakulta UJEP, Ústí nad Labem.

Kováč J. (1992): The use of micropropagation in the protection of genofond of Dianthus arenarius
subsp. bohemicus. - Biol. Plant. 34 (Suppl.):543.

Kozai T., Kubota C. & Watanabe I. (1988): Effects of basal medium composition on the growth of
carnation plantlets in auto and mixotrophic tissue culture. - Acta Hortic. 230:159-166.

Murashige T. & Skoog F. (1962): A revised medium for rapid growth and bio-assays with tobacco
tissue cultures. - Physiol Plant. 15:473-497.

Pierik R.L.M. (1987): Vegetative propagation. – In: Chap. 20, In Vitro Culture of Higher Plants.
Martinus Nijhoff Publishers, 183-230.