1
Lékařsky asistovaná reprodukceLékařsky asistovaná reprodukce
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie – 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie – 23.3.2015
prof. RNDr. Renata Veselská, Ph.D., M.Sc.
Ústav experimentální biologie
Přírodovědecká fakulta MU
prof. RNDr. Renata Veselská, Ph.D., M.Sc.
Ústav experimentální biologie
Přírodovědecká fakulta MU
2
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
22
3
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
33
• neplodnost a její příčiny
• lékařsky asistovaná reprodukce
historický vývoj
základní rozdělení a přehled metod
IVF a její modifikace
• in vitro fertilizace
historický vývoj
standardní průběh a modifikace IVF
• klonování člověka
klonování pro výzkumné účely / terapeutické klonování
reprodukční klonování
• příprava umělých gamet
• neplodnost a její příčiny
• lékařsky asistovaná reprodukce
historický vývoj
základní rozdělení a přehled metod
IVF a její modifikace
• in vitro fertilizace
historický vývoj
standardní průběh a modifikace IVF
• klonování člověka
klonování pro výzkumné účely / terapeutické klonování
reprodukční klonování
• příprava umělých gamet
Program přednášky:Program přednášky:
4
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
44
NEPLODNOST A JEJÍ PŘÍČINYNEPLODNOST A JEJÍ PŘÍČINY
5
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
55
NEPLODNOST:
• snížená nebo chybějící schopnost zplodit potomka
(NE kompletní neschopnost mít děti, NE sterilita)
• po uplynutí 1 roku při nechráněném pravidelném
styku nedošlo k otěhotnění
• celosvětové statistiky WHO:
5 - 15 % párů:
neschopnost počít dítě
10 - 25 % párů:
neschopnost počít druhé nebo další dítě
(tzv. sekundární infertilita)
NEPLODNOST:
• snížená nebo chybějící schopnost zplodit potomka
(NE kompletní neschopnost mít děti, NE sterilita)
• po uplynutí 1 roku při nechráněném pravidelném
styku nedošlo k otěhotnění
• celosvětové statistiky WHO:
5 - 15 % párů:
neschopnost počít dítě
10 - 25 % párů:
neschopnost počít druhé nebo další dítě
(tzv. sekundární infertilita)
6
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
66
Kategorie neplodnosti dle WHO
Primární neplodnost
= naprostá absence početí i přes pravidelný
nechráněný pohlavní styk po dobu jednoho roku
Sekundární neplodnost
= i přes pravidelný nechráněný pohlavní styk po dobu
jednoho roku nedošlo k žádnému novému početí poté,
co v minulosti k oplodnění došlo
Pravidelné spontánní potraty / kojenecká úmrtnost
= úmrtnost živě narozených dětí před dosažením
pátého roku života
"Neobjasněná neplodnost"
= absence početí způsobená faktory jako laktace,
antikoncepce, snížená sexuální aktivita nebo
z neznámých příčin
Kategorie neplodnosti dle WHO
Primární neplodnost
= naprostá absence početí i přes pravidelný
nechráněný pohlavní styk po dobu jednoho roku
Sekundární neplodnost
= i přes pravidelný nechráněný pohlavní styk po dobu
jednoho roku nedošlo k žádnému novému početí poté,
co v minulosti k oplodnění došlo
Pravidelné spontánní potraty / kojenecká úmrtnost
= úmrtnost živě narozených dětí před dosažením
pátého roku života
"Neobjasněná neplodnost"
= absence početí způsobená faktory jako laktace,
antikoncepce, snížená sexuální aktivita nebo
z neznámých příčin
7
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
77
Příčiny neplodnosti:Příčiny neplodnosti:
8
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
88
Příčiny neplodnosti:
• ženská neplodnost
poškození vejcovodů, hormonální poruchy (
produkce oocytů), vrozené vývojové vady dělohy,
endometrióza, genetické či imunologické faktory
neplodnosti (rejekce spermatu), problémy s nidací
• mužská neplodnost
nízká kvalita spermatu, autoimunitní problémy,
aktuální zdravotní stav, urogenitální infekce,
poškození chámovodů, koitální problémy
• další příčiny neplodnosti
vyšší věk při početí, stres, užívání drog a léků,
kuřáctví, alkoholismus, vliv životního prostředí
Příčiny neplodnosti:
• ženská neplodnost
poškození vejcovodů, hormonální poruchy (
produkce oocytů), vrozené vývojové vady dělohy,
endometrióza, genetické či imunologické faktory
neplodnosti (rejekce spermatu), problémy s nidací
• mužská neplodnost
nízká kvalita spermatu, autoimunitní problémy,
aktuální zdravotní stav, urogenitální infekce,
poškození chámovodů, koitální problémy
• další příčiny neplodnosti
vyšší věk při početí, stres, užívání drog a léků,
kuřáctví, alkoholismus, vliv životního prostředí
9
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
99
Posun věkových kategorií u žen (1983-2003):Posun věkových kategorií u žen (1983-2003):
10
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
1010
Pravděpodobnost
početí a neplodnosti
u žen dle věkových
kategorií:
Pravděpodobnost
početí a neplodnosti
u žen dle věkových
kategorií:
11
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
1111
Základní vyšetření při neplodnosti:
• Základní gynekologické vyšetření
rodinná, osobní a gynekologická anamnéza, křivka
bazálních teplot, mikroabrase endometria,
mikrobiální obraz poševní, onkologická cytologie,
kolposkopie, případně rentgenové vyšetření dělohy
• Specializované vyšetření
laboratorní hormonální screening, vaginální
ultrazvuk, vyšetření spermiogramu, případně
komplexní diagnostická laparoskopie a
hysteroskopie, genetické, imunologické či
urologické vyšetření
Základní vyšetření při neplodnosti:
• Základní gynekologické vyšetření
rodinná, osobní a gynekologická anamnéza, křivka
bazálních teplot, mikroabrase endometria,
mikrobiální obraz poševní, onkologická cytologie,
kolposkopie, případně rentgenové vyšetření dělohy
• Specializované vyšetření
laboratorní hormonální screening, vaginální
ultrazvuk, vyšetření spermiogramu, případně
komplexní diagnostická laparoskopie a
hysteroskopie, genetické, imunologické či
urologické vyšetření
12
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
1212
13
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
1313
LÉKAŘSKY ASISTOVANÁ
REPRODUKCE
LÉKAŘSKY ASISTOVANÁ
REPRODUKCE
14
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
1414
• chirurgické zákroky
• farmakoteparie (např. hormonální léčba)
• umělé oplodnění (artificial insemination, AI)
oplodnění v organismu ženy
• oplodnění ve zkumavce (in vitro fertilization, IVF)
oplodnění mimo organismus ženy
• chirurgické zákroky
• farmakoteparie (např. hormonální léčba)
• umělé oplodnění (artificial insemination, AI)
oplodnění v organismu ženy
• oplodnění ve zkumavce (in vitro fertilization, IVF)
oplodnění mimo organismus ženy
ASISTOVANÁ REPRODUKCE
= jakýkoli medicínský zásah, který napomáhá
lidskému rozmnožování
ASISTOVANÁ REPRODUKCE
= jakýkoli medicínský zásah, který napomáhá
lidskému rozmnožování
15
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
1515
• umělé oplodnění (artificial insemination, AI)
IUI, GIFT
• oplodnění ve zkumavce (in vitro fertilization, IVF)
IVF-ET , IVF-KET , ZIFT
AH
MESA , TESE
PZD, SUZI
ICSI , ROSNI
• umělé oplodnění (artificial insemination, AI)
IUI, GIFT
• oplodnění ve zkumavce (in vitro fertilization, IVF)
IVF-ET , IVF-KET , ZIFT
AH
MESA , TESE
PZD, SUZI
ICSI , ROSNI
Asistovaná reprodukce (AR)
zahrnující manipulace s gametami, příp. s embryi:
Asistovaná reprodukce (AR)
zahrnující manipulace s gametami, příp. s embryi:
16
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
1616
AR homologní, heterologní:
• umělé oplodnění (AI)
intrauterinní inseminace (IUI)
intrafallopiánní transfer gamet (GIFT)
• in vitro fertilizace (IVF)
chirurgický odběr spermií z nadvarlete (MESA)
nebo varlete (TESE)
subzonální inzerce spermií (SUZI)
parciální disekce zony pellucidy (PZD)
injekce kulatého jádra spermatidy (ROSNI)
intracytoplazmatická injekce spermií (ICSI)
přenos embryí po rozmražení (KET)
intrafallopiánní transfer zygoty (ZIFT)
asistovaný hatching (AH)
AR homologní, heterologní:
• umělé oplodnění (AI)
intrauterinní inseminace (IUI)
intrafallopiánní transfer gamet (GIFT)
• in vitro fertilizace (IVF)
chirurgický odběr spermií z nadvarlete (MESA)
nebo varlete (TESE)
subzonální inzerce spermií (SUZI)
parciální disekce zony pellucidy (PZD)
injekce kulatého jádra spermatidy (ROSNI)
intracytoplazmatická injekce spermií (ICSI)
přenos embryí po rozmražení (KET)
intrafallopiánní transfer zygoty (ZIFT)
asistovaný hatching (AH)
17
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
1717
Intrauterinní inseminace (IUI)Intrauterinní inseminace (IUI)
18
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
1818
Intrafallopiánní transfer gamet (GIFT)Intrafallopiánní transfer gamet (GIFT)
19
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
1919
20
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
2020
Historický vývoj metod umělého oplodnění - IUI:
• experimenty probíhaly převážně v utajení (zásahy do
reprodukce byly považovány za ostudné a nepřirozené)
• 1790 – Londýn (1866 – New York):
první provedení homologní IUI
• 1884 – Philadelphia:
první provedení heterologní IUI (zveřejněno 1909)
• 1953:
první úspěšná IUI s využitím kryokonzervovaného
spermatu
Historický vývoj metod umělého oplodnění - IUI:
• experimenty probíhaly převážně v utajení (zásahy do
reprodukce byly považovány za ostudné a nepřirozené)
• 1790 – Londýn (1866 – New York):
první provedení homologní IUI
• 1884 – Philadelphia:
první provedení heterologní IUI (zveřejněno 1909)
• 1953:
první úspěšná IUI s využitím kryokonzervovaného
spermatu
21
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
2121
IN VITRO FERTILIZACE (IVF)IN VITRO FERTILIZACE (IVF)
22
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
2222
Historický vývoj metod IVF:
• 1944 – první provedení IVF s lidskými gametami
• 1978 – narození prvního dítěte počatého metodou IVF
• 1982 – první dvojčata po IVF
• 1983 – narozeno první dítě po zamražení embrya
• 1985 – první případ náhradního mateřství
• 1988 – poprvé provedena preimplantační genetická
diagnostika
• 1990 – poprvé použita metoda ICSI
• 1997 – první dítě ze zamraženého oocytu
Historický vývoj metod IVF:
• 1944 – první provedení IVF s lidskými gametami
• 1978 – narození prvního dítěte počatého metodou IVF
• 1982 – první dvojčata po IVF
• 1983 – narozeno první dítě po zamražení embrya
• 1985 – první případ náhradního mateřství
• 1988 – poprvé provedena preimplantační genetická
diagnostika
• 1990 – poprvé použita metoda ICSI
• 1997 – první dítě ze zamraženého oocytu
23
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
2323
1978 - Louise Brown (Velká Británie)1978 - Louise Brown (Velká Británie)
Československo: 1982 - GIFT
1983 - IVF
Československo: 1982 - GIFT
1983 - IVF
24
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
2424
2010 – Nobelova cena za fyziologii a lékařství:
• Sir Robert G. Edwards
"for the development of in vitro fertilization"
2010 – Nobelova cena za fyziologii a lékařství:
• Sir Robert G. Edwards
"for the development of in vitro fertilization"
25
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
2525
Nárůst výkonů IVF v letech 1985-1998:Nárůst výkonů IVF v letech 1985-1998:
26
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
2626
Základní schéma IVFZákladní schéma IVF
27
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
2727
Příklad protokolu hormonální stimulacePříklad protokolu hormonální stimulace
28
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
2828
Odběr oocytů po hyperovulaciOdběr oocytů po hyperovulaci
29
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
2929
Prodloužená kultivace embryí
(5 dní)
Prodloužená kultivace embryí
(5 dní)
IVF / ICSI
ET
IVF / ICSI
ET
30
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
3030
Asistovaný hatching (AH)
• metody narušení ZP (>15μm):
mechanicky (mikrojehla)
chemicky (enzymy)
laser
31
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
3131
Asistovaný hatching (AH)Asistovaný hatching (AH)
32
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
3232
Indikace k AH:
• věk pacientky nad 35 let
• opakované nedosažení těhotenství po transferu
kvalitních embryí
• zvýšená hodnota FSH u pacientky
• zjištění silnějšího obalu embrya
• na žádost pacientky
Indikace k AH:
• věk pacientky nad 35 let
• opakované nedosažení těhotenství po transferu
kvalitních embryí
• zvýšená hodnota FSH u pacientky
• zjištění silnějšího obalu embrya
• na žádost pacientky
33
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
3333
Intracytoplazmatická injekce spermií (ICSI)Intracytoplazmatická injekce spermií (ICSI)
34
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
3434
Indikace k ICSI:
• selhání oplození vajíček v předchozích cyklech
• nízká koncentrace a pohyblivost spermií
• získání spermií chirurgickým odběrem z varlete nebo
nadvarlete (= MESA/TESE)
• potřeba provedení preimplantační genetické
diagnostiky (PGD)
• na žádost pacientky
Indikace k ICSI:
• selhání oplození vajíček v předchozích cyklech
• nízká koncentrace a pohyblivost spermií
• získání spermií chirurgickým odběrem z varlete nebo
nadvarlete (= MESA/TESE)
• potřeba provedení preimplantační genetické
diagnostiky (PGD)
• na žádost pacientky
35
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
3535
Metody pro léčbu poruch pohyblivosti spermiíMetody pro léčbu poruch pohyblivosti spermií
mikromanipulační metodymikromanipulační metody
36
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
3636
Transfer embryí = ET (příp. KET)Transfer embryí = ET (příp. KET)
37
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
3737
Preimplantační genetická diagnostika
(PGD, PID)
Preimplantační genetická diagnostika
(PGD, PID)
Metody:
• biopsie
(blastomer, blastocysty, polárního tělíska)
• genetické testy
• eliminace embryí se specifikovanou vadou
PID se provádí obvykle v kombinaci s ICSI
Metody:
• biopsie
(blastomer, blastocysty, polárního tělíska)
• genetické testy
• eliminace embryí se specifikovanou vadou
PID se provádí obvykle v kombinaci s ICSI
38
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
3838
Biopsie pólocytu pro účely PIDBiopsie pólocytu pro účely PID
39
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
3939
40
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
4040
Indikace k PID:
• vrozená chromozomální aberace u některého z rodičů
• vyšší věk ženy, nebo obou rodičů
• porod dítěte s vrozenou vývojovou vadou v rodině
• opakované spontánní potraty nejasné etiologie
• opakovaná zástava vývoje embryí na prodloužené
kultivaci
• cytogenetika: 13, 18, 21, X, Y
• molekulární genetika: dle indikace / diagnózy
• celogenomová analýza
Indikace k PID:
• vrozená chromozomální aberace u některého z rodičů
• vyšší věk ženy, nebo obou rodičů
• porod dítěte s vrozenou vývojovou vadou v rodině
• opakované spontánní potraty nejasné etiologie
• opakovaná zástava vývoje embryí na prodloužené
kultivaci
• cytogenetika: 13, 18, 21, X, Y
• molekulární genetika: dle indikace / diagnózy
• celogenomová analýza
41
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
4141
Rizika spojená s IVF:
Pro ženu:
• ovariální hyperstimulační syndrom (OHSS), vícečetné
gravidity
• torze vaječníků, mimoděložní gravidita, preeklampsie,
SC, psychické problémy
• dlouhodobé riziko nádorových onemocnění ???
Pro dítě:
• předčasný porod – (extrémně) nízká porodní váha
• riziko nádorových onemocnění ???
Rizika spojená s IVF:
Pro ženu:
• ovariální hyperstimulační syndrom (OHSS), vícečetné
gravidity
• torze vaječníků, mimoděložní gravidita, preeklampsie,
SC, psychické problémy
• dlouhodobé riziko nádorových onemocnění ???
Pro dítě:
• předčasný porod – (extrémně) nízká porodní váha
• riziko nádorových onemocnění ???
42
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
4242
43
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
4343
44
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
4444
45
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
4545
KLONOVÁNÍ ČLOVĚKAKLONOVÁNÍ ČLOVĚKA
46
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
4646
Reprodukční klonování (Reproductive Cloning):
• přenos embrya, vzniklého metodou SCNT, do
dělohy ženy, následné těhotenství a narození
dítěte
Terapeutické klonování (Research Cloning):
• embryo, vzniklé metodou SCNT, udržováno v
podmínkách in vitro
• výzkum (genetická kontrola diferenciace)
• izolace ESCs a indukovaná diferenciace (buněčná
terapie bez problémů s imunokompatibilitou)
Tvorba cybridů
Reprodukční klonování (Reproductive Cloning):
• přenos embrya, vzniklého metodou SCNT, do
dělohy ženy, následné těhotenství a narození
dítěte
Terapeutické klonování (Research Cloning):
• embryo, vzniklé metodou SCNT, udržováno v
podmínkách in vitro
• výzkum (genetická kontrola diferenciace)
• izolace ESCs a indukovaná diferenciace (buněčná
terapie bez problémů s imunokompatibilitou)
Tvorba cybridů
Klonování člověkaKlonování člověka
47
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
4747
2001:
Cibelli et al. (Advanced Cell Technology)
• 19 rekonstruovaných embryí metodou SCNT:
3 embrya schopna buněčného dělení (max. 6
buněk)
• 22 oocytů aktivováno partenogeneticky:
6 embryí se dělilo až do stádia blastocysty
2001:
Cibelli et al. (Advanced Cell Technology)
• 19 rekonstruovaných embryí metodou SCNT:
3 embrya schopna buněčného dělení (max. 6
buněk)
• 22 oocytů aktivováno partenogeneticky:
6 embryí se dělilo až do stádia blastocysty
48
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
4848
49
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
4949
Hwang WS et al.:
Evidence of a pluripotent human embryonic stem
cell line derived from a cloned blastocyst.
Science 303, 1669-1674, 2004
Hwang WS et al.:
Evidence of a pluripotent human embryonic stem
cell line derived from a cloned blastocyst.
Science 303, 1669-1674, 2004
• ES morfologie, normální karyotyp
• embryonální markery
• schopnost diferenciace in vitro
• 70 pasáží in vitro
• ES morfologie, normální karyotyp
• embryonální markery
• schopnost diferenciace in vitro
• 70 pasáží in vitro
Hwang WS et al.:
Patient-specific embryonic stem cells derived
from human SCNT blastocyst.
Science 308, 1777-1783, 2005
Hwang WS et al.:
Patient-specific embryonic stem cells derived
from human SCNT blastocyst.
Science 308, 1777-1783, 2005
50
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
5050
51
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
5151
52
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
5252
53
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
5353
54
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
5454
2005 - terapeutické klonování člověka povoleno
ve Velké Británii (pro výzkumné účely)
2006 - první úspěšné provedení SCNT na lidských
buňkách (UK)
2008 - "hybridní" embryo (cybrid): enukleovaný oocyt
živočišného původu, jádro lidské somatické
buňky)
2003: Čína
2005 - terapeutické klonování člověka povoleno
ve Velké Británii (pro výzkumné účely)
2006 - první úspěšné provedení SCNT na lidských
buňkách (UK)
2008 - "hybridní" embryo (cybrid): enukleovaný oocyt
živočišného původu, jádro lidské somatické
buňky)
2003: Čína
55
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
5555
??? 2006 - Zavos and Illmense:
• 3 "rekonstruovaná" lidská embrya (SCNT), z toho
1 se vyvíjelo do 4buněčného stádia
• následná implantace do dělohy příjemkyni –
gravidita se nepotvrdila
??? 2006 - Zavos and Illmense:
• 3 "rekonstruovaná" lidská embrya (SCNT), z toho
1 se vyvíjelo do 4buněčného stádia
• následná implantace do dělohy příjemkyni –
gravidita se nepotvrdila
http://www.zavos.org/library/UAAN_A_150346.pdf
56
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
5656
57
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
5757
PŘÍPRAVA UMĚLÝCH GAMETPŘÍPRAVA UMĚLÝCH GAMET
58
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
5858
2007 - Universities of Göttingen and Münster
Medical School of Hannover
• "umělá spermie": spermatogonium připravené
transdiferenciací buněk kostní dřeně následná
diferenciace do fenotypu spermií
• neověřeno!
2007 - Universities of Göttingen and Münster
Medical School of Hannover
• "umělá spermie": spermatogonium připravené
transdiferenciací buněk kostní dřeně následná
diferenciace do fenotypu spermií
• neověřeno!
59
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
5959
2009 - Karim Nayernia
• "umělá spermie"
• neplodný muž → jádro somatické buňky →
SCNT → blastocysta → odběr hESCs →
diferenciace do fenotypu spermií
2009 - Karim Nayernia
• "umělá spermie"
• neplodný muž → jádro somatické buňky →
SCNT → blastocysta → odběr hESCs →
diferenciace do fenotypu spermií
60
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
6060
61
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
6161
2015 – "three parent babies"
• britská vláda schválila návrh umožňující
vytváření embryí z DNA 3 lidí
2015 – "three parent babies"
• britská vláda schválila návrh umožňující
vytváření embryí z DNA 3 lidí
62
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
6262
63
Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015Bi8120 Aplikovaná buněčná biologie / 06 / 23.3.2015
6363