C6200-Biochemické metody
08D_zákalové metody
Petr Zbořil

Speciální metody
•
•Turbidimetrie
•Nefelometrie
•Reflexní fotometrie

Rozptyl světla
•Rozptyl – koloidní roztoky, suspense (Tyndallův efekt)
–lom a odraz na částicích
–λ se nemění, ale ovlivňuje intensitu rozptylu
–světlo se polarizuje
•Prošlé světlo se zeslabí jak absorpcí (nemusí být žádná), tak rozptylem (Σ Eo = Σ Ep + Σ Er + Σ
Ea)
•
•Ir = f (ν4) Rayleigh
•
•modré se rozptyluje víc – bílé světlo mění barvu
•

Turbidimetrie
•Turbidimetrie – měření prošlého světla
•
• turbidance T = log (I0/I) = k . c . l . d3 / (d4 + α. λ4)
•
•k – povaha částic, způsob měření, d – průměr částic, α – závisí na metodě
•
•Obdoba L-B zákona (parametry konstantní)
–odchylka k ose c, není-li monochromatické světlo
•
•Měření spektrofotometry
–vysoká citlivost, obtížná reprodukovatelnost
•

Nefelometrie
•Nefelometrie – měření rozptýleného světla
–jednoduché
–složité provedení (určování velikosti a tvaru částic)
•
•Měření
–nefelometrický nástavec k fotometru, světlo se sleduje pod úhlem 90°
–speciální přístroje - nefelometry – automatická měření
•

Nefelometrie
•Konvenční nefelometry
–zdrojem halogenová žárovka nebo xenonová výbojku
–interferenční filtr
–detektor je nastaven pod úhlem 70 až 90° (stupeň směrovosti světla z konvenčního zdroje je nízký)

•Laserový nefelometr
–zdrojem je helium-neonový laseru
–monochromatické světlo mimořádně intenzivní a má vysoký stupeň směrovosti
–detektor nastaven pod úhlem 5 až 35°
•Nefelometry mohou měřit také rychlost změny rozptylu světla - kinetiku, která je přímo úměrná
rychlosti vzniku imunokomplexu antigen-protilátka.
•
•

Schema přístroje
•Turbidimetr a nefelometr
nefelometry

Reflexní fotometrie
•Měření odraženého světla
•Reflektance
–R = Io/Id
–Závisí na n, k(absorpce), Q, polarizaci
•Denzitometry
–Žárovka s filtrem, LED
–Vyduté zrcadlo – soustředění paprsků na detektor
•Využití
–Semikvantitativní analýza
–Vyhodnocení neprůhledných matric (elfo, papír)
–Reakce suché chemie
•

Reflexní denzitometr
•Přístroj na vyhodnocení proužků – analýza moči
•Využití
–urobilinogen
–bilirubin
–ketolátky
–krev
–bílkovina
–nitrity
–leukocyty
–glukóza
–specifická hmotnost
–pH
–kyselina askorbová - pouze proužky URISTIK H11
–mikroalbumin - pouze proužky URISTIK H11-MA