http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Monogenní nemoci •mendelistická dědičnost • •dědičný podklad - velký faktor, tj. je přítomen prakticky u všech nemocných a jedná se prokazatelně o faktor příčinný (např. defekty v dystrofinovém genu u muskulárních dystrofií), k němuž se přidávají jen jako přídatné další faktory genetické i faktory zevního prostředí •příčinou těchto nemocí bývají především tzv. vzácné alely • oje determinována alelami v jednom lokusu ovariantní alela, která vznikla mutací někdy v nedávné nebo vzdálené minulosti a je většinou relativně málo častá, nahrazuje původní „divokou“ alelu na jednom nebo obou chromozomech omají charakteristický způsob přenosu v rodinách • • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Monogenní nemoci •choroby dětského věku •méně než 10 % z nich se manifestuje po pubertě a pouhé 1 % se objeví po skončení reprodukčního věku •často výrazně patologické • •v populační studii na 1 milionu živě narozených dětí byla incidence vážných monogenních chorob odhadnuta na 0,36 %, u 6-8% hospitalizovaných dětí se uvažuje o monogenních chorobách •doposud známé shrnuje OMIM (On-line Mendelian Inheritance in Man) –~ 6000 klinicky významných fenotypů • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Monogenní nemoci –Základní typy dědičnosti: – dominantní recesivní autozomální autozomálně dominantní (AD) autozomálně recesivní (AR) X-vázaný X-dominantní (XD) X-recesivní (XR) http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Monogenní nemoci •Typy přenosu •autozomální - geny na obou autozomech aktivní • •gonozomální (X-chromozom vázané) omuži hemizygotní ou žen 1 X-chromozom inaktivován!! • •jiné oimprinting = aktivita určitého genu regulována v závislosti na tom, od kt. rodiče byl gen zděděn omozaicizmus = přítomnost dvou (nebo více) buněčných linií s různým karyotypem, pocházejících z jedné zygoty • – http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Monogenní nemoci •Podle projevu genotypu ve fenotypu • •recesivní - nemoc jen u mutovaného homozygota • •dominantní - nemoc stejná u heterozygota a mutovaného homozygota • •neúplně dominantní - odstupňovaná tíže nemoci u heterozygota a mutovaného homozygota • •kodominantní - jak normální tak patologická alela jsou vyjádřeny ve fenotypu – http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Monogenní nemoci - AD •nemoci jsou důsledkem jak mutací přenášených mezi generacemi tak vzniklých nově •nemoc se projevuje v každé generaci - postižený jedinec má postiženého rodiče (a prarodiče), a to matku nebo otce •riziko pro potomka 0,50 (pokud by byli oba rodiče postižení pak 0,75, ale to je vzácné) • •familiární hypercholesterolemie (1/500), •myotonická svalová dystrofie (1/1000) •Huntingtonova chorea (1/3000) • • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Huntingtonova chorea •fatální neurologické onemocnění s nástupem v dospělosti, projevující se jako demence s extrapyramidovou poruchou motoriky •v genu pro huntingtin je repetitivní sekvence (CAG)n, která kóduje úsek bílkoviny tvořený zbytky glutaminu (polyglutaminový úsek, polyglutamine tract) •za normálních okolností mají lidé méně než 20 trinukleotidů CAG a tedy i glutaminů v huntingtinu, kde tyto tvoří důležitou doménu pro interakce s jinými proteiny •pokud se však mutací toto množství zvětší nad 30 glutaminů, protein nepracuje správně s výsledným progresivním odumíráním neuronů v nucleus caudatus • •choroby Cross section of a brain showing undulating tissues with gaps between them, there are two large gaps evenly spaced about the centre http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Huntingtonova choroba •trinukleotidová expanze • • • • • • • ancestral mutant DNA …TAC-GTC-… …TAC-(GTC-GTC-GTC)20-GTC-… mRNA …-AUG-CAG-… …-AUG-(CAG-CAG-CAG)20-CAG-… AA …-met-gln-… …-met-(gln-gln-gln)20-gln-… 1190134872 http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg http://img.photobucket.com/albums/v223/Liz-ONBC/House%20of%20Earth/huntington-diagram-1_zpsc86efee4 .png Genetická uniformita –Science.1983 Jul 29;221(4609):459-62. –The cheetah is depauperate in genetic variation. –O´Brien SJ, Wildt DE, Goldman D, Merril CR, Bush M. •A sample of 55 South African cheetahs (Acinonyx jubatus jubatus) from two geographically isolated populations in South Africa were found to be genetically monomorphic at each of 47 allozyme (allelic isozyme) loci. Two-dimensional gel electrophoresis of 155 abundant soluble proteins from cheetah fibroblasts also revealed a low frequency of polymorphism (average heterozygosity, 0.013). Both estimates are dramatically lower than levels of variation reported in other cats and mammals in general. The extreme monomorphism may be a consequence of a demographic contraction of the cheetah (a population bottleneck) in association with a reduced rate of increase in the recent natural history of this endangered species. • http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/2/28/Tamed_Cheetah_Ancient_Egypt.jpg/180px-Tame d_Cheetah_Ancient_Egypt.jpg http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/1/15/Cheetah_Feb09_02.jpg/250px-Cheetah_Feb09_0 2.jpg Monogenní nemoci - AR •u heterozygotů s 1 mutovanou alelou stačí produkt k udržení normální funkce • •velmi často enzymové defekty • •postižen je mutovaný homozygot (popř. sourozenci), heterozygotní rodiče jsou přenašeči (asymptomatičtí) - riziko 0,50 ´ 0,50 = 0,25 •frekvence přenašečů nemoci v populaci >>> frekvence nemocných • •nejčastější AR nemocí u bělochů je cystická fibróza (f nemocných 1/2000, f přenašečů 1/22) • •konsanguinita (příbuzní rodiče) a geneticky izolované populace (např. Aškenazi židé – Tay-Sachsova choroba ) – • • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Monogenní nemoci - AR •manifestní onemocnění u heterozygota je důsledkem: ohaploinsuficience - pro normální funkci je potřeba >50 % aktivního genového produktu • odominantě negativního efektu - syntéza abnormálního proteinu, který “soutěží” s normálním a ovlivňuje fenotyp • ozesílení funkce (“gain-of-function”) - mutací je posílena přirozená vlastnost proteinu • oztráty heterozygotnosti (loss-of-heterozigosity, LOH) v somatické buňce - např. familiární predispozice k nádorům v důsledku mutací v supresorových genech (např. retinoblastom) • • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Cystická fibróza •v zakavkazské populaci s incidencí 1: 3000 živě narozených dětí a frekvencí přenašečů 1:25 •onemocnění multiorgánové, zasahuje různé orgány, plíce, pankreas, trávící trakt, reprodukční orgány •více než 30 mutací, které způsobují toto onemocnění • •Důvody k vyšetření jsou: •podezření na klinické onemocnění •příbuzenský vztah rodičů •opakované potraty •léčená neplodnost • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg http://4.bp.blogspot.com/-iB3efyIUVRg/TzbCWpWB8rI/AAAAAAAALoc/j0_OqLlKvi4/s1600/cleutus+and+brandin e+the+simpsons+hillbilly+parody.png Cystická fibróza •základní fyziologický defekt při tomto onemocnění je porucha v transportu iontů chlóru, sodíku a vody přes apikální membránu specializovaných epiteliálních buněk, který je regulován chloridovým kanálem (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein = CFTR) http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg http://www.epgonline.org/images/tobi/cf-1.jpg Cystická fibróza http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg http://www.jci.org/articles/view/37778/files/JCI0837778.f1/medium Cystická fibróza •deleční mutací genu produkujícího protein CFTR (chloridový ABC transportér na buň. membráně) → nefunkční protein •delece 3 bp v pozici 1652 až 1655 v exonu 10 (delece phe v kodonu 508) • ancestral mutant DNA -TAG-AAA-CCA- -TAA-CCA- mRNA -AUC-UUU-GGU- -AUU-GGU- AA -ile-phe-gly- -ile-gly- http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Metody léčby •Symptomatická •substituční terapie - dodání proteinu, který je v daném organismu defektní nebo zcela chybí (př. enzymopatie hemofilie - dodání faktoru VIII) • •karenční terapie - vyloučení nebo omezení složky potravy, která v důsledku defektu enzymu není odbourávaná (př. fenylketonurie - potrava bez phe) • •Kauzální •genová terapie - náhrada mutovaného, nefunkčního genu standardními, funkčními geny http://www.ck12.org/flx/render/perma/resource/default/image/user%3Ack12editor/24adf535d7d77cc411ec1 96d84495214.jpg Genová terapie •zahrnuje všechny postupy, které využívají přenosu genetického materiálu do buněk pacienta k léčebným účelům • •metodologie GT je uplatnitelná tam, kde je známa molekulární podstata nemoci • •vzhledem k tomu, že poznatků o patogenezi chorobných stavů na molekulární úrovni přibývá, rozšiřuje se i okruh indikací pro GT • •v nejbližších letech změní zásadním způsobem léčbu mnoha lidských nemocí • http://www.ck12.org/flx/render/perma/resource/default/image/user%3Ack12editor/24adf535d7d77cc411ec1 96d84495214.jpg http://biomed.brown.edu/Courses/BI108/BI108_2004_Groups/Group10/gene.therapy.jpg Genová terapie •Využití při léčbě •vrozených chorob – korekce abnormality (nemoci monogenní i polygenní) •i získaných chorob - jakákoliv manipulace s DNA, která příznivě ovlivní průběh nemoci (zhoubné nádory, léčba kardiovaskulárních a metabolických chorob, degenerativních nervových onemocnění, AIDS, v transplantační medicína) • •Principy •nahrazení nefčního genu fčním (homologní rekombinace) •oprava nefčního genu (cílené mutace) •přenesení nového genu (terapeutický gen) http://www.ck12.org/flx/render/perma/resource/default/image/user%3Ack12editor/24adf535d7d77cc411ec1 96d84495214.jpg Genová terapie •Co je třeba znát před začátkem genové terapie? •kompletní informace o defektním genu - umístění, mechanizmus patologického účinku • •znalost přesné sekvence zdravého genu • •volba vhodného vektoru, vytipování cílových buněk • •souhlas pacienta http://www.ck12.org/flx/render/perma/resource/default/image/user%3Ack12editor/24adf535d7d77cc411ec1 96d84495214.jpg Genová terapie •opravu, vložení, vyřazení genu lze provádět in vivo, in vitro a nejč. ex vivo • •odběr bb. z pacienta -> kultivace in vitro -> modifikace DNA -> selekce -> proliferace selektovaných bb. -> přenos zpět do pacienta • •geny lze do genomu začlenit v časné embryogenezi (léčba v zárodečné linii) • •gen může být začleněn pouze do somatických bb., které jsou nejvíce poškozené (v tomto případě se geneticky opravená DNA nepředává následujícím generacím potomků) http://www.ck12.org/flx/render/perma/resource/default/image/user%3Ack12editor/24adf535d7d77cc411ec1 96d84495214.jpg http://3.bp.blogspot.com/-X16wEVksqL8/UXVbszD79LI/AAAAAAAAAAo/AyjyOr70VH4/s1600/how+it+works-gene+t herapy.gif http://www.ck12.org/flx/render/perma/resource/default/image/user%3Ack12editor/24adf535d7d77cc411ec1 96d84495214.jpg Genová terapie •Postup při genové terapii •vytvoření genetické informace určené pro transport do buněk •vytipování cílových buněk •vpravení vektoru (vektory = nosiče pro vpravení genetické informace do cílových buněk) • •Vlastnosti ideálního vektoru •průnik do velkého počtu cílových buněk •přenos genu v transkripčně aktivním stavu •netoxický pro cílové buňky • •plazmidy, virové částice http://www.ck12.org/flx/render/perma/resource/default/image/user%3Ack12editor/24adf535d7d77cc411ec1 96d84495214.jpg Genová terapie •Virové vektory •interakce s receptory na povrchu cílových buněk •vybavení regulačními elementy zajišťujícími účinnou expresi transgenů •integrace transgenu do buněčného genomu • •náročnější příprava (mimo jiné se musí se zbavit všech virových genů, aby nebyly infekční) •malý rozměr částic •vyšší biologická rizika (hrozí nebezpečí rekombinace a vzniku viru schopných replikace) •nejčastěji používané virové vektory – retroviry (dělící se bb.), adenoviry (začlení se i do nedělících se bb.), poxviry, adeno-asociované viry (AAV) a herpetické viry http://www.ck12.org/flx/render/perma/resource/default/image/user%3Ack12editor/24adf535d7d77cc411ec1 96d84495214.jpg Genová terapie •Monogenně podmíněná onemocnění teoreticky vhodná pro genovou terapii •Parkinsonova choroba (gen pro dopamin -> do bb. subst. nigra) •cystická fibróza (gen CFTR -> epitel v plicích, pankreatu aj.) •fenylketonurie (gen pro phenylalanin hydroxylázu - > hepatocyty) •hemofilie A, B (gen pro faktor VIII a IX -> hepatocyty) •Duchennova svalová dystrofie (gen pro dystrophin -> svaly) •α-,β-talasemie (gen pro α-,β-globin -> ery) •srpkovitá anémie (gen pro β-globin -> ery) • http://www.ck12.org/flx/render/perma/resource/default/image/user%3Ack12editor/24adf535d7d77cc411ec1 96d84495214.jpg Genová terapie •Cystická fibróza •genová terapie v prenatálním období • http://www.ck12.org/flx/render/perma/resource/default/image/user%3Ack12editor/24adf535d7d77cc411ec1 96d84495214.jpg http://genetics.thetech.org/sites/default/files/GeneTherapyCF.gif Monogenní nemoci - X-vázané •ženy 3 genotypy, muži pouze 2 • •X-vázané nemoci se manifestují u všech mužů, kteří zdědili mutaci, a pouze u homozygotních žen • •hemofilie A •Duchenneova muskulární dystrofie •Wiskott-Aldrichův syndrom (imunodeficience) http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Duchennova svalová dystrofie •„frameshift“ mutace = posun čtecího rámce v genu pro protein dystrofin • • ancestral mutant DNA -CAC-TGT -CAC-TTG-T..- mRNA -GUG-ACA- -GUG-AAC-A..- AA -val-thr- -val-asn- http://ap-biology-lab.wikispaces.com/file/view/byr10494_fm-1.gif/200083672/byr10494_fm-1.gif http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Duchennova svalová dystrofie http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Fig 1 full size Komplexní nemoci •multifaktoriální, multigenní •roli hrají kombinace určitých genů a určitých faktorů zevního prostředí •v klinické praxi často kolísá názor na výsledky genetických studií, které se snaží odhalit genetický podklad komplexních nemocí, od neodůvodněného očekávání nad nalezenými geny velkého účinku až po velkou skepsi vzhledem k existenci genetického podkladu v populaci četných nemocí ( nad 1 %), jako je v kardiologii např. esenciální hypertenze •pokud choroba má prokazatelně familiární výskyt, musíme očekávat podíl genetického podkladu na její manifestaci •své genetické pozadí mají i tak relativně vzdálené proximální fenotypy, jako je např. kvalita života u nemocných s chronickým kardiovaskulárním onemocněním • • Každá choroba má nějaké genetické pozadí, jehož podíl na manifestaci dané choroby je různý. • • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Komplexní nemoci •neúplná penetrance patologického fenotypu ou určité části osob, přestože zdědí nevýhodný genotyp (zde ve smyslu souboru vícero genů) se patologický fenotyp nerozvine •existence fenokopií opatologický fenotyp může být přítomen u lidí, kteří nejsou nosiči zmíněného genotypu •genetickou heterogenitou (lokusovou a alelickou) oklinický obraz není specifický, ale může se rozvinout v důsledku záměn v genech ležících na různých lokusech (= lokusová heterogenita), v jednotlivých genech může být přitom vícero mutací či polymorfizmů (= alelická heterogenita) •polygenní dědičností opredispozice k rozvoji patologického fenotypu se zvyšuje pouze při simultánním výskytu určitého souboru alel •vysokou populační frekvencí alel zodpovědných za rozvoj patologického fenotypu okaždá jednotlivá predisponující alela pravděpodobně není sama o sobě výrazně patogenní •spolupůsobením dalších mechanizmů přenosu omitochondriální dědičnost, imprinting http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Komplexní choroby •choroby, na jejichž vzniku a progresi se podílí „komplex“ genetických, epigenetických a vnějších faktorů ofenotyp nevykazuje klasickou mendelistickou dominantní či recesivní dědičnost jako důsledek změn v jediném lokusu (tzv. jednolokusových) •predisponující “geny” zvyšují pravděpodobnost onemocnění, ale nedeterminuje jednoznačně jeho přítomnost oje nutné spolupůsobení negenetických faktorů (prostředí) = dieta, fyzická aktivita, kouření, …. a interakcí genů mezi sebou •nejčastější komplexní nemoci odiabetes (1. i 2. typu) odyslipidémie oesenciální hypertenze oalergie Complex Diseases http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Komplexní nemoci •Obezita – Hypotéza typu „thrifty genotype“ •V současné populaci jsou selektovány alely, které favorizují přírůstek váhy a skladování tuků, aby byl zajištěn dostatek živin pro častá období nedostatku potravy. •Při konstantně vysoké nabídce potravy a poklesu fyzické aktivity tato predispozice vede k pandemii obezity v rozvinutých zemích. http://www.harcovka.cz/ckfinder/userfiles/images/hubnuti/pl%C3%AD%C5%BEiv%C3%A1-obezita.jpg http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Genetické studie •Základní debata nad genetickým podkladem nemocí logicky začíná od strategie výběru tzv. kandidátních genů. Tato otázka je podstatně jednodušší u mendelisticky děděných nemocí, kde se změněná funkce jednoho genu snadněji identifikuje. • •Celogenomové asociační studie (GWAS = Genome-Wide Association Study) vyhledávají polymorfizmus jednotlivých nukleotidů nebo běžné genové variace, které se typicky chovají jako ukazatelé genových oblastí s malým efektem u stoupajícího rizika nemocí. • •Dalším významným momentem je výběr statistické metodologie, která zhodnotí sílu asociace genů s chorobami. Možnosti jsou v zásadě dvě: linkage (vazebná) analýza a asociační studie. K detekci specifických genetických oblastí a genů, které se účastní v transmisi nemoci, je v principu možné použít obě metody. http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Genetické studie •Kandidátní geny •s intermediálním fenotypem •s klinickou manifestací nemoci •s klinickou závažností nemoci •s odpovídavostí nemoci na léčbu • • •Linkage (vazebná) analýza •testuje kosegregaci genového markeru a fenotypu nemoci v rodině •marker a nemoc se v dané rodině mají vždy vyskytovat spolu • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Genetické studie • Asociační studie •vyšetřují souvýskyt markeru a nemoci na populační úrovni, tj. u nepříbuzných jedinců, obvykle srovnáním frekvencí markerů u nepříbuzných nemocných a kontrolních subjektů (studie case-control) • •statistickou sílu asociace je možno dále zvýšit obohacením o další kritéria, jako např.: oklinické subtypy nemoci (studie case-case) ozávažnost nemoci očasný začátek nemoci orizikové faktory pro nemoc včetně pohlaví ovhodné biologické znaky (např. plasmatické hladiny cytokinů při asociaci genetických polymorfizmů v cytokinových genech; studie genotyp-fenotyp). http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Klinická genetika •zabývá se diagnostikou, léčením a prevencí genetických nemocí • •genetické poradenství •vrozené vady - poruchy utváření orgánů, které vznikly v období nitroděložního života, i poruchy funkční (např. duševní opoždění) a poruchy na úrovni biochemické a molekulární (např. vrozené vady metabolizmu) • • • • Skupina Příčina Zastoupení Primárně (geneticky) chromozomální aberace 10 % monogenní dědičnost 20 % Sekundárně (prostředí) léky, infekce, záření 5 % porodní poranění 12 % infekce po narození 7 % Neznámé (multifaktoriální) geny + prostředí 46 % http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Klinická genetika •Prenatální diagnostika •zahrnuje vyšetřovací postupy směřující k vyhledávání statisticky významné odchylky ve struktuře nebo funkci, která přesahuje hranice fenotypové variability •umožňuje v závažných případech ukončení gravidity, u dalších je možno v předstihu plánovat optimální perinatální péči • •Rizikové faktory: •věk matky v době porodu je vyšší jak 35 let nebo součet věku rodičů nad 70 let •pozitivní biochemický screening z krve matky •ultrazvukový nález, který zvyšuje riziko přítomnosti chromozomální aberace (nahromadění tekutiny v podkoží, nepřítomnost nosní kůstky, srdeční vada plodu aj.) •přítomnost chromozomální aberace v rodině • • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Klinická genetika •Vyšetření karyotypu plodu •invazivní metody - amniocentéza, biopsie choriových klků, kordocentéza •cytogenetické vyšetření - karyotypizace •FISH – fluoresceční hybridizace in situ ovazba denaturované sDNA se specifickou sondou •AmnioPCR – genetické vyšetření plodu oporovnání DNA markerů matky i plodu → stanovení počtu jednotlivých chromozomů u plodu ovýsledek je následně potvrzen klasickým cytogenetickým vyšetřením ok dispozici je v současné době vyšetření 21. chromozomu - amnioPCR, nebo sada vyšetřující chromozomy 13, 18, 21, X a Y - tzv. multiamnioPCR. • • • http://www.mojebrisko.cz/wp-content/uploads/2011/10/odber-plodove-vody.jpg http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Klinická genetika •Stanovení pohlaví plodu •volné fetální DNA kolující v krvi matky •neinvazivní s přesností ~98 % •od 10. týdne těhotenství •DNA plodu z venózní krve matky •z klinického hlediska je určení pohlaví plodu důležité v případě rizika nějaké genetické choroby vázané na určité pohlaví (např. hemofilie) • •Preimplantační diagnostika •metodu časné prenatální diagnostiky, která je vázána na techniky umělého oplodnění, za účelem minimalizace chyby genetického vyšetření je třeba k oplozování vajíček použít metody intracytoplazmatické injekce spermie •buňky pro genetické vyšetření jsou odebírány z embrya nejčastěji ve stadiu 8 buněk nebo blastocysty • •Postnatální diagnostika •např. trombofilie, viz přednáška č.8, • celiakie, cystická fibróza… http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg DNA fingerprinting DNAfingerprintfamily http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Lidský genom http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg http://40.media.tumblr.com/tumblr_lthsroonOi1r3zvpuo1_1280.jpg Lidský genom http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Theoretical migration map for anatomically modern humans (AMH) http://evolution.berkeley.edu/evolibrary/images/news/mitochondrialdna.gif Klinická genetika •Celiakie •celoživotní autoimunitní onemocnění způsobené nesnášenlivostí lepku (glutenu) • •lepek mění povrch sliznice tenkého střeva, mizí zde mikroklky a klky, povrch tenkého střeva snižuje, s tím se zmenšuje jeho schopnost trávení a vstřebávání živin • •příznaky: průjem, plynatost, křeče, pokles hmotnosti nebo únava, anémie z nedostatku železa, zvracení, snížená chuť k jídlu, osteoporóza, zvýšená kazivost zubů, bolesti kloubů, deprese • •od dětství, nebo později - po zátěži (nemoc, těhotenství) • •bezlepková dieta • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Celiakie http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg http://bnljceliacdisease.files.wordpress.com/2010/11/celiac-disease.jpg http://gastro.ucla.edu/images/newsletters/Celiac2.jpg Celiakie •Diagnostika •stanovení autoprotilátek k tkáňové transglutamináze v krevním séru •při pozitivním výsledku je indikována biopsie sliznice dvanáctníku u nemocného, který konzumuje stravu s obsahem lepku • •Cílený screening •pro osoby s rizikovými chorobami •s podezřelými nebo nespecifickými symptomy •s autoimunními chorobami asociovanými s celiakií (T1DM…) •u příbuzných jedinců s celiakií • • GHC GENETICS 1600Kč • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Celiakie •AD s neúplnou penetrancí •Genetické vyšetření predispozičních HLA alel II. třídy kódujících oheterodimer DQ2 (DQA1*0501/DQB1*0201 nebo DQA1*02:01/DQB1*02:02) oa heterodimer DQ8 (DQA1*0301/DQB1*0302) •Heterodimer HLA-DQ2 se vyskytuje asi u 95 % pacientů s celiakií (jen ve 20 % u kontrolních osob) •Riziko pro jednotlivce spojené s přítomností heterodimeru HLA-DQ2 je 50× zvýšeno oproti průměrnému riziku v populaci. •Menšina pacientů, kteří jsou HLA-DQ2 negativní, bývají pozitivní na HLA-DQ8, často ještě ve spojení s alelou HLA-DRB1*04. •Genetické vyšetření má vysokou negativní prediktivní hodnotu, nepřítomnost predispozičních alel DQ2/DQ8 téměř s jistotou (99%) vylučuje diagnózu celiakie. •Oproti sérologickému vyšetření protilátek vykazuje menší výskyt falešně negativních výsledků, zejména u dětí mladších 2 let a u pacientů na bezlepkové dietě. http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Farmakogenetika •zabývá se hledáním vztahu mezi metabolizmem, případně efektivitou léčiva a přítomností polymorfizmů genů, které se na absorbci, distribuci, metabolismu, eliminaci podílejí •procesy spojené se vstřebáváním léků •jejich vazbou na proteiny •distribucí v organismu •přenosem přes buněčnou membránu •interakce s buněčnými receptory •biotransformace i vylučování z organismu • •pro určení, který dostupný lék bude mít u konkrétního pacienta největší terapeutický benefit, zatímco nežádoucí účinky budou minimální •volba nejefektivnější a nejbezpečnější způsobu léčby • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Farmakogenomika •zkoumá vztah účinku léku na úrovni celého genomu, resp. transkriptomu •screening známých genových polymozfismů •účelná farmakoterapie, minimální nežádoucí účinky • •identifikace a genetické určení tzv. „drug targets“ (cílových struktur léčiva) •stanovení genetických polymorfizmů, které mohou tyto cílové struktury pozměňovat i polymorfismů asociovaných s rozvojem choroby a lékovou odpovědí •vývoj účinnějšího léčiva s menším počtem nežádoucích účinků • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Farmakogenetika a genomika •Kandidátní geny •enzymy lékového metabolismu •membránové transportní přenašeče •receptorové proteiny •proteiny iontových kanálů • • • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg leky Farmakogenetika •Mendelistická dědičnost •deficience glukózo-6-fosfatázy (favismus) - GR - hemolytický sy po podání analgetik, sulfonamidů, antimalarik, antibakt. léků, vit. K, chininu. Země s endemickou malárií. •deficience glutathion reduktázy - AD - spojení s glukózo-6-fosfatázou hemolytická anémie po podání fenylbutazonu a léků jako při favismu •hemoglobinopatie se zvýšenou citlivostí k lékům u lidí s nestabilními typy hemoglobinu: Hb-Zürich, Hb-Torino při podání léků s oxidačními vlastnostmi - jako při favismu http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Farmakogenetika •Mendelistická dědičnost •polymorfizmus acetyltransferázy - AR – inaktivace léků v játrech - pomalí inaktivátoři x rychlí inaktivátoři – INH, sulfamethazin, prokainamid, hydralazin – periferní neuropathie - prevence: pyridoxin •↑ nitrooční tenze po apl. glukokortikoidů - AR - 50 % bělochů - 100x vyšší riziko glaukomu u reces. homozygotů - enzymatický defekt není znám •deficience methemoglobion-reduktázy - AR - odbourávání methemoglobinu po podání léků, které jej zvyšují - methemoglobinémie s cyanózou stejné léky jako u favismu •atypická pseudocholinesteráza - AR - přecitlivělost na suxamethonium - protrahovaná apnoe po myorelaxans antidotum - čerstvá plasma nebo čistý enzym http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Farmakogenetika •Mendelistická dědičnost •maligní hypertermie - AD oporucha Ca mtb svalové b. ohypertemie až 44,4˚C po inhal. narkotikách – halothan, éther, methoxyfluran, suxamethonium otachykardie, hypoxie, hyperkalémie, acidóza – antidotum: prokain, Dandrolen (myorelax.) o •rezistence na kumarin - AD orezistence na p.o. antikoagulancia oodchylný typ receptorů v jaterních buňkách ozvýšená afinita k vit. K http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Farmakogenetika •Protinádorová terapie •Azathioprin •je antimetabolit purinových bází, který se používá při léčbě HEMONK onemocnění u dětí, k terapii AI onemocnění nebo střevních zánětů u pacientů rezistentních k jiné léčbě •pro odbourávání je zásadní enzym thiopurinmethyltransferáza (TPMT) •u evropského obyvatelstva je TPMT polymorfní, s výskytem přibližně 11 % jedinců, kteří mají jednu funkčně deficitní alelu v genomu → snížení katalytické aktivity enzymu → myelotoxicita po podání azathioprinu •analýza genotypu TPMT je před zahájením podávání azathioprinu doporučována zejména u dětských pacientů s akutní lymfoblastickou leukemií, protože v případě deficitu TPMT je u pacientů nutné z důvodu toxicity odložit cyklus chemoterapie a tudíž je u nich potom horší prognóza • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Farmakogenetika •Polygenní dědičnost •digoxin, nortryptylin, fenylbutazon, prokainamid, salicyláty, propanolol – zvýšené riziko trombózy po HAK u KS •odchylná reakce na léky u různých etnických skupin – zpomalená inaktivace etanolu u severoam. Indiánů a Eskymáků • • • • • •vyšší aktivita ADH vede k vyšší tvorbě acetaldehydu – nevolnost •nízká aktivita a ALDH u asiatů „asijský flush“ •polymorfizmy v genech pro enzymy - 50-60% podíl na alkoholismu •mtb tolerance - mikrosomální oxidace (MEOS), p450, kataláza • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg ↑NADH→zhoršená přeměna laktátu na pyruvát→mtb acidóza Farmakogenetika •Proteiny iontových kanálů •geny kódující proteiny Na a K iontových kanálů (geny skupiny LQTS) •nalezeno v nich bylo přinejmenším 35 SNPs • •některé nalezené polymorfizmy vedou k dramatické redukci hustoty kanálů nebo ke změně jejich elektrofyziologie, tj. ke změnám v aktivaci, inaktivaci a regeneraci kanálu •tyto mutantní změny pak mohou vyústit až v patologickou arytmii • •mutace v genu pro Na kanál a souvislosti s rozdílnou odpovědí pacientů na antikonvulziva, rovněž jako s dědičnou dispozicí k epilepsii (sledovány jsou především oblasti vazebných domén) • • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Farmakogenetika •Cytochrom p450 •mtb xenobiotik (zvýšení polarity, konjugace s glutathionem, kys. glukuronovou) •pomalí, střední, rychlí a ultrarychlí metabolizátoři – farmkinetika •CYP 3A4, 2C9 a 2D6… •CYP 3A4 •55 % léčiv, mtb: statiny, blokátory Ca kanálu, makrolidová ATB, steroidy či některá antiarytmika a cytostatika •indukce → selhání p.o. kontraceptiv •inhibice : antiulcerózum cimetidin, řada makrolidových ATB, metronidazol, methylprednisolon, antimykotika, některé blokátory Ca kanálu (diltiazem a verapamil) či grapefruitová šťáva, i některé flavonoidy z vína •indukce:dexamethason, fenobarbital, omeprazol, antidiabetika glitazonové řady či třezalka http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg ↑c p.o. podávaných léčiv až 300krát, kofeinu o 31% image001m https://encrypted-tbn2.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcQKwhaYtJcc6iKq5sSpPmzKYMFKKL4yeGj0TNI0URKOEKZ egIxq1WwzF-A Farmakogenetika •Geneticky podmíněné choroby se změněnou citlivostí na léky •dna – alkohol zhoršuje vylučování kys. močové ledvinami porucha mtb purinů, krystalky kys. močové v kloubech → zánět a degenerace •alkohol - kompetice s tubulární sekrecí kys. močové •podobný účinek chlorothiazidu či furosemidu • • • •hepatální porfyrie – zvýšení syntézy kys. delta-amino-levulinové exacerbace této AD choroby po barbituranech, sulfonamidech, estrogenech (HAK), etanolu, hydantoinu, sedativech http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Farmakogenetika •Geneticky podmíněné choroby se změněnou citlivostí na léky •krvácivé stavy – nemocní s von Willebrandovou chorobou a část hemofiliků http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Figure 4. Catella-Lawson et al. ASA •ireverzibilní inhibice agregace destiček (přenosem acetylové skupiny z molekuly ASA na koenzym) → krvácení • John Robert Vane – 1992 NP • http://www.remedicajournals.com/Acute-Coronary-Syndromes/BrowseIssues/Volume-10-Issue-2/ImageOpen.a xd?aaid=7650 Farmakogenetika •Geneticky podmíněné choroby se změněnou citlivostí na léky •osteogenesis imperfecta – suxamethonium a halothan způsobují horečnatý stav bez maligní hypertermie •familiární dysautonomie AR - sy Riey-Dayův – přecitlivělost na parasympatomimetika – labilní TK při narkóze http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Farmakogenetika •Limity •nezbytnou předchozí identifikací významných genových polymorfizmů na základě dlouhodobých klinických výzkumů •variabilita lékové odpovědi není obvykle dána jen variabilitou jednoho genu (monogenní variabilita) ale variabilitou mnoha genů (multigenní variabilita) •všechno dohromady to pak vytváří „individuální lékovou odpověď“ • •negenetické faktory, tj. faktory vnějšího prostředí znemožňuje předpovědět účinnost nebo bezpečnost léčiva POUZE na základě farmakogenetické informace •genotyp sice není citlivý na vnější faktory, ovšem interakce drug-drug (léčivo s léčivem) a léková odpověď pacienta mohou být těmito vnějšími faktory ovlivněny. •geneticky podmíněné rozdíly nejsou jen mezi jednotlivými osobami, ale i mezi celými populacemi • http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg Farmakogenetika •Výhody individualizace farmakoterapie •maximální účinnost léčby (efektivita farmakoterapie i z hlediska finančního pohledu) •minimální nežádoucí účinky léčby (ochrana zdraví a prevence závažných komplikací) http://www.thecureisnow.org/depimages/genetics/genetherapy.jpg http://www.gyngroup.com/portals/0/img/pharmacogenomics1.jpg