BÍ8313:  Praktikum z genového inženýrství  (jaro 2017)
Úvod do klonováni
masarykova univerzita
přírodovědecká fakulta
ústav experimentální biologie
laboratoř molekulární diagnostiky mikroorganismů
POSTUP KLONOVANIA
gen záujmu
CCATGG GGTACC
GGATCC CCTAGC
PCR pomocou primerov s RE miestami
1
lysFl I [h
lysFl
lysFl
CCATGG GGTACC
GGATCC CCTAGC
PCR pomocou primerov s RE miestami
1
lysFl I [h
+ Ncol,   BamRI;  3 7   °C/16 hod
CCATGG GGTACC
GGATCC CCTAGG
lysFl
+T4 ligáza 22  °C,   60 min
BamUI
NcoT
Tl
promotor
histidinová kotva
kodón
počiatok replikácie
KanR
pET2
EXPRESNÝ VEKTOR
TRANSFORMÁCIA E. COLI
íysřl
-\ E. coli TOPIOF'
BL21(DE3)
EXPRESIA GÉNOV V E.   COLI BL21 (DE3)
E.   coli BL21 (DE3)
E.   coli BL21 (DE3)