Koprologické metody
Mgr. Radka Pecková
MVDr. Ivona Foitová, Ph.D.
Oddělení botaniky a zoologie
Koprologie
soubor metod používaných v parazitologii k diagnostice parazitárních
infekcí z trusu zvířete nebo ze stolice člověka
jedná se o základní, jednoduchou, neinvazivní, časově nenáročnou
a velmi efektivní formu diagnostiky (monitorování zdraví u divokých
zvířat)
principem je detekce vajíček helmintů, jejich larev či dospělců
a exogenních vývojových stádií (oocyst, cyst, spor…) parazitárních
protistů ve vzorcích trusu/stolice
přestože u řady parazitů neprobíhá vývojový cyklus v zažívacím traktu
hostitele, opouští vývojová stádia tělo parazitovaného jedince
trusem/stolicí
Sběr a uchovávání vzorků
čerstvý fekální materiál (z důvodu možného zkreslení výsledku
vzhledem k omezení životaschopnosti trofozoitů parazitických prvoků
nebo rychlému vývoji a líhnutí L1 larev některých nematod během
několika málo hodin či dnů)
vzorky sbíráme do čistých nádob (sáčků), označíme druhem zvířete,
datem odběru, lokalitou, věkem zvířete (důležité pro určování
parazita)
optimální množství materiálu je cca 10 g
vzorky ihned zpracováváme nebo uchováme v chladnu či fixujeme
(chemické směsi obsahující např. etanol, formaldehyd, k. octovou,
k. propionovou, dichroman draselný, glutaraldehyd)
Makroskopická diagnostika
slouží k detekci dospělců (škrkavek, roupů aj.) nebo jejich částí
(článků tasemnic)
zjištění neobvyklého vzhledu, barvy a konzistence, případně příměsi
krve a hlenu v trusu může napovědět přítomnost parazitů
Nativní preparát
přímá prohlídka stolice v kapce fyziologického roztoku, případně se
přidává Lugolův roztok na obarvení cyst prvoků
přítomnost pohyblivých stádií bičíkovců, nálevníků a měňavek
identifikace na základě velikosti, tvaru, povrchových struktur
a typického pohybu
může se nechat zaschnout,
fixovat a barvit ( zvýraznění
bezbarvých parazitů)
Dekantace
resuspendování ve zvoleném objemu vody, sedimentace (desítky
minut, případně centrifugovat), případně přefiltrování přes cedník,
gázu nebo jiný síťovaný materiál
pro lepší orientaci v nativním preparátu
opakováním se docílí pročištění vzorku, přičemž parazitární útvary
neustále procházejí síty a klesají ke dnu nádoby
Tlustý roztěr
diagnostika vajíček helmintů
do kapky vody se rozmíchá určité množství stolice;
směs se rozetře na sklíčku (vrstva má být tak silná, aby přes ni nebylo
možno číst);
roztěr se nechá zaschnout
Koncentrační metody
1) Flotace
metoda využívající rozdílných hustot parazitárních útvarů a použitého
flotačního roztoku (vyšší hustota), takže parazitární útvary vyplavou
na hladinu, odkud se sbírají a přenášejí na mikroskopické sklíčko
preparáty se ihned prohlížejí
detekce menších vajíček a larev hlístic, tasemnic a oocyst kokcidií
např. Sheatherova metoda
Koncentrační metody
Flotace
Koncentrační metody
2) McMasterova kvantifikační metoda
umožňuje vypočítat intenzitu infekce
navazuje na flotační metodu, tekutina z hladiny se vlije do
McMasterovy komůrky, pomocí čtverců v ní obsažených se vypočítá
množství vývojových stádií parazitů v gramu trusu
Koncentrační metody
3) Sedimentace
metody využívající gravitace a hustoty roztoku k tomu, že těžká
vajíčka a cysty sedimentují na dno zkumavky
pro zvýšení rychlosti sedimentace se často používá centrifugace za
použití různých sedimentačně-koncentračních roztoků (složení
použitých směsí umožňuje sedimentaci a čistí koprologický materiál od
balastu, který ztěžuje prohlížení)
detekce cyst prvoků a vajíček helmintů (motolic) a některých hlístic
Koncentrační metody
Sedimentace
Molekulární metody
Izolace DNA
PCR
Elektroforéza
Sekvenování
PRAKTICKÉ POUŽITÍ V TERÉNU
Orangutan Health Project
Parasites diversity
Parasites seasonality
Complex interactions of
animal – diseases – environment
Feeding strategy
Self-medical behaviour