Koprologické metody
Mgr. Radka Pecková
MVDr. Ivona Foitová, Ph.D.
Oddělení botaniky a zoologie

Koprologie
usoubor metod používaných v parazitologii k diagnostice parazitárních infekcí z trusu zvířete nebo
ze stolice člověka ujedná se o základní, jednoduchou, neinvazivní, časově nenáročnou a velmi
efektivní formu diagnostiky (monitorování zdraví u divokých zvířat) uprincipem je detekce vajíček
helmintů, jejich larev či dospělců a exogenních vývojových stádií (oocyst, cyst, spor…)
parazitárních protistů ve vzorcích trusu/stolice upřestože u řady parazitů neprobíhá vývojový
cyklus v zažívacím traktu hostitele, opouští vývojová stádia tělo parazitovaného jedince
trusem/stolicí

Sběr a uchovávání vzorků
učerstvý fekální materiál (z důvodu možného zkreslení výsledku vzhledem k omezení životaschopnosti
trofozoitů parazitických prvoků nebo rychlému vývoji a líhnutí L1 larev některých nematodů během
několika málo hodin či dnů) uvzorky sbíráme do čistých nádob (sáčků), označíme druhem zvířete,
datem odběru, lokalitou, věkem zvířete (důležité pro určování parazita)
uoptimální množství materiálu je cca 10 g
uvzorky ihned zpracováváme nebo uchováme v chladnu či fixujeme (chemické směsi obsahující např.
etanol, formaldehyd, k. octovou, k.  propionovou, dichroman draselný, glutaraldehyd)

Makroskopická diagnostika
uslouží k detekci dospělců (škrkavek, roupů aj.) nebo jejich částí (článků tasemnic) uzjištění
neobvyklého vzhledu, barvy a konzistence, případně příměsi krve a hlenu v trusu může napovědět
přítomnost parazitů

Nativní preparát
upřímá prohlídka stolice v kapce fyziologického roztoku, případně se přidává Lugolův roztok na
obarvení cyst prvoků
upřítomnost pohyblivých stádií bičíkovců, nálevníků a měňavek
uidentifikace na základě velikosti, tvaru, povrchových struktur a typického pohybu
umůže se nechat zaschnout,
u     fixovat a barvit (à zvýraznění
u     bezbarvých parazitů)
u

Dekantace
uresuspendování ve zvoleném objemu vody, sedimentace (desítky minut, případně centrifugovat),
případně přefiltrování přes cedník, gázu nebo jiný síťovaný materiál
upro lepší orientaci v nativním preparátu
uopakováním se docílí pročištění vzorku, přičemž parazitární útvary neustále procházejí síty a
klesají ke dnu nádoby
u

Tlustý roztěr
udiagnostika vajíček helmintů
udo kapky vody se rozmíchá určité množství stolice;
usměs se rozetře na sklíčku (vrstva má být tak silná, aby přes ni nebylo možno číst);
uroztěr se nechá zaschnout

Koncentrační metody
u1) Flotace
u
umetoda využívající rozdílných hustot parazitárních útvarů a použitého flotačního roztoku (vyšší
hustota), takže parazitární útvary vyplavou na hladinu, odkud se sbírají a přenášejí na
mikroskopické sklíčko
upreparáty se ihned prohlížejí
udetekce menších vajíček a larev hlístic, tasemnic a oocyst kokcidií
unapř. Sheatherova metoda

Koncentrační metody
uFlotace
u

Koncentrační metody
u2) McMasterova kvantifikační metoda
u
uumožňuje vypočítat intenzitu infekce
unavazuje na flotační metodu, tekutina z hladiny se vlije do McMasterovy komůrky, pomocí čtverců v
ní obsažených se vypočítá množství vývojových stádií parazitů v gramu trusu
u

Koncentrační metody
u3) Sedimentace
u
umetody využívající gravitace a hustoty roztoku k tomu, že těžká vajíčka a cysty sedimentují na dno
zkumavky
upro zvýšení rychlosti sedimentace se často používá centrifugace za použití různých
sedimentačně-koncentračních roztoků (složení použitých směsí umožňuje sedimentaci a čistí
koprologický materiál od balastu, který ztěžuje prohlížení)
udetekce cyst prvoků a vajíček helmintů (motolic) a některých hlístic
u

Koncentrační metody
uSedimentace


Molekulární metody
uIzolace DNA
uPCR
uElektroforéza
uSekvenování

PRAKTICKÉ VYUŽITÍ V TERÉNU
Orangutan Health Project
Ødiverzita parazitů
Øsezónnost parazitů
Økomplex vztahů živočich –
u        nemoci - prostředí
Øpotravní strategie
Øsebe-medikační chování
dominant male.JPG

Praktická část cvičení
uflotace vzorků odebraných od pískomilů a krys malých (přítomnost cyst Giardia intestinalis a
oocyst Cryptosporidium proliferans)
uvzorky rozmělníme ve hmoždíři, prosejeme přes sítko do zkumavky, centrifugujeme 5 min./2500 otáček
usupernatant slijeme, nalijeme cca 1-2 ml Sheaterova roztoku, rozmícháme, doplníme Sheaterovým
roztokem, centrifugujeme
uz hladiny bakteriologickou kličkou odebereme vyflotovaný materiál, přeneseme na podložní sklíčko,
přikryjeme krycím sklíčkem, prohlížíme pod mikroskopem
u