Koprologické metody
Mgr. Radka Pecková
MVDr. Ivona Foitová, Ph.D.
Oddělení botaniky a zoologie
Koprologie
 soubor metod používaných v parazitologii k diagnostice parazitárních
infekcí z trusu zvířete nebo ze stolice člověka
 jedná se o základní, jednoduchou, neinvazivní, časově nenáročnou
a velmi efektivní formu diagnostiky (monitorování zdraví u divokých
zvířat)
 principem je detekce vajíček helmintů, jejich larev či dospělců
a exogenních vývojových stádií (oocyst, cyst, spor…) parazitárních
protistů ve vzorcích trusu/stolice
 přestože u řady parazitů neprobíhá vývojový cyklus v zažívacím traktu
hostitele, opouští vývojová stádia tělo parazitovaného jedince
trusem/stolicí
Sběr a uchovávání vzorků
 čerstvý fekální materiál (z důvodu možného zkreslení výsledku
vzhledem k omezení životaschopnosti trofozoitů parazitických prvoků
nebo rychlému vývoji a líhnutí L1 larev některých nematodů během
několika málo hodin či dnů)
 vzorky sbíráme do čistých nádob (sáčků), označíme druhem zvířete,
datem odběru, lokalitou, věkem zvířete (důležité pro určování
parazita)
 optimální množství materiálu je cca 10 g
 vzorky ihned zpracováváme nebo uchováme v chladnu či fixujeme
(chemické směsi obsahující např. etanol, formaldehyd, k. octovou,
k. propionovou, dichroman draselný, glutaraldehyd)
Makroskopická diagnostika
 slouží k detekci dospělců (škrkavek, roupů aj.) nebo jejich částí
(článků tasemnic)
 zjištění neobvyklého vzhledu, barvy a konzistence, případně příměsi
krve a hlenu v trusu může napovědět přítomnost parazitů
Nativní preparát
 přímá prohlídka stolice v kapce fyziologického roztoku, případně se
přidává Lugolův roztok na obarvení cyst prvoků
 přítomnost pohyblivých stádií bičíkovců, nálevníků a měňavek
 identifikace na základě velikosti, tvaru, povrchových struktur
a typického pohybu
 může se nechat zaschnout,
fixovat a barvit ( zvýraznění
bezbarvých parazitů)
Dekantace
 resuspendování ve zvoleném objemu vody, sedimentace (desítky
minut, případně centrifugovat), případně přefiltrování přes cedník,
gázu nebo jiný síťovaný materiál
 pro lepší orientaci v nativním preparátu
 opakováním se docílí pročištění vzorku, přičemž parazitární útvary
neustále procházejí síty a klesají ke dnu nádoby
Tlustý roztěr
 diagnostika vajíček helmintů
 do kapky vody se rozmíchá určité množství stolice;
 směs se rozetře na sklíčku (vrstva má být tak silná, aby přes ni nebylo
možno číst);
 roztěr se nechá zaschnout
Koncentrační metody
1) Flotace
 metoda využívající rozdílných hustot parazitárních útvarů a použitého
flotačního roztoku (vyšší hustota), takže parazitární útvary vyplavou
na hladinu, odkud se sbírají a přenášejí na mikroskopické sklíčko
 preparáty se ihned prohlížejí
 detekce menších vajíček a larev hlístic, tasemnic a oocyst kokcidií
 např. Sheatherova metoda
Koncentrační metody
Flotace
Koncentrační metody
2) McMasterova kvantifikační metoda
 umožňuje vypočítat intenzitu infekce
 navazuje na flotační metodu, tekutina z hladiny se vlije do
McMasterovy komůrky, pomocí čtverců v ní obsažených se vypočítá
množství vývojových stádií parazitů v gramu trusu
Koncentrační metody
3) Sedimentace
 metody využívající gravitace a hustoty roztoku k tomu, že těžká
vajíčka a cysty sedimentují na dno zkumavky
 pro zvýšení rychlosti sedimentace se často používá centrifugace za
použití různých sedimentačně-koncentračních roztoků (složení
použitých směsí umožňuje sedimentaci a čistí koprologický materiál od
balastu, který ztěžuje prohlížení)
 detekce cyst prvoků a vajíček helmintů (motolic) a některých hlístic
Koncentrační metody
Sedimentace
Molekulární metody
 Izolace DNA
 PCR
 Elektroforéza
 Sekvenování
PRAKTICKÉ VYUŽITÍ V TERÉNU
Orangutan Health Project
 diverzita parazitů
 sezónnost parazitů
 komplex vztahů
parazit-hostitel
 potravní strategie
 sebe-medikační chování
Praktická část cvičení
 flotace vzorků odebraných od pískomilů a krys malých (přítomnost cyst
Giardia intestinalis a oocyst Cryptosporidium proliferans)
 vzorky rozmělníme ve hmoždíři, prosejeme přes sítko do zkumavky, centrifugujeme
5 min./2500 otáček
 supernatant slijeme, nalijeme cca 1-2 ml Sheaterova roztoku, rozmícháme,
doplníme Sheaterovým roztokem, centrifugujeme
 z hladiny bakteriologickou kličkou odebereme vyflotovaný materiál, přeneseme na
podložní sklíčko, přikryjeme krycím sklíčkem, prohlížíme pod mikroskopem